两种抗补体蛋白对脂多糖致急性肺损伤的保护作用比较研究

目的通过比较两种不同的补体干预方式对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用,进一步认识补体在LPS致ALI中的作用,并探讨补体不同成分在ALI中的作用。方法造模前将抗补体蛋白眼镜蛇毒因子(CVF)和Atrase A分别给予对应组别的大鼠,抑制补体。通过大鼠尾静脉注射LPS(5 mg.kg-1),造成ALI模型。在给予LPS后1、6、12 h采集标本,分别测定血清补体溶血活性、肺含水量、肺组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性,取支气管肺泡灌洗液(BALF)测定细胞数、蛋白含量以及TNF-α和P-selectin的含量,取肺组织行病理切片检查。通过对实验结果的分析比较,评价两种抗补体蛋白对LPS致大鼠ALI的保护作用。结果在LPS致ALI的早期伴随有明显的血清补体活性下降。模型组的血清补体活性在给予LPS后的1 h内下降了47%。采用Atrase A抑制了50%补体活性的实验组其MPO、TNF-α、P-selectin水平未上调。完全去除补体活性的CVF组其MPO活力在1 h时与正常对照组相当,在6、12 h时则上升至与模型组相当,而TNF-α和P-selectin水平则介于模型组和正常组之间。病理切片检查表明两种抗补体蛋白均能有效减轻肺组织病理损伤,其中Atrase A明显优于CVF。结论补体明确参与了LPS致ALI的病理过程。采用抗补体干预能减轻ALI炎症和相关病理损伤,但两种抗补体蛋白的保护作用有明显区别。采用CVF完全去除补体C3、C5-C9仅在ALI早期有明显的保护作用,而仅部分抑制了补体活性的Atrase A则明显优于CVF,提示Atrase A作用的补体成分可能在ALI中具有重要作用。

减少静脉留置针中微量空气进入人体的研究

目的:为了提高护理质量,在留置针输液操作中寻求一种更好的减少微量空气进入人体的排气方法。方法:选择140例输液治疗患者,这些患者均采用的是静脉留置针方法,并将其随机分为研究组62例,使用改进方法,对照组78例,使用传统方法,两组均使用同一材料,研究两种方法的排气后空气残留率。结果:研究组排气后空气残留率为8%,对照组排气后空气残留率为23%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);输液1小时后研究组空气残留率为22%,对照组空气残留率为61%;研究组穿刺后空气进入静脉的发生率为6%,对照组穿刺后空气进入静脉的发生率为19%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:改进方法能有效地控制空气的残留,减少微量空气进入人体,减轻了患者的心理压力,提高了护理质量。

补体旁路激活导致内皮细胞活化及干预研究

补体是免疫系统的重要组成部分，在机体天然防御、免疫调控中发挥重要作用。但补体在诸多病理生理情况下的过度激活会引发炎症和组织损伤，尤其是补体旁路的过度激活在一系列疾病和病征的发生发展中扮演了重要角色。而构成血液天然屏障的血管内皮细胞则不可避免地成为补体激活的靶细胞和效应细胞。因此，

补体旁路过度激活影响体内凝血功能

目的研究补体旁路的过度激活对体内纤溶、凝血及血小板的影响。方法采用尾静脉注射眼镜蛇毒因子(CVF)造成大鼠体内补体旁路的过度激活。检测大鼠给药前和给药后多个时间点血样的补体活性、t-PA、PAI-1、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、P-selectin、PF-4、β-TG、血小板数量及聚集活性的变化,并检测小鼠静脉给予CVF后其尾部出血时间的变化。结果大鼠注射CVF后,血清补体活性在1h内基本消失。t-PA和PAI-1含量在1h内有明显增加,在48 h时间点t-PA/PAI-1比值有明显下降(P<0.01);PT、APTT、TT均略有变化,而血浆FIB含量明显下降;补体旁路的过度激活导致血中P-selectin、PF-4、β-TG明显上调,血小板数量明显减少,凝血酶和花生四烯酸诱导的血小板聚集被明显抑制,而ADP诱导的血小板聚集只受到轻微影响。小鼠尾部出血时间在1 h时明显缩短。结论补体旁路的过度激活能明显影响体内凝血功能,导致血液的高凝状态。

补体旁路激活导致内皮细胞活化和损伤

目的研究补体替代途径的激活对血管内皮细胞活化和损伤的作用。方法采用眼镜蛇毒因子(CVF)与人血清孵育,特异激活补体替代途径。将孵育物作用于人微血管内皮细胞,采用ELISA检测内皮细胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1、MCP-1和IL-8的表达,采用酶活性测定法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,化学发光法检测内皮细胞caspase-8活化信号,MTT法检测内皮细胞增殖活性,并检测内皮细胞释放NO的变化。结果补体旁路激活导致内皮细胞瞬时表达P-selectin,并进而使内皮细胞上调表达E-selectin、ICAM-1、MCP-1和IL-8。内皮细胞经补体激活物刺激后,LDH释放增加、凋亡信号caspase-8活化上调以及NO释放下调,同时,细胞增殖也受到抑制。结论补体旁路激活能诱导内皮细胞活化和损伤,介导血管内皮的生理结构与功能发生变化,从而可能导致相应的炎症和组织损伤。

阿托伐他汀减轻氧化型低密度脂蛋白导致的人微血管内皮细胞活化和损伤

目的研究阿托伐他汀(ATV)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)导致人微血管内皮细胞活化和损伤的抑制作用。方法采用ox-LDL激活和损伤人微血管内皮细胞。损伤前加入ATV与内皮细胞孵育。细胞暴露于ox-LDL后,MTT法测定细胞活力,酶活性测定法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活力,ELISA检测上清中ICAM-1含量,Western blot检测细胞质内NF-κB p65的磷酸化水平,并采用双萤光素酶报告基因检测系统测定NF-κB的核内转录活性。结果 OxLDL能导致人微血管内皮细胞的活化和损伤。ATV的干预可有效减轻ox-LDL对细胞活力的抑制、减少LDH释放、下调ICAM-1分子的表达、减弱细胞质内NF-κB p65的磷酸化、抑制NF-κB核内转录活性的上调。结论 ATV能有效减轻ox-LDL导致的人微血管内皮细胞活化和损伤,其机制可能与抑制NF-κB的磷酸化和核内转录活性有关。

脂多糖激活补体诱导内皮细胞释放黏附分子和凋亡

目的在细胞水平上研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活血清补体对内皮细胞的作用和影响。方法研究LPS激活血清补体的作用方式和特点,观察LPS激活补体对内皮细胞表达黏附分子和凋亡的影响。采用ELISA检测内皮细胞释放P-selectin、E-selectin和ICAM-1的变化,化学发光法检测Caspase-3/7活化情况,SRB法检测LPS激活补体对内皮细胞生长的影响。结果 LPS能够激活血清补体,这种激活呈现量效、时效性。LPS激活血清补体可诱导内皮细胞瞬时明显释放P-selectin,E-selectin和ICAM-1表达也明显上调,同时可导致Caspase-3/7活化。在本实验条件下,LPS激活血清补体对内皮细胞生长未产生抑制。结论 LPS激活血清补体可损伤内皮细胞,导致内皮细胞明显表达黏附分子以及发生凋亡。

补体旁路激活对内皮细胞纤溶功能的影响

补体对机体防御和免疫功能有重要的作用,然而其过度激活会造成炎症和损伤[1]。旁路激活是补体激活的一条重要途径,很多疾病的发生与补体的旁路激活密切相关[2]。激活的补体会对内皮细胞产生作用和影响。内皮细胞具有多种重要的分泌调节功能,而补体旁路激活对内皮细胞纤溶功能影响的研究极少见报道。为进一步探讨炎症相关病征中补体激活与凝血功能异常的相关性,本文开展了补体旁路激活对内皮细胞纤溶功能影响的研究。

脂糖激活补体诱导内皮细胞释放粘附分子和凋亡

目的：在细胞水平上研究脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）激活血清补体对内皮细胞的作用和影响，进一步探讨临床上常见的细菌感染释放内毒素引发炎症的作用和机理，为相关临床防治策略、新药研发提供有益的思路和有价值的参考。方法：研究LPS激活血清补体的作用方式和特点，观察LPS激活补体对内皮细胞表达粘附分子和凋亡的影响。

阿托伐他汀钙对过氧化氢致内皮细胞损伤的保护作用

目的研究阿托伐他汀钙对过氧化氢(H2O2)致人微血管内皮细胞HMEC损伤的保护作用。方法采用H2O2损伤HMEC,研究阿托伐他汀钙对H2O2损伤的保护作用。用倒置相差显微镜观察细胞形态,采用酶活性测定法检测细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH),用ELISA法检测培养上清中ICAM-1及P-selectin的含量,MTT法检测细胞活力。结果 H2O2刺激HMEC后,细胞形态明显改变,细胞收缩,间隙变大;LDH释放明显增加(P<0.01);细胞活力明显降低(P<0.01)。用阿托伐他汀钙预处理后,细胞形态改变明显减轻,LDH释放降低(P<0.01),细胞活力增加(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙对H2O2所致的内皮细胞损伤有保护作用。

补体旁路激活产物刺激内皮细胞NF-κB、p38MAPK、JAK2通路活化及抑制剂的干预研究

研究补体旁路激活产物刺激人微血管内皮细胞NF-κB、p38MAPK、JAK2通路活化的作用及相关抑制剂对其活化的干预作用。采用眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)特异激活血清补体旁路。将旁路活化的血清作用于人微血管内皮细胞,通过ELISA测定NF-κB、p38MAPK及JAK2的活化情况,分别采用上述3个通路的抑制剂PDTC、SB203580、AG490干预其活化及黏附分子ICAM-1的表达。结果显示,补体旁路激活产物能导致人微血管内皮细胞JAK2、p38MAPK、NF-κB通路活化,分别在刺激2,15,30 min后,分别检测到3个通路的活化高峰;PDTC、SB203580、AG490可分别抑制NF-κB、p38MAPK、JAK2的活化。AG490对内皮细胞活化后的ICAM-1蛋白表达有明显的抑制作用,PDTC、SB203580对ICAM-1表达没有明显影响。表明AG490对JAK2通路的抑制可有效下调内皮细胞ICAM-1的表达,提示JAK2通路有可能是补体相关炎症的潜在干预靶点。

第四届全国慢性阻塞性肺疾病学术会议纪要

中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组、中国慢性阻塞性肺疾病联盟与《中华结核和呼吸杂志》编辑委员会联合主办、贵州省人民医院和贵州省呼吸疾病研究所协办的第四届全国慢性阻塞性肺疾病学术会议于2009年7月24—28日在美丽的贵阳拉开了序幕，来自全国各地的呼吸病学专家、学者近600人参加了此次会议。大会针对近年来COPD临床、基础等科研成果及最新进展进行了交流。中国工程院院士、中华医学会会长、《中华结核和呼吸杂志》总编辑钟南山院士，中华医学会呼吸病学分会主任委员刘又宁教授，中华医学会呼吸病学分会候任主任委员王辰教授，中华医学会呼吸病学分会副主任委员康健教授莅临会议并给予指导；中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组的全体成员与来自全国各地的呼吸专家共聚一堂，深入研讨了COPD的临床诊治与基础研究等问题。