研究生免疫学实验教学改革与探索

免疫学实验教学是培养研究生科研思维和动手能力的重要实验平台,面对免疫学新技术的出现以及研究生培养新的要求,通过预先设定的实验项目,查阅资料及文献后撰写实验计划,根据实验计划在教师指导下独立完成实验,书写实验论文等形式的实施,实现了提高研究生综合运用免疫学基本知识和技能的水平,熟悉了免疫学基本技术在科研中的应用,提高了免疫学实验教学质量,为培养高素质、创新型人才开辟了有效的途径。

构建“以学生为主体”的本科医学免疫学实验教学模式

21世纪高等医学教育的任务是培养具有深厚的基础理论知识、扎实的实践操作技能、积极的创新思维能力的综合人才。实验教学作为高等医学教育的重要组成部分,作为理论联系实际的桥梁,在培养医学生综合素质和创新能力方面有着重要的作用。

基质金属蛋白酶在类风湿关节炎免疫致病机制及信号转导中的研究进展

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMPs）是一组在结构上具有极大同源性、能降解细胞外基质蛋白的内肽酶的总称,因为含有金属离子锌、钙而得名[1].包括膜型的MMP在内,该家族迄今已发现20余个成员,根据其发现顺序可分为MMP-1～MMP-19,按其作用底物和结构不同又可分为5类：胶原酶类（MMP-1、MMP-8、MMP-13）,明胶酶类 （MMP-2、MMP-9）,基质分解素类 （MMP-3、MMP-7、MMP-10, MMP-11）,膜型金属蛋白酶类 （MT-MMP-14、MT-MMP-15、MT-MMP-16、MT-MMP-17）及其他（MMP-12、MMP-18、MMP-19等）.本文就MMPs的结构、生物学功能、表达调控以及在类风湿关节炎（RA）发病机制中的作用作一综述.

空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗对小鼠免疫原性和保护性研究

目的:研究空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗的免疫原性和保护性。方法:健康雄性昆明小鼠分为实验组和对照组。实验组设pcDNA3.1(-)-peb1A组3个剂量和壳聚糖-pcDNA3.1(-)-peb1A组3个剂量;对照组设空载体pcDNA3.1(-)(100μg/100μl)组和生理盐水(NS)组,各组均采用小鼠股四头肌注射法。在第0、10、20天免疫,于每次免疫后第10天采集各组小鼠血清,以间接ELISA法检测血清中特异性IgM、IgG的含量。分离各组小鼠脾淋巴细胞包被细胞培养板,以细胞ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞CD20、CD21表达水平。设空肠弯曲菌液灌胃攻击免疫后小鼠,检测肠道分泌液细菌培养数量。结果:裸DNA组和壳聚糖-DNA组各组特异性IgG水平均高于两对照组(P<0.05)。裸DNA组和壳聚糖-DNA组小鼠脾淋巴细胞CD20、CD21表达水平均高于两对照组(P<0.05),壳聚糖-DNA组高于裸DNA组(P<0.05)。肠道分泌液细菌培养结果细菌指数裸DNA组的低于两对照组;佐剂DNA组低于裸DNA组。结论:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性和保护作用,壳聚糖能增强pcDNA3.1(-)-peblA的免疫原性,有望成为空肠弯曲菌基因疫苗的候选佐剂。

重组hIL-10联合MTX对AA大鼠IL-1β、TNF-α含量变化和影像学变化研究

目的:以重组人白细胞介素-10(human interleukin-10,h IL-10)及其联合甲氨碟呤(MTX)作用佐剂性关节炎大鼠模型,检测血清IL-1β、TNF-α含量的变化情况,研究重组h IL-10联合MTX治疗佐剂性关节炎大鼠的效果。方法:AA大鼠造模后,用测量体重、足肿胀度、关节炎指数及组织病理学来评价造模是否成功,各药物处理AA大鼠模型后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清IL-1β、TNF-α的含量。用放射学检查来评估AA大鼠后足关节损伤的程度。结果:各治疗组IL-1β、TNF-α含量比模型组水平明显下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P<0.05),联合用药组对AA大鼠血清IL-1β、TNF-α有明显的抑制作用,影像学检查提示IL-1β、TNF-α水平与大鼠足骨关节的损伤程度成正相关,联合用药组治疗后骨侵蚀评分最低。结论:各治疗组对佐剂性关节炎大鼠血清中细胞因子IL-1β、TNF-α有抑制作用,这种抑制作用与骨关节影像学改变显著相关。联合用药组能有效降低AA大鼠的IL-1β、TNF-α水平,改善AA大鼠足关节损伤的治疗作用。

基于RGSE模式的本科免疫学实践教学改革的初探

教育部在＂十一五＂教育规划纲要中明确提出,高等医学教学的主要目的是培养基础理论扎实、实践操作熟练和创新意识突出的复合型人才。这需要相关教学理论、教学模式和内容的不断改革和创新,以适应当前社会对医学人才的需求[1]。

猪脾转移因子的制备和生物学活性研究

目的:采用冻融-透析法制备猪脾转移因子,并对其理化性质以及免疫学生物学活性、生物安全性进行初步检定。方法:采用低温匀浆反复冻融新鲜的猪脾脏、无菌离心匀浆脾脏组织液,取上清液透析制备转移因子;以改良Lowry法分别检测多肽含量,并进行理化指标、无菌试验、热原质试验及其生物学活性检测。结果:冻融-透析法制备猪脾转移因子的理化性状符合《中国生物制品》的要求;无菌试验、热原质试验均为阴性;安全试验合格;淋巴细胞转化试验和E花环形成试验证实其具有刺激淋巴细胞增殖生物学活性。结论:成功制备了猪脾脏转移因子,其各项理化指标符合生物制品规程的要求,同时具有较好的非特异性免疫学的生物学活性。

空肠弯曲菌DNA疫苗构建及其疫苗免疫程序研究

目的:构建空肠弯曲菌peb1A基因真核表达载体,探讨DNA疫苗不同免疫程序的免疫效果。方法:以重组pET28a(+)-peb1A质粒为模板,将空肠弯曲菌peb1A基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染COS-7细胞中表达,Western blot鉴定表达蛋白;昆明小鼠随机分组:设空白对照组、空载体对照组、pcDNA3.1(-)-peb1A实验组,用ELISA法检测免疫后的昆明小鼠血清IgG和IgM抗体水平。结果:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经双酶切和PCR鉴定,构建正确。peb1A基因测序结果与GenBank中peb1A基因序列一致。重组质粒成功转染COS-7细胞,并能正确表达重组蛋白。裸DNA组IgG水平均高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。同一剂量短时间(0、10、20天)免疫程序优于长时间(0、15、25、35天)免疫程序(P<0.05)。结论:成功构建空肠弯曲菌真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A,其经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性,短时间免疫程序免疫效果好。

吲哚胺-2,3双加氧酶与乳腺癌免疫耐受关系的研究进展

乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤,占女性新发恶性肿瘤的30%,且发病率呈逐年上升趋势。研究表明,吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)在乳腺癌疾病进展、肿瘤耐药及预后中发挥作用,了解IDO在乳腺癌中的作用机制对临床治疗乳腺癌具有重要意义,本文简要综述了IDO和乳腺癌的关系研究概况和进展。

昆虫抗菌肽免疫调控作用及机制研究进展

昆虫抗菌肽是昆虫体内经诱导产生的具有多种生物活性的小分子物质,是昆虫先天免疫系统的重要效应因子,具有抗感染、抗肿瘤及免疫调节等功能。现已发现多种不同类别的昆虫抗菌肽,如来自天蚕蛾或者柞蚕蛾体内的天蚕素类抗菌肽、来自蜣螂体内的防御素类抗菌肽以及来自果蝇体内的脯氨酸类和来自家蚕体内的甘氨酸类抗菌肽。目前对昆虫抗菌肽抗感染、抗肿瘤作用已有较多研究报道,但对昆虫抗菌肽免疫调控作用及相关机制研究则鲜少报道。现已发现,昆虫抗菌肽具有激活免疫细胞,增强NK细胞、细胞毒性T淋巴细胞活性,诱导细胞因子产生,抑制炎性细胞因子和炎性介质的作用,且其免疫调节作用与Toll样受体通路、核转录因子-κB信号通路和丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关。文章针对不同类别(鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目)昆虫抗菌肽的免疫调控作用及通过多种信号通路参与免疫调控的机制作一综述,以期为该领域深入研究提供文献资料。

自身免疫模型小鼠T细胞受体可变区β链(TCR Vβ)偏向取用研究进展

T细胞是机体的主要免疫细胞,且在适应性免疫中起到主要作用。而T细胞受体(TCR)是T细胞表面特异性受体,是识别抗原的主要部位;TCR具有多样性和特异性,其中,最具多样性的是T细胞受体β链可变区(TCR Vβ),TCR Vβ的研究可为临床疾病的诊断和治疗提供新的思路和方向。TCR Vβ家族在各种疾病的动物模型的研究中具有重要的意义和应用价值,本文将对Vβ亚家族偏向取用在小鼠模型中的研究进展进行综述。

后疫情时期医学免疫学课程思政融入的思考和探索

目的:探讨后疫情时代背景下,以培养高素质、卓越医学类专业人才为导向的医学免疫学课程思政融入的思考、设计及初步实践效果评价。方法:以医学免疫学课程为载体、立德树人为根本任务设计课程思政,围绕课程内容特点,分析疫情时期的课程思政融入教学现状,提出“一根本、两方面、三针对、四落实”的思路开展教学改革,并设计调查问卷,分析学生对课程思政融入的教学效果反馈。结果:通过分析来自临床、护理及助产等专业的同学对目前免疫课程思政融入的评价情况,80.99%的同学认为课程思政非常好和较好,可明显增强学生的国家意识、社会责任感、科学素养、创新意识及自我保护能力;同时也发现学生更喜欢通过临床案例分析、小组讨论及线上线下教师讲授等形式融入思政内容。结论:经初步的教学评价,在医学免疫学课程中施行“一根本、两方面、三针对、四落实”的课程思政融入方式,很好地实现了以点到面、助力大范围课程思政教学改革的目的,可有效地将价值塑造、知识传授和能力培养三者有机融合,达到“培养优秀、高素质、卓越医学类专业人才”的思政育人效果,为后疫情时代的课程思政教学提供借鉴和参考。

黑水虻抗菌肽诱导条件优化及粗提物活性研究

采用不同诱导方法、不同诱导剂量及不同诱导时间诱导黑水虻Hermetia illucens L.幼虫产生抗菌肽,通过研磨提取法提取幼虫抗菌肽粗提物,并对所提取粗提物进行抑菌活性的比较研究,以优化黑水虻幼虫抗菌肽的诱导条件,为黑水虻抗菌肽的分离纯化提供最佳的实验方法。结果表明,不同龄期黑水虻幼虫产生抗菌肽的抑菌活性不同,最佳诱导龄期为5龄;不同诱导方法产生抗菌肽对大肠杆菌抑菌活性不同,大肠杆菌菌液针刺浸泡60s,诱导后饲养24h提取抗菌肽抑菌活性最好,其次为超声波100W诱导20min产生抗菌肽抑菌活性,但二者活性相比差异不显著;大肠杆菌菌液、金黄色葡萄球菌菌液注射诱导、金黄色葡萄球菌菌液针刺浸泡诱导及40w超声波诱导所产生抗菌肽虽有一定的抑菌效果但与前两种方法相比差异显著。

P13K/Akt信号通路及其在鼻咽癌发生发展中的研究进展

鼻咽癌是头颈部发病率较高且最为常见的恶性肿瘤,具有很大的地域分布特点[1],东南亚国家发病率较高,在我国以华南地区居多[2]。研究[3]表明,男性发病率明显高于女性。鼻咽癌的原发灶较为隐蔽,早期发病不明显,导致大多数确诊的鼻咽癌患者均已到中晚期。

空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A诱导的T细胞活化增殖研究

目的探讨空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)pcDNA3.1(-)-peb1A疫苗免疫昆明种小鼠后T细胞活化增殖状态。方法重组质粒CJ pcDNA3.1(-)-peb1A免疫昆明种小鼠后,取其脾淋巴细胞,应用ELISA法检测其膜表面分子CD3、CD4、CD8、CD25和CD28。结果检测结果显示:CD3检测,佐剂DNA组高于裸DNA组,在第10天有显著性差异(P<0.05);CD8检测,佐剂DNA组高于裸DNA组,在第10、20天均有显著性差异(P<0.05),裸DNA组也高于两对照组,但仅在第20天有显著性差异(P<0.05);CD25检测,裸DNA组高于NS组,但仅在第10天有显著性差异(P<0.05),佐剂DNA组高于裸DNA组,也仅在第20天有显著性差异(P<0.05);CD4及CD28检测,佐剂DNA组高于裸DNA组,在第10、20天均有显著性差异(P<0.05);在第10、20天各脾淋巴细胞膜表面分子检测,佐剂DNA组高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。结论 CJ pcDNA3.1(-)-peb1A疫苗能够有效地诱导T细胞活化增殖。

重组人IL-24联合顺铂体外抗肺癌细胞生长的实验研究

目的探讨重组人白细胞介素-24(rhIL-24)联合顺铂(DDP)对人肺腺癌A549细胞的体外抑制效应及对A549细胞凋亡、细胞周期的影响。方法 rhIL-24、DDP及rhIL-24+DDP干预A549细胞,用CCK-8法检测A549细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 rhIL-24联合DDP作用24 h对人肺腺癌A549细胞增殖抑制率为32.8%,与单独DDP组比较有显著性差异(P<0.05);流式细胞仪检测rhIL-24联合DDP作用24 h对人肺腺癌A549细胞凋亡率为24.9%;细胞周期检测中rhIL-24作用A549细胞24 h后S期细胞增多。结论 rhIL-24能抑制A549细胞增殖,联合DDP组效果优于单独用药组,具有化疗增敏效应;rhIL-24能诱导A549细胞凋亡并能影响细胞周期。

非专职淋巴组织部位T细胞亚群研究进展

近年来随着免疫学基础研究和临床多学科合作的进展,以及细胞、分子研究领域多项技术的革新,越来越多的临床研究和基础实验结果发现,在肝脏、肺脏、小肠组织、扁桃体、皮肤、肿瘤部位等非专职淋巴组织中存在着独特的T细胞亚群和相关分子,其来源、分化、克隆/寡克隆增殖等生物学特性同机体＂专职免疫组织/器官＂的全身循环免疫系统之间,既有着显著的区别,又保持一定的联系。＂

GeXP检测rhIL-24联合DDP对人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡相关基因的实验研究

目的:利用多基因遗传表达分析系统(GeX P)探讨重组人白细胞介素-24(rhI L-24)联合顺铂(DDP)诱导人肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞6个凋亡相关基因的变化。方法:用rhI L-24、DDP及rhI L-24+DDP干预A549/DDP细胞,应用多基因遗传表达分析系统(GeX P)同时检测Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase3、Rb与P53等6个凋亡相关基因。结果:rhI L-24蛋白可引起A549/DDP细胞Bax基因、Caspase3基因、Rb基因转录上调;Bcl-2基因、Survivin基因转录下调,但抑癌基因P53变化无规律,rhI L-24联合DDP后Bax、Survivin、Rb表达较单独rhI L-24组变化更加显著。结论:rhI L-24蛋白可通过上调Bax,下调Bcl-2、Survivin,激活Caspase3,上调抑癌基因Rb诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡。

银屑病T细胞应答及TCRCDR3谱系研究进展

银屑病是一种与免疫应答异常有关的慢性复发性炎症性疾病,其发病机制至今未完全阐明。目前普遍认为T细胞介导的细胞免疫功能紊乱在银屑病发生及持续发展中发挥了重要作用。本文将从T细胞应答及TCR CDR3谱型分布特征入手,对TCR偏向及CDR3组库特征和银屑病发病的关系进行综述,为银屑病的发病机制研究和个体化治疗提供新思路。

重组hIL-10对AA大鼠T淋巴细胞及IL-17A的影响研究

目的:以重组人白细胞介素-10(human interleukin-10,h IL-10)及其联合甲氨碟呤(MTX)作用佐剂性关节炎大鼠模型,检测T淋巴细胞亚群及IL-17A水平的变化情况,研究重组hIL-10及其联合MTX治疗佐剂性关节炎大鼠的效果。方法:用IL-10、MTX以及IL-10+MTX处理AA大鼠模型,用流式细胞仪测定各组大鼠血液中CD4^+T细胞与CD8^+T细胞比值,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清IL-17A的含量。结果:各治疗组CD4^+淋巴细胞总数与CD4^+/CD8^+值不同程度下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。各治疗组IL-17A水平有不同程度下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P<0.05),联合组与IL-10组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:重组hIL-10能下调AA大鼠血液中CD4^+T细胞的数量及CD4^+/CD8^+比值,降低血清中IL-17A水平,联合组较IL-10组对血清中IL-17A影响更显著,提示重组hIL-10联合MTX在治疗类风湿关节炎中能更好地发挥作用。