猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查与RT-PCR鉴定

对贵州省11个猪场出现的疑似猪繁殖与呼吸综合征病例进行流行病学调查和病原RT-PCR鉴定,结果表明,发病仔猪主要表现高热,死亡率为40.35%(642/1 591);3个种猪场的待产母猪群发生繁殖障碍,流产率为8.11%(38/469);成年猪群发病率为24.47%(162/662),死亡率为4.35%(30/662);感染猪群PRRS血清抗体平均阳性率为28.12%(45/160)。对病死猪病料进行PRRS病原核酸鉴定,其平均检出率为84.44%(38/45),变异毒株试剂盒检测显示,11个临床发病猪场病例是由变异毒株引起的高致病性猪繁殖与呼吸综合征。

C型产气荚膜梭菌肠毒素基因的克隆与序列分析

研究参照国外发表的产气荚膜梭菌肠毒素全基因序列设计合成1对特异性引物，采用PCR技术对C型产气荚膜梭菌贵州分离株（CP2株）肠毒素基因进行扩增，将扩增产物连接到pMD18-T载体，并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序。结果：获得的基因序列全长960bp，编码319个氨基酸。同源性分析结果表明贵州分离株CP2株与产气荚膜梭菌参考株肠毒素基因序列的核苷酸同源性为99．4％99．8％，推导氨基酸同源性为99．1％～99．7％。

产气荚膜梭菌cpe^+菌株的筛选与鉴定

参考相关资料,针对产气荚膜梭菌肠毒素基因(cpe)设计合成1对特异性引物,对34株贵州分离株进行PCR扩增,并将扩增产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序和分析。结果在34株产气荚膜梭菌贵州分离株中有1株C型菌株扩增出与预期大小相一致的目的片段,经克隆测序后,该片段大小为233 bp,其与产气荚膜梭菌参考株肠毒素基因序列的核苷酸同源性为99.6%~100%,推导氨基酸同源性为98.7%~100%,表明所扩增产物为产气荚膜梭菌的肠毒素基因片段。本试验筛选鉴定出1株产气荚膜梭菌cpe+菌株,为今后进一步探讨产气荚膜梭菌性食物中毒机制奠定了基础。

2种疫病感染情况下猪瘟母源抗体消长规律的测定

为了确定2种疫病感染情况下仔猪猪瘟疫苗的首免日龄，采用ELISA方法，测定了不同日龄仔猪的猪瘟母源抗体，并分析其消长规律。结果显示，隐性感染PRRSV的免疫猪瘟疫苗（6头份／头）母猪所产仔猪的猪瘟母源抗体阳性水平在10-14d为100.0％（25／25），15-19d为81.5％（22／27），20-24d为77.8％（21／27），25-29d为67.7％（21／31），30-34d为58.6％（17／29），35-39d为50.0％（16／32）；而感染过SFV的猪场的母猪所产仔猪母源抗体阳性水平在5d、10d、15d和20d均为100.0％（20／20），至30d抗体阳性水平骤降为80.0％（16／20）。根据母源抗体消长规律，确定了隐性感染PRRSV的猪瘟疫苗免疫母猪所产仔猪的首免日龄为20-24d；而感染过SFV猪场的母猪所产仔猪为30-35d。