猪带绦虫六钩蚴45W-4BX的高效表达、纯化及活性分析

截去猪带绦虫六钩蚴45W-4B基因的N端信号肽和C端17个疏水氨基酸序列形成45W-4BX。设计特异性表达引物,PCR扩增目的片段,经BamH和EcoR酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞。用酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆,测序证明阅读框是否正确。用IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳,Western blot分析其活性。包涵体经纯化、透析复性后作为包被抗原检测囊虫猪和囊虫病人血清中的4B抗体。结果表明,截断的4BX(351bp)基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为相对分子质量40000的融合蛋白,并能被囊虫病人血清所识别。ELISA检测表明,囊虫病人血清中含有高滴度的4B抗体,所以45W-4BX的表达产物有可能作为候选抗原用于囊虫病的诊断和免疫预防。

猪带绦虫六钩蚴TS018基因的克隆和表达

囊虫和绦虫病在中国大部分地区是一个重要的公共卫生问题,对人的健康危害很大.猪囊尾蚴感染率也较高,每年造成的经济损失达20亿元.囊虫病的免疫诊断和预防是一个难度很大的课题.主要原因是抗原成分复杂且不能大量生产.通过寻找免疫相关基因,在体外克隆并表达该基因,用表达产物作为抗原进行免疫和诊断无疑是一个新的研究方向和热点.……