硬叶兜兰菌根真菌的分离及培养特性研究

采用单菌丝团法分离硬叶兜兰菌根真菌,纯化后,用打孔法培养菌株并观察形态特征并测定生长速度,初步鉴定了8株内生真菌(DJYYDL001、DJYYDL003、DJYYDL004、DJYYDL006、DJYYDL008、DJYYDL009、DJYYDL011、DJYYDL015)。结果表明:单菌丝团法分离出的菌丝团在恒温培养12h后镜检及吸取萌发菌丝团为最佳时间。没有经过升汞处理的根段菌丝团污染率最大,而处理2～3min后根段的菌丝团污染率最小。

天麻种子自然萌发和生长特性

为了揭示乌天麻和红天麻种子自然萌发和生长发育特性,建立野生萌发菌收集方法,采用4℃冷藏、室温贮藏、新鲜种子3种不同贮藏方式的红天麻和乌天麻种子在原生地播种,通过不同时间取样,观察统计种子的萌发率、死亡率和萌发生长指数。结果表明,天麻种子6月播种,8月有较高的萌发率,9月种子萌发生长指数高;不同贮藏方式下的天麻种子其萌发率、死亡率、生长指数差异显著;常温贮藏种子萌发生长指数显著小于4℃冷藏种子与新鲜种子,4℃冷藏种子与新鲜种子之间萌发生长指数相近。因此在6月选择新鲜种子或短时间冷藏种子播种有利于种子的萌发,在9月利于采样,可以获得理想的萌发菌分离材料。

不同处理对天麻种子保存时活力的影响

目的:研究不同处理方式对天麻种子保存时活力的影响,探索天麻种子的长期有效保存方法,为天麻种质资源的保护做前期研究。方法:采收成熟红天麻蒴果后,采用真空冻干、玻璃化包埋、脱脂棉包裹等方式处理天麻种子后再进行不同温度的保存,利用TTC染色和拌菌播种检测天麻种子的活力。结果:一年后检测种子活力,室温、4℃保存时天麻种子含水量越低,种子活力越高,且显著性高于其它处理;低温或超低温保存时,5%的肌醇能有效避免低温对种子的伤害;同时天麻蒴果的果荚对种子保存有一定的益处。结论:与降低贮藏温度相比,可能降低天麻种子的含水量对于天麻种子活力的保持更有效;同时天麻种子贮藏的安全含水量远小于5%;利用非穿透防冻保护剂进行天麻种子的低温、超低温长期有效保存是可行的。

利用cDNA-SRAP技术分析天麻与蜜环菌共生时差异表达基因片段

目的:探索天麻与蜜环菌共生时的分子调控机制。方法:以红天麻与蜜环菌共培养时不同形态的白麻作为研究材料,利用cDNA-SRAP技术分析红天麻在与蜜环菌共生前后的差异表达基因。结果:被侵染的白麻在转录水平获得53条特异的差异条带,未被侵染白麻为64条。从被侵染白麻的差异表达基因片段S-TDFs中选取稳定的31个片段进行TA克隆和序列比对分析,按照功能预测可分为7类,即能量与代谢、转录调控、细胞膜通透性、自交不亲和性、染色质重塑、抗性相关及未知功能基因。部分S-TDFs荧光定量(qPCR)结果也与cDNA-SRAP表达谱结果一致。结论:cDNA-SRAP技术适宜分析天麻与蜜环菌共培养时差异表达基因,可作为研究二者共生分子调控机制的前期有效手段;能量和代谢方面的S-TDFs在分子水平上验证了天麻的生活史离不开蜜环菌。

黔产白及中糖苷类化学成分研究

目的研究白及Bletilla striata中的糖苷类化学成分。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20和半制备液相色谱等现代分离方法和技术对其化学成分进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果从黔产白及95%乙醇提取物中分离得到了13个糖苷类化合物,分别鉴定为1-methyl-3-phenylpropyl-β-D-glucopyranoside(1)、1-(4-β-Dglucopyranosyl oxybenzyl) 4-ethyl (2R)-2-isobutylmalate(2)、3′,5-dimethoxy-bibenzyl-3-O-β-D-glucopyranoside(3)、syringaresinol mono-β-D-glucoside (4)、 4-O-(6′-O-glucosyl-p-coumaroyl)-4-hydroxybenzylalcohol (5)、(4-hydroxyphenyl)methyl-β-Dglucopyranoside(6)、4-methylphenyl-β-D-glucopyranoside(7)、benzyl-β-D-glucopyranoside(8)、phenyl-β-D-glucopyranoside(9)、4-[(acetyloxy) methyl] phenyl-β-D-glucopyranoside(10)、batatasin III-3-O-glucoside(11)、天麻素(12)、4-(4-β-D-glucopyranosyloxybenzyl)-(2R)-2-isobutylmalate(13)。结论化合物1是新天然产物,化合物3~6是首次从该植物中分离得到,化合物2、7~13为首次从白及属植物中分离得到。