微小RNA-7缺乏对DSS诱导小鼠急性溃疡性结肠炎模型外周免疫细胞组成的影响

目的本研究旨在探讨微小RNA-7(miR-7)对于采用葡聚糖硫酸钠盐(DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠外周免疫器官脾脏和肠系膜淋巴结(MLNs)中免疫细胞比例的影响,并初步探讨其生物学意义。方法实验中采用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)转基因小鼠,利用DSS诱导建立UC模型,进而观察其脾脏和MLNs形态、重量、细胞总数及病理组织学变化;利用流式细胞术(FCM)检测小鼠外周免疫器官脾脏和MLNs中CD19^(+)B细胞、CD8^(+)T细胞和CD4^(+)T细胞等适应性免疫细胞及固有免疫细胞(Gr-1^(+)中性粒细胞、CD11b^(+)细胞、NK1.1^(+)T细胞、CD11c^(+)树突状细胞、F4/80^(+)巨噬细胞、γδT细胞)的比例并计算细胞绝对数。结果与野生型(WT)UC模型小鼠相比,miR-7KD的UC模型小鼠的脾脏和肠系膜淋巴结形态、体积明显增大,重量显著增加(P<0.05),细胞总数显著增高(P<0.05)。HE染色结果显示,较WT UC模型小鼠组,miR-7KD UC模型小鼠组的脾窦扩张充血,脾小结减小;肠系膜淋巴结显示淋巴滤泡明显增大,髓质区和皮质区扩张。在miR-7基因敲除小鼠中,脾脏和MLNs中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD19^(+)B细胞的细胞数量均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);同时,固有免疫细胞Gr-1^(+)中性粒细胞、CD11b^(+)细胞、CD11c^(+)树突状细胞、F4/80^(+)巨噬细胞和γδT细胞数均明显增加(P<0.05)。结论miR-7敲减显著改变小鼠外周免疫器官脾脏和MLNs中病理组织学结构和免疫细胞的组成,这表明miR-7可能通过调节外周免疫细胞变化来介导UC的病理损伤进程,为深入研究UC等炎症性疾病的发病机制提供了有力的支持。这一发现不仅强调miR-7在免疫反应中的重要性,还为未来治疗策略的制定提供了潜在的理论基础。

NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞体外生长的影响

目的探讨过表达NDUFA4对人结直肠癌细胞体外生长的影响及其机制。方法将p-NDUFA4重组质粒(p-NDUFA4组)和p-Cont对照质粒(p-Cont组)体外分别转染人结直肠癌HCT116细胞;采用Real-timePCR和Westernblot检测细胞中NDUFA的表达;CCK-8法和克隆形成实验分别检测HCT116细胞增殖活性和克隆形成能力;实时荧光定量PCR法检测HCT116细胞中CDK2、CDK3、CDK4、CDK6的mRNA水平;Westernblot法检测细胞中蛋白总AKT、ERK1/2以及磷酸化AKT(p-AKT)、ERK1/2(p-ERK1/2)的表达水平。结果与p-Cont对照组相比,p-NDUFA4组中NDUFA4的表达水平显著升高(均P<0.01);细胞增殖和克隆形成能力明显增强(均P<0.05);CDK2、CDK3等的mRNA水平显著上调(均P<0.05);p-NDUFA4组中p-AKT和p-ERK1/2蛋白的表达水平明显上调(均P<0.05)。结论过表达NDUFA4能明显促进人结直肠癌细胞的体外生长,其机制可能与AKT和ERK信号通路的变化相关。

间歇性禁食与肿瘤细胞免疫的研究进展

间歇性禁食(IF)可引起机体能量代谢过程变化,改善健康状态并影响多种疾病的进程。新近研究显示,间歇性禁食能改变肿瘤细胞能量代谢,抑制其生长并影响机体肿瘤细胞免疫应答。此外,抗PD-1单抗为代表的免疫检查点抑制剂(ICB)疗法会改善肿瘤微环境中T细胞的葡萄糖利用率,提示IF与ICB联合使用在临床肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用前景。本文综述了IF与肿瘤细胞免疫的相关研究进展并讨论了仍待阐明的科学问题,以期为IF在临床肿瘤免疫治疗中的应用提供帮助。

微小RNA-30家族的研究进展

微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一类由20~22个核苷酸组成的非编码小分子RNAs,通过碱基互补配对的方式,在转录后水平调控目的基因的表达。新近研究显示,微小RNA-30(miR-30)家族在组织器官发育和临床疾病过程中发挥重要调控作用。本文中,我们综述了miR-30家族在不同组织器官发育和临床疾病发生中作用的研究进展。

反义寡核苷酸下调miRNA-21表达对人结肠癌模型体内生长的作用

目的探讨反义寡核苷酸(ASOs)下调微小RNA-21(miR-21)表达的效果及其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠皮下种植瘤生长的影响。方法常规建立人HCT116结肠癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部分别注射p-miR-21-ASOs质粒和p-Cont质粒(100微克/只),并观察肿瘤生长变化。HE染色法观察肿瘤组织形态学变化;免疫组织荧光法检测Ki-67蛋白的表达;实时荧光定量PCR法检测miR-21成熟体及周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK3、CDK4及CDK6的表达;Westernblot法检测总Akt、ERK1/2、p-Akt、p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果与p-Cont组相比,p-miR-21-ASOs组肿瘤生长显著受到抑制(P<0.05);肿瘤细胞大面积坏死、Ki-67表达显著减少(P=0.0074);miR-21和CDK2、CDK3、CDK4及CDK6的表达均显著下调(均P<0.05);肿瘤组织中p-Akt和p-ERK1/2蛋白表达下调(P<0.05)。结论ASOs下调miR-21表达可以显著抑制人结肠癌细胞的体内生长。

Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化的作用

目的Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4(NDUFA4)在人结直肠癌发生中的作用和机制尚未阐明。文中旨在探讨NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将p-NDUFA4重组质粒(p-NDUFA4组)和空载对照质粒(对照组)体外分别瞬时转入人结直肠癌HCT116细胞;利用Real-timePCR和Western blot 检测各组细胞中 NDUFA4 的表达;划痕实验、Transwell 小室迁移实验检测细胞的迁移能力变化;实时荧光定量 PCR 法检测 MMP2、MMP9、CXCR4 等表达;Western blot 检测 Twist、Snail、E-cadherin 等表达;免疫荧光法检测细胞中 E-cadherin 和 Vimentin 蛋白的表达。结果p-NDUFA4组 NDUFA4-mRNA、NDUFA4蛋白相对表达量[(1.94±0.08)%、(1.07±0.12)%]较对照组([ 0.96±0.15)%、(0.6±0.05)%]明显上调(P<0.05)。p-NDUFA4 组细胞的体外迁移能力、细胞迁移率([ 54.36±4.08)%、(1.85±0.10)%]较对照组([ 29.51± 3.17)%、(0.99±0.12)%]明显升高( P<0.01)。p-NDUFA4 组肿瘤细胞转移相关因子 MMP2、MMP9、CXCR4、间质标志物 N-cadherin、Vimentin,及转录相关因子 Snail、Twist 的 mRNA 表达较对照组显著上调,上皮标记分子 E-cadherin mRNA 明显下调(P<0.01)。结论过表达NDUFA4能明显促进人结直肠癌细胞EMT的发生。

下调NDUFA4对人结直肠癌SW480细胞体外生长的影响

目的探讨下调NDUFA4对人结直肠癌SW480细胞体外生长的影响,并初步探讨其机制。方法将NDUFA4-RNAi质粒(p-NDUFA4组)和对照质粒(p-Cont组)体外分别瞬时转入人结直肠癌SW480细胞;利用Real-time PCR和Western blot检测细胞中NDUFA4的表达;CCK-8(cell counting kit-8)法和克隆形成实验分别检测SW480细胞增殖活性和克隆形成能力;Real-time PCR测SW480细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)2、CDK3,CDK4、CDK6的mRNA水平;Western blot检测细胞中AKT、ERK1/2以及磷酸化AKT(p-AKT)、ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达水平。结果与p-Cont组相比,p-NDUFA4组中NDUFA4的表达水平显著降低(P<0.05);细胞增殖和克隆形成能力明显减弱(P均<0.05);此外,细胞周期依赖性蛋白激酶CDK3,CDK4的mRNA水平均显著下调(P<0.05);最后,p-NDUFA4组中细胞磷酸化AkT和磷酸化ERK1/2蛋白的表达水平明显下调(P<0.01)。结论下调NDUFA4能明显抑制人结直肠癌SW480细胞的体外生长,这可能与AKT、ERK信号通路的变化相关。

Villin1启动子调控miR-7-Sponge真核表达载体的构建及其对小鼠炎症性肠炎模型的影响

目的构建绒毛蛋白(Villin1)启动子调控的miR-7海绵体序列(简称miR-7 Sponge)的真核表达载体,观察其对小鼠炎症性肠病(IBD)模型病理损伤的影响。方法荧光原位杂交(FISH)检测葡聚糖硫酸钠盐(Dextran sulfate sodium salt,DSS)作用后小鼠结肠组织中miR-7的水平及定位情况;抽提小鼠结肠组织基因组DNA,PCR扩增Villin1启动子序列,纯化该产物并经Kpn I/Mlu I双酶切,克隆入pGL3-Basic载体,构建pGL3-Basic-Villin1启动子真核表达载体(p-V);随后将p-V和miR-7-Sponge(化学合成)分别经Mlu I/Xho I双酶切、连接,构建pGL3-Villin1-miR-7-Sponge真核表达载体(命名为p-V-miR-7sp),通过酶切和测序鉴定载体。通过2%DSS喂养野生型(WT)小鼠7 d,3 d水恢复,建立IBD小鼠模型,分别在建模的第2,4,6天通过尾部静脉注射p-V和p-V-miR-7sp载体进行治疗;Real-time PCR检测心、肝、肾、淋巴结及结肠组织中miR-7的表达,观察小鼠结肠形态和长度的变化,H&E染色分析小鼠结肠组织病理结构及炎症损伤变化。结果(1)酶切和测序结果显示成功构建p-V-miR-7sp真核表达载体;(2)Villin1启动子调控的miR-7-Sponge真核表达载体可特异降低结肠组织中miR-7的表达水平(P<0.05);(3)与对照组比,p-V-miR-7sp治疗组IBD模型小鼠结肠长度明显增加;H&E染色显示结肠组织中淋巴细胞浸润明显减少,隐窝结构轻微破坏,其损伤明显减轻。结论Villin1启动子调控的miR-7-Sponge真核表达载体不仅特异降低结肠组织中miR-7水平且明显减轻IBD模型小鼠的病理损伤。

甲状腺转录因子-1:结构、表达、功能及与疾病的关系

甲状腺转录因子-1(TTF-1/NKx2.1)是NKx2组织特异性转录因子家族成员之一,表达在内胚层起源的甲状腺滤泡、甲状旁腺、肺泡上皮及外胚层起源的间脑等少数组织器官中,参与上述器官的分化发育和功能维持。近来的研究显示,TTF-1的异常表达与多种人类疾病发生密切相关,且可作为相关疾病诊治的潜在新靶标。该文综述了TTF-1的结构、表达调控、生物学功能及其在人类相关临床疾病发生发展中的作用,并展望了今后研究的方向,以期加强对TTF-1的系统了解,促进相关研究的进展,最终有助于临床疾病发生机制认识和防治新策略的开发。