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邻苯二甲酸二丁酯和苯并(a)芘染毒对大鼠T淋巴细胞亚群比例及Foxp3表达水平的影响
1
作者
李冬琴
陈静
+4 位作者
聂雪
罗密
王敏
李宽
杨光红
《社区医学杂志》
CAS
2023年第9期448-455,共8页
目的探讨分析邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和苯并(a)芘(BaP)的免疫损伤机制,通过DBP和BaP亚慢性染毒大鼠,分析T淋巴细胞亚群比例以及叉头螺旋翼状转录因子3(Foxp3)表达水平的变化情况,为DBP、BaP所致的免疫损伤机制研究及预防提供研究线索。...
目的探讨分析邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和苯并(a)芘(BaP)的免疫损伤机制,通过DBP和BaP亚慢性染毒大鼠,分析T淋巴细胞亚群比例以及叉头螺旋翼状转录因子3(Foxp3)表达水平的变化情况,为DBP、BaP所致的免疫损伤机制研究及预防提供研究线索。方法将80只健康的SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组(给予玉米油)、DBP 50 mg/kg组(标为DBP_(50)组)、DBP 250 mg/kg组(标为DBP_(250)组)、BaP 1 mg/kg组(标为BaP_(1)组)、BaP 5 mg/kg组(标为BaP_(5)组)、DBP 50 mg/kg+BaP 1 mg/kg组(标为DBP_(50)+BaP_(1)组)、DBP 250 mg/kg+BaP 5 mg/kg组(标为DBP_(250)+BaP_(5)组),每组10只大鼠,采取灌胃方式进行染毒,连续染毒90 d,其中每周连续染毒6 d。染毒结束后提取及纯化大鼠淋巴细胞,采用流式细胞术检测淋巴细胞内各亚群比例;反转录实时荧光聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测Foxp3 mRNA的表达水平;蛋白质免疫印迹(WB)检测淋巴细胞内Foxp3蛋白的表达水平;实验结果用x±s表示,组间比较用方差分析,进行两两比较,若方差齐性采用Tukey’s检验,若方差不齐性采用Games-Howell检验,并采用Pearson相关分析Treg淋巴细胞比例与Foxp3蛋白表达水平、CD4^(+)T、CD8^(+)T淋巴细胞比例的相关性。结果DBP、BaP染毒后,CD4^(+)T淋巴细胞比例溶剂对照组(18.433±1.718)%与DBP_(50)组(6.873±0.645)%、DBP_(250)组(3.747±0.153)%、BaP_(1)组(6.303±0.746)%、BaP_(5)组(6.257±0.471)%、DBP_(50)+BaP_(1)组(6.933±0.628)%、DBP_(250)+BaP_(5)组(3.637±0.137)%比较,差异有统计学意义,P值分别为0.018、0.019、0.013、0.020、0.019和0.019;BaP_(5)组(6.257±0.471)%与DBP_(250)+BaP_(5)组(3.637±0.137)%比较,差异有统计学意义,F=194.80,P=0.034。CD8^(+)T淋巴细胞比例溶剂对照组(32.870±1.035)%与DBP_(50)组(29.703±0.319)%、DBP_(250)组(18.160±1.185)%、BaP_(1)组(30.707±1.320)%、BaP_(5)组(19.393±0.833)%、DBP_(50)+BaP_(1)组(30.247±1.665)%、DBP_(250)+BaP_(5)组(11.397±1.108)%比较,差异有统计学意义,P值分别为0.004、<0.001、0.035、<0.001、0.013、<0.001;DBP_(250)+BaP_(5)组(11.397±1.108)%与DBP_(250)组(18.160±1.185)%、BaP_(5)组(19.393±0.833)%比较,差异有统计学意义,F=151.50,均P值<0.001。Treg细胞比例溶剂对照组(4.150±0.101)%与DBP_(50)组(7.057±0.656)%、DBP_(250)组(8.257±0.633)%、BaP_(1)组(6.810±0.514)%、BaP_(5)组(7.963±0.337)%、DBP_(50)+BaP_(1)组(7.300±0.501)%、DBP_(250)+BaP_(5)组(11.921±0.652)%比较,差异有统计学意义,均P<0.001;DBP_(250)+BaP_(5)组(11.921±0.652)%与DBP_(250)组(8.257±0.633)%、BaP_(5)组(7.963±0.337)%比较,差异有统计学意义,F=74.98,均P<0.001。Foxp3 mRNA表达水平的溶剂对照组(1.000±0.094)与DBP_(250)组(1.654±0.007)、DBP_(250)+BaP_(5)组(2.224±0.111)比较,差异有统计学意义,P值分别为0.029和0.001;DBP_(50)+BaP_(1)组(1.412±0.007)与DBP_(50)组(1.257±0.010)、BaP_(1)组(1.233±0.015),差异有统计学意义,P值分别为<0.001、0.003;DBP_(250)+BaP_(5)组(2.224±0.111)与DBP_(250)组(1.654±0.007)、BaP_(5)组(1.480±0.009)比较,差异有统计学意义,F=177.50,P值分别为<0.001、0.031。Foxp3蛋白的溶剂对照组(0.162±0.013)与DBP_(50)组(0.286±0.031)、DBP_(250)组(0.376±0.016)、BaP_(1)组(0.243±0.021)、BaP_(5)组(0.275±0.029)、DBP_(50)+BaP_(1)组(0.397±0.031)、DBP_(250)+BaP_(5)组(0.472±0.024)比较,差异有统计学意义,P值分别为<0.001、<0.001、0.001、<0.001、<0.001、<0.001;DBP_(50)+BaP_(1)组(0.397±0.031)与DBP_(50)组(0.286±0.031)、BaP_(1)组(0.243±0.021)%比较,差异有统计学意义,均P<0.001;DBP_(250)+BaP_(5)组(0.472±0.024)与DBP_(250)组(0.376±0.016)、BaP_(5)组(0.275±0.029)比较,差异有统计学意义,F=62.40,均P<0.001。进一步做Pearson相关性分析显示,DBP、BaP联合染毒时,Treg淋巴细胞比例与Foxp3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.969,P=0.001),与CD4^(+)T、CD8^(+)T淋巴细胞比例呈负相关关系,r值分别为-0.863和-0.879,P值分别为0.027和0.021。结论DBP、BaP暴露可能通过上调Foxp3的表达水平,促进Treg细胞分化和发育,使其比例增大,从而抑制CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的比例,此可能是DBP、BaP对淋巴细胞产生免疫抑制作用的机制之一,DBP、BaP可能通过此过程造成免疫系统的损伤,也为DBP、BaP的防治提供依据。
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关键词
邻苯二甲酸二丁酯
苯并(A)芘
淋巴细胞
叉头螺旋翼状转录因子3
原文传递
题名
邻苯二甲酸二丁酯和苯并(a)芘染毒对大鼠T淋巴细胞亚群比例及Foxp3表达水平的影响
1
作者
李冬琴
陈静
聂雪
罗密
王敏
李宽
杨光红
机构
贵州
医科大学公共卫生与健康学院
贵州省疾病预防控制中心中心办公室
出处
《社区医学杂志》
CAS
2023年第9期448-455,共8页
基金
国家自然科学基金(81760578)
2019年国家级大学生创新创业训练计划项目(201910660038)。
文摘
目的探讨分析邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和苯并(a)芘(BaP)的免疫损伤机制,通过DBP和BaP亚慢性染毒大鼠,分析T淋巴细胞亚群比例以及叉头螺旋翼状转录因子3(Foxp3)表达水平的变化情况,为DBP、BaP所致的免疫损伤机制研究及预防提供研究线索。方法将80只健康的SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组(给予玉米油)、DBP 50 mg/kg组(标为DBP_(50)组)、DBP 250 mg/kg组(标为DBP_(250)组)、BaP 1 mg/kg组(标为BaP_(1)组)、BaP 5 mg/kg组(标为BaP_(5)组)、DBP 50 mg/kg+BaP 1 mg/kg组(标为DBP_(50)+BaP_(1)组)、DBP 250 mg/kg+BaP 5 mg/kg组(标为DBP_(250)+BaP_(5)组),每组10只大鼠,采取灌胃方式进行染毒,连续染毒90 d,其中每周连续染毒6 d。染毒结束后提取及纯化大鼠淋巴细胞,采用流式细胞术检测淋巴细胞内各亚群比例;反转录实时荧光聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测Foxp3 mRNA的表达水平;蛋白质免疫印迹(WB)检测淋巴细胞内Foxp3蛋白的表达水平;实验结果用x±s表示,组间比较用方差分析,进行两两比较,若方差齐性采用Tukey’s检验,若方差不齐性采用Games-Howell检验,并采用Pearson相关分析Treg淋巴细胞比例与Foxp3蛋白表达水平、CD4^(+)T、CD8^(+)T淋巴细胞比例的相关性。结果DBP、BaP染毒后,CD4^(+)T淋巴细胞比例溶剂对照组(18.433±1.718)%与DBP_(50)组(6.873±0.645)%、DBP_(250)组(3.747±0.153)%、BaP_(1)组(6.303±0.746)%、BaP_(5)组(6.257±0.471)%、DBP_(50)+BaP_(1)组(6.933±0.628)%、DBP_(250)+BaP_(5)组(3.637±0.137)%比较,差异有统计学意义,P值分别为0.018、0.019、0.013、0.020、0.019和0.019;BaP_(5)组(6.257±0.471)%与DBP_(250)+BaP_(5)组(3.637±0.137)%比较,差异有统计学意义,F=194.80,P=0.034。CD8^(+)T淋巴细胞比例溶剂对照组(32.870±1.035)%与DBP_(50)组(29.703±0.319)%、DBP_(250)组(18.160±1.185)%、BaP_(1)组(30.707±1.320)%、BaP_(5)组(19.393±0.833)%、DBP_(50)+BaP_(1)组(30.247±1.665)%、DBP_(250)+BaP_(5)组(11.397±1.108)%比较,差异有统计学意义,P值分别为0.004、<0.001、0.035、<0.001、0.013、<0.001;DBP_(250)+BaP_(5)组(11.397±1.108)%与DBP_(250)组(18.160±1.185)%、BaP_(5)组(19.393±0.833)%比较,差异有统计学意义,F=151.50,均P值<0.001。Treg细胞比例溶剂对照组(4.150±0.101)%与DBP_(50)组(7.057±0.656)%、DBP_(250)组(8.257±0.633)%、BaP_(1)组(6.810±0.514)%、BaP_(5)组(7.963±0.337)%、DBP_(50)+BaP_(1)组(7.300±0.501)%、DBP_(250)+BaP_(5)组(11.921±0.652)%比较,差异有统计学意义,均P<0.001;DBP_(250)+BaP_(5)组(11.921±0.652)%与DBP_(250)组(8.257±0.633)%、BaP_(5)组(7.963±0.337)%比较,差异有统计学意义,F=74.98,均P<0.001。Foxp3 mRNA表达水平的溶剂对照组(1.000±0.094)与DBP_(250)组(1.654±0.007)、DBP_(250)+BaP_(5)组(2.224±0.111)比较,差异有统计学意义,P值分别为0.029和0.001;DBP_(50)+BaP_(1)组(1.412±0.007)与DBP_(50)组(1.257±0.010)、BaP_(1)组(1.233±0.015),差异有统计学意义,P值分别为<0.001、0.003;DBP_(250)+BaP_(5)组(2.224±0.111)与DBP_(250)组(1.654±0.007)、BaP_(5)组(1.480±0.009)比较,差异有统计学意义,F=177.50,P值分别为<0.001、0.031。Foxp3蛋白的溶剂对照组(0.162±0.013)与DBP_(50)组(0.286±0.031)、DBP_(250)组(0.376±0.016)、BaP_(1)组(0.243±0.021)、BaP_(5)组(0.275±0.029)、DBP_(50)+BaP_(1)组(0.397±0.031)、DBP_(250)+BaP_(5)组(0.472±0.024)比较,差异有统计学意义,P值分别为<0.001、<0.001、0.001、<0.001、<0.001、<0.001;DBP_(50)+BaP_(1)组(0.397±0.031)与DBP_(50)组(0.286±0.031)、BaP_(1)组(0.243±0.021)%比较,差异有统计学意义,均P<0.001;DBP_(250)+BaP_(5)组(0.472±0.024)与DBP_(250)组(0.376±0.016)、BaP_(5)组(0.275±0.029)比较,差异有统计学意义,F=62.40,均P<0.001。进一步做Pearson相关性分析显示,DBP、BaP联合染毒时,Treg淋巴细胞比例与Foxp3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.969,P=0.001),与CD4^(+)T、CD8^(+)T淋巴细胞比例呈负相关关系,r值分别为-0.863和-0.879,P值分别为0.027和0.021。结论DBP、BaP暴露可能通过上调Foxp3的表达水平,促进Treg细胞分化和发育,使其比例增大,从而抑制CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的比例,此可能是DBP、BaP对淋巴细胞产生免疫抑制作用的机制之一,DBP、BaP可能通过此过程造成免疫系统的损伤,也为DBP、BaP的防治提供依据。
关键词
邻苯二甲酸二丁酯
苯并(A)芘
淋巴细胞
叉头螺旋翼状转录因子3
Keywords
dibutyl phthalate
benzo(a)pyrene
lymphocytes
forkhead helix winged transcription factor 3
分类号
R322.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R992 [医药卫生—毒理学]
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邻苯二甲酸二丁酯和苯并(a)芘染毒对大鼠T淋巴细胞亚群比例及Foxp3表达水平的影响
李冬琴
陈静
聂雪
罗密
王敏
李宽
杨光红
《社区医学杂志》
CAS
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