贵州省不明原因肺炎病例严重急性呼吸综合征相关检测情况分析

目的对贵州省2012年不明原因肺炎病例的SARS相关病原进行检测,具体病原包括冠状病毒HCOV-OC43型、HCOV-229E型、HCOV-HKU1型和HCOV-NL63型。方法提取病毒核酸RNA,通过实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)方法检测冠状病毒。结果在收集到的118份不明原因肺炎病例标本中,冠状病毒HCOV-OC43型阳性有4份。其它型别未检出。结论贵州省不明原因肺炎病例中存在冠状病毒感染,其型别为冠状病毒HCOV-OC43型。阳性率为3.39%。

贵州省一起人间布鲁氏菌病疫情高危人群调查及分离菌遗传特征分析

目的对贵州省威宁县一起人间布鲁氏菌病(布病)疫情中的高危人群进行血清学调查、菌株分离鉴定及遗传特征分析,为布病疫情的防控提供科学依据。方法采用试管凝集试验对疫情中的高危人群进行抗体检测,采用虎红平板试验检测该起疫情中羊群血液布鲁氏菌抗体情况,分离抗体阳性患者病原菌进行培养,应用传统方法和布鲁氏菌属特异性PCR(BCSP31-PCR)、种/型特异性PCR(AMOS-PCR)对分离菌株进行鉴定,利用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA-16)和多位点序列分型(MLST)对菌株进行分子流行病学特征分析。结果 43名高危人群中布鲁氏菌抗体阳性6名,抽取该疫情羊群血液302份经虎红平板试验检测结果显示,阳性64份,阳性率为21.19%。1名抗体阳性者分离出布鲁氏菌可疑菌,鉴定为羊种生物3型布鲁氏菌,MLVA-16结果显示与布鲁氏菌羊种生物3型聚类最近,MLST分析显示分离菌株为ST8型。结论分离自该起疫情的菌株遗传特征和鉴定结果符合羊种生物3型布鲁氏菌,MLST结果为ST8型。尽管抗体阳性并分离出布鲁氏菌,但是无相关症状,均为布鲁氏菌隐性感染者。疑似因贩运羊只引入疫畜而导致布病疫情,应引起医生、卫生及动物检验检疫等相关部门重视。

应用4℃冰箱分离B型流感病毒

目的探索低温保存狗肾细胞（MDCK）对B型流感病毒分离和增殖的影响。方法复苏冻存的P17代MDCK细胞，传至2～4代后，选择生长状态及形态良好的单层细胞，换新鲜细胞生长液，于4oC保存3d、6d、9d后，在相同培养条件下同时接种流感样病例咽拭子标本。上毒24h后每天观察细胞病变，采用实时荧光PCR相对定量法测定病毒的增殖率，血清学试验测定病毒血凝效价，同时以同一代次常规培养的MD-CK细胞单层为对照。结果（1）细胞病变：与对照相比较，4℃低温保存3、6d的细胞细胞病变无差别，而保存9d的细胞细胞病变快，维持时间短。（2）荧光定量：4℃低温保存3、6d的细胞对流感病毒的增殖（25.86×10^5～30．25×10^6、26．31×10^5～30．54×10^6）与常规分离（24．82×10^5～29．86×10^6）相比无差别，其增值率在10^5～10^6倍之间。而9d的细胞（19．72×10^4～28．34×10^5）则较对照要低，增值率在10^4～10^5倍之间。（3）HA效价：4℃保存3d和6d的细胞分离病毒血凝效价大于1：16的毒株数与常规细胞（10．92±0．79）比较，差异无统计学意义（P〉0．05），而保存9d的细胞分离病毒血凝效价大于1：16的毒株数较正常细胞低并有统计学意义（P〈0．01）。结论4℃低温保存1周内MDCK细胞单层对B型流感病毒的分离和增值无影响。