亚硝酸钠与亚硫酸钠联合毒性对人胚肾细胞HEK-293 Apaf-1信号通路的影响

目的探讨亚硝酸钠与亚硫酸钠联合毒性对人胚肾细胞HEK-293 Apaf-1信号通路的影响。方法取处于对数生长期的HEK-293细胞,用亚硝酸钠、亚硫酸钠染毒。采取3×3析因设计:对照组(0. 0 mmol/L Na2NO2+0. 0 mmol/L Na2SO3)、低亚硝酸钠组(低N,3. 0 mmol/L Na2NO2)、高亚硝酸钠组(高N,12. 0 mmol/L Na2NO2)、低亚硫酸钠组(低S,4. 0 mmol/L Na2SO3)、高亚硫酸钠组(高S,16. 0 mmol/L Na2SO3)、低N低S组(3. 0 mmol/L Na2NO2+4. 0 mmol/L Na2SO3)、低N高S组(3. 0 mmol/L Na2NO2+16. 0 mmol/L Na2SO3)、高N低S组(12. 0 mmol/L Na2NO2+4. 0 mmol/L Na2SO3)、高N高S组(12. 0 mmol/L Na2NO2+16. 0 mmol/L Na2SO3),培养24 h,MTT法检测细胞活力,酶联免疫吸附法测定培养液中Apaf-1、Caspase9和Bax水平。结果低N组存活率略高于对照组(P>0. 05),Bax、Apaf-1和Caspase9蛋白表达水平略低于对照组(P>0. 05);高N组HEK-293存活率低于对照组及低N组(P<0. 01),Bax、Apaf-1和Caspase9蛋白表达水平高于对照组及低N组(P <0. 01);低S组HEK-293存活率低于对照组(P <0. 01),Bax、Apaf-1和Caspase9蛋白表达水平高于对照组(P<0. 01);高S组HEK-293存活率低于对照组及低S组(P <0. 01),Bax、Apaf-1和Caspase9蛋白表达水平高于对照组及低S组(P<0. 01);低N高S组HEK-293存活率低于低N低S组(P<0. 01),Bax、Apaf-1和Caspase9蛋白表达水平高于低N低S组(P<0. 01);高N高S组HEK-293存活率低于高N低S组(P<0. 01),Bax、Apaf-1和Caspase9蛋白表达水平高于高N低S组(P <0. 01);高N低S组HEK-293存活率低于低N低S组(P <0. 01),Bax、Apaf-1和Caspase9蛋白表达水平高于低N低S组(P<0. 01);高N高S组HEK-293存活率低于低N高S组(P<0. 01),Bax、Apaf-1和Caspase9蛋白表达水平高于低N高S组(P<0. 01);在低N低S组剂量组,Apaf-1低于两者单独作用时的水平之和(P<0. 01)。Apaf-1与Bax,Apaf-1与Caspase9正相关关系明显(P<0. 01);Na2NO2与Na2SO3单独作用时均可影响Bax、Apaf-1和Caspase9水平的变化(P<0. 05或P<0. 01);Na2NO2与Na2SO3对Apaf-1的交互作用明显(P<0. 01),对Bax和Caspase9交互作用不明显(P>0. 05)。结论 Apaf-1通路可能参与了Na NO2与Na2SO3致人胚肾细胞HEK-293的凋亡过程;Na2NO2与Na2SO3对Apaf-1存在交互作用,在N低S组表现为拮抗作用。