贵州省2019年甲型H1N1流感重症或死亡病例毒株HA基因特性分析

目的了解贵州省甲型H1N1流感重症或死亡病例毒株HA基因的分子特征,探讨其特异性分子位点,为流感防控提供科学依据。方法采集2019年贵州省甲型H1N1流感重症或死亡病例的28份鼻咽拭子标本进行病毒株的分离,其中13株病毒的HA基因被扩增和测序,利用国家生物技术信息中心或全球禽流感数据共享倡议提供的参考序列和已有的轻症病例毒株序列对HA基因进行生物信息学分析。结果2019年贵州省甲型H1N1流感重症或死亡病例毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为98.0%~100.0%和97.9%~100.0%,分别处于不同次分支;与2019年和既往疫苗株相比,核苷酸和氨基酸同源性分别为98.2%~99.3%、97.1%~98.4%和98.1%~98.9%、97.5%~98.7%;与轻症病例相比,重症或死亡病例毒株共发生了12个位点的突变,其中V312I为共有的突变位点,抗原决定簇突变共涉及到3个区域,毒株QNZ2019YYX和BJ2019WXP发生了2个位点的突变。结论2019年度疫苗株匹配性更高,部分毒株突变涉及到抗原决定簇的2个区域,可能为新的变异株,V3121位点可能为重症或死亡病例毒株的特异性分子位点,需进一步研究和加强实时监测。

贵州省H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因遗传特性分析

目的了解贵州省H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的流行与遗传变异情况,为AIV的防控提供依据。方法统计2018年10月—2019年3月贵州省活禽市场外环境AIV检出情况,对选取的H9N2亚型AIV进行基因组的提取、血凝素(hemagglutinin,HA)基因的RT-PCR扩增与测序,并对获得的HA基因序列进行同源性、遗传进化和关键位点变异分析。结果贵州省活禽市场外环境AIV检出率为52.2%,H9N2占阳性的83.7%。H9N2亚型AIV HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为91.6%~100.0%和91.0%~100.0%,均属于Y280亚系,G57基因型;与致病性相关的裂解位点序列均为PSRSSRGLF和LSRSSRGLF,符合低致病性AIV的分子特征;与宿主特异性相关的受体结合关键位点存在H191N、E198T/A和Q234L三个位点的突变,具有人样受体结合特征;与毒力相关的糖基化位点均具有7个,其中因突变218位点均存在一个糖基化位点缺失,313位点均存在一个增加。与人感染毒株相比关键位点未发生重要突变。结论贵州省活禽市场外环境AIV检出率较高,污染较严重,且以H9N2为优势流行亚型;H9N2亚型AIV均属于Y280亚系,G57基因型,为低致病性AIV,毒株遗传差异在增大,关键氨基酸位点存在变异,具有感染人的风险,故应加强监测该病毒的分子遗传变异情况。

贵州省威宁县2015年至2017年外环境H9N2禽流感病毒神经氨酸酶基因分子特征分析

目的了解贵州省威宁彝族回族苗族自治县(以下简称威宁县)H9N2禽流感病毒的遗传变异情况,为禽流感病毒的防控提供依据。方法随机选取2015至2017年贵州省威宁县城北活禽市场外环境实时PCR初筛H9N2禽流感病毒阳性标本13株,对13株H9N2禽流感病毒进行基因组的提取、神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因的扩增和测序,运用生物信息学软件对NA基因的同源性、遗传进化、颈部缺失位点、糖基化位点、受体结合关键位点和耐药位点变异情况进行分析。结果13株H9N2禽流感病毒的NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为93.0%~100.0%和92.1%~100.0%,均属于DK/HK/Y280/97系,但遗传来源复杂多样。在NA蛋白颈部39~40位点有3株发生谷氨酰胺(Q)天冬酰胺(N)至Q赖氨酸(K)的突变,13株毒株在63~65位点均缺失苏氨酸(T)谷氨酸(E)异亮氨酸(I)3个氨基酸。13株毒株NA蛋白糖基化位点86、146、200和234较稳定,其余糖基化位点均存在数量和位点的变异。唾液酸结合位点的3个区域均有毒株发生突变,其中结合位点区域399~404变异最为活跃。NA蛋白酶活性位点和关键位点均未发生耐神经氨酸酶抑制剂药物的突变。结论贵州省威宁县2015至2017年H9N2禽流感病毒属于DK/HK/Y280/97系,遗传来源复杂多样,NA基因颈部区域位点、糖基化位点和唾液酸受体结合位点发生了不同程度的变异,需进一步加强对H9N2禽流感病毒的持续监测与防控。