OBE教学模式在生物技术制药实验教学中的应用

传统的生物技术制药实验教学已经不能满足生物技术发展的需求。本文以OBE教学模式为理论指导,以加强学生的道德修养、提高学生的创新及论文撰写能力为出发点,对生物技术制药实验课程的实验内容、教学方式和考核方式进行改革。加强了对实验技能及安全意识的培训;增设了综合性实验,强调课中、课后的汇报及交流;注重学生实验报告及论文撰写的规范性、逻辑性;并建立了一个综合性考核方式,对学生的综合素质进行考核。通过以上改革,不仅能培养学生对科研的兴趣,并且还能提高学生的实验技能、写作能力和创新能力,为培养高质量的创新型、应用型人才打下基础。

UPLC-MS/MS法同时测定透骨香中6种成分的含量

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定透骨香中原儿茶酸、表儿茶素、绿原酸、槲皮苷、白珠树苷、滇白珠苷A的含量。方法分析采用Waters BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。采用层次聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)筛选影响药材质量的重要成分。结果6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9982),平均加样回收率98.76%~101.88%,RSD 1.0%~2.5%。透骨香根、地上部分所含成分有较大差异,白珠树苷、表儿茶素、原儿茶酸是质量标志成分。结论该方法准确、高效,可用于透骨香的质量控制。

UPLC-MS/MS法同时测定阿胶中18种核苷、游离氨基酸的含量

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定阿胶中Asp、Guad、Adeno、Arg、Ade、Cyti、Phe、Leu、Ile、Glu、Ser、Gln、Gly、Ala、Hyp、Thr、Pro、Lys的含量。方法分析采用WatersBEHC18色谱柱(2.1mm×50mm,1.7μm);流动相乙腈(含0.1%甲酸)-水;体积流量0.35mL/min;柱温45℃;电喷雾离子源;正离子扫描;多反应监测模式。再采用层次聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘判别分析进行化学模式识别。结果18种核苷、游离氨基酸在各自范围内线性关系良好(r≥0.9990),平均加样回收率98.0%~104.9%,RSD1.6%~4.9%。17批样品聚为2类,2种主成分累积方差贡献率为60.75%,Leu、Phe、Ade和Guad是潜在指标成分。结论该方法稳定可靠,可用于阿胶的质量控制。

荭草花中五种成分在Caco-2细胞中的吸收特性研究

目的 利用Caco-2单层细胞模型研究荭草花提取物的吸收摄取特性。方法 采用UPLC-MS/MS考察荭草花提取物在不同浓度、时间、温度、pH、P-糖蛋白抑制剂(维拉帕米)和环孢菌素A条件下Caco-2细胞的吸收差异。结果 荭草花提取物在Caco-2细胞中的吸收具有浓度和时间依赖性,其中槲皮素等5个成分在摄取90min后逐渐降低;且在37℃条件下吸收最好;槲皮素pH为5条件下,利于其吸收,其余成分均在pH为6有利于吸收;加入P-糖蛋白抑制剂维拉帕米和环孢菌素A后发现,槲皮素和山奈酚受P-糖蛋白抑制剂维拉帕米影响,摄取量明显增加。结论 荭草花提取物中槲皮素等5种成分的吸收机制主要表现为被动扩散,P-糖蛋白参与其槲皮素和山奈酚的摄取过程。

大风子正丁醇部位化学成分的研究

目的研究大风子Hydnocarpus anthelminthica Pierre.正丁醇部位的化学成分。方法大风子60%乙醇提取物的正丁醇部位采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到9个化合物,分别鉴定为anthelminthicol A(1)、腺苷(2)、牡荆素(3)、8-羟基喹啉(4)、柴胡色原酮酸(5)、邻羟基苯甲酸(6)、阿魏酸(7)、胡萝卜苷(8)、对羟基苯甲酸(9)。结论化合物2~7为首次从该属植物中分离得到,化合物9为首次从该植物中分离得到。

UPLC-Q-TOF-MS法分析苗药黑骨藤提取物中的化学成分

目的:建立黑骨藤提取物中化学成分的分析方法,为进一步阐明黑骨藤药效物质基础提供参考。方法:以70%乙醇为溶剂制备黑骨藤提取物。采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)对提取物进行成分分析,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C_(18),流动相为0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈(梯度洗脱),流速为0.25 mL/min;采用电喷雾离子源,在负离子扫描模式下检测。通过碎片离子信息、相关文献以及对照品比对,确定黑骨藤提取物中的化学成分。结果:在黑骨藤提取物中共分离出了23个化合物,并确定了9个化合物。其中,5、8、9、16、17、18、22、23号峰通过与对照品比对分别确定为5-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、杠柳毒苷、杠柳苷元;13号峰通过碎片离子和文献比对推断为(1S,3R,4R,5R)-3-{([2E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-propenoyl]oxy}-1,5-dihydroxy-4-{([2E)-3-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-2-propenoyl]oxy}cyclohexanecarboxylic acid。结论:建立的UPLC-Q-TOF-MS法可以快速、高效、准确地分析黑骨藤提取物中的化学成分。

稳定表达hOAT1的HEK293细胞系的建立及鉴定

目的构建人肾脏近曲小管阴离子转运体1(human organic anion transporter 1,hOAT1)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒,获得稳定表达pEGFP-hOAT1的HEK-293细胞系。方法构建EGFP与hOAT1的融合基因表达载体pEGFP-hOAT1,并利用FuGENE 6转染试剂将其转染至HEK293细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,经G418抗性筛选获得稳定转染细胞株。用RT-PCR法、qRT-PCR法和Western blot技术,检测稳定转染细胞及正常细胞hOAT1 mRNA和蛋白的表达情况,并进一步用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)考察稳定转染细胞的对氨基马尿酸摄取能力,以及丙磺舒对hOAT1的抑制作用。结果使用该文的方法,细胞转染率可达90%。RT-PCR、qRT-PCR、Western blot,以及对氨基马尿酸摄取、丙磺舒抑制实验结果显示,相对于正常组,转染细胞在荧光显微镜下呈绿色荧光,其hOAT1表达均呈阳性(P<0.01);稳定转染细胞的对氨基马尿酸摄取能力明显升高(P<0.05),且丙磺舒对hOAT1有明显的抑制作用(P<0.05)。结论高效快速地建立了稳定高表达hOAT1的HEK293细胞系,为核苷类膦酸类似物这类药物引起的临床剂量依赖性肾毒性的机制研究奠定了模型基础,也为体外研究hOAT1底物或抑制剂的筛选提供了一个便利的工具。

不同来源、不同炮制方法的补骨脂对成骨细胞SaOS-2骨形成功能的影响

目的研究不同来源、不同炮制方法的补骨脂对成骨细胞SaOS-2骨形成功能的影响。方法实验分为补骨脂给药组和对照组,体外培养SaOS-2细胞,给药组分别给予不同批次、不同炮制方法的补骨脂(100 mg/L),四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测成骨细胞的增殖;PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测成骨细胞骨钙素(OTC)及Ca2+含量;茜素红染色法检测细胞矿化结节数。结果与对照组比较,不同来源的补骨脂均能显著促进SaOS-2细胞增殖、分化及矿化,差异均有统计学意义(P<0.05);酒制补骨脂、清炒补骨脂、雷公补骨脂、盐炙补骨脂及补骨脂生品各组的细胞增殖率依次为(118.01±0.38)%、(118.00±0.76)%、(121.01±0.88)%、(120.21±0.78)%、(117.21±0.78)%,ALP活性分别为(909.52±33.44)U/g、(915.45±23.04)U/g、(927.89±23.29)U/g、(938.52±23.94)U/g、(900.52±23.94)U/g,Ca2+的分泌分别为(182.79±5.72)mg/L、(183.74±6.01)mg/L、(185.89±7.23)mg/L、(187.79±6.01)mg/L、(180.79±6.01)mg/L,OTC的分泌分别为(15.41±0.77)μg/L、(15.42±0.56)μg/L、(15.40±0.68)μg/L、(15.58±0.68)μg/L、(15.41±0.68)μg/L,细胞矿化结节数依次为(10.52±0.77)个、(10.55±0.65)个、(10.59±0.47)个、(10.74±0.77)个、(10.50±0.77)个,以上各指标与对照组[(100.00±0.53)%、(411.62±15.46)U/g、(25.25±1.47)mg/L、(11.41±0.63)μg/L、(4.20±0.60)个]相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。雷公补骨脂和盐炙补骨脂的细胞增殖率分别为(121.01±0.88)%、(120.21±0.78)%,明显高于补骨脂生品的(117.21±0.78)%,差异均有显著统计学意义(P<0.01);盐炙补骨脂与补骨脂生品的ALP活性[(938.52±23.94)U/g vs(900.52±23.94)U/g]相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补骨脂药材的来源对其促成骨细胞骨形成的作用无明显影响;补骨脂药材经炮制后促进成骨细胞骨形成的作用较生品更优。

骨康胶囊对SaOS-2人成骨样细胞增殖、分化及矿化的影响

目的:研究骨康胶囊对体外培养的SaOS-2成骨肉瘤细胞增殖、分化及矿化的影响。方法:培养成骨肉瘤细胞SaOS-2,设立对照组、不同浓度的骨康胶囊组(生药浓度为1、10、100、200、400、800 mg/L)及维生素D3组,采用MTT法检测SaOS-2细胞增殖能力;选择10、100及200 mg/L骨康胶囊浓度处理SaOS-2细胞,对-硝基苯磷酸盐法(PNPP法)检测SaOS-2细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,ELISA法检测SaOS-2细胞骨钙素(OTC)和钙离子(Ca^(2+))分泌能力,采用细胞钙茜素红染色法对成骨细胞进行染色、观察SaOS-2细胞矿化能力。结果:与对照组相比,骨康胶囊在体外可以显著促进成骨肉瘤细胞的增殖(P<0.01),当骨康胶囊浓度为200 mg/L时作用最大,此后随着骨康胶囊浓度增大对SaOS-2细胞增殖的促进作用有明显减弱的趋势;在10、100、200 mg/L浓度范围内,骨康胶囊剂量依赖性地增加SaOS-2细胞ALP活性、促进OTC和Ca^(2+)的分泌及细胞矿化结节形成(P<0.05或P<0.01)。结论:骨康胶囊对体外培养的SaOS-2细胞的增殖、分化和矿化有明显的促进作用。

紫金龙氯仿-甲醇组分对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抑制作用

目的探讨紫金龙氯仿-甲醇组分对脂多糖诱导RAW264. 7细胞炎症的抑制作用。方法脂多糖刺激RAW264. 7细胞建立体外炎症模型后,加入不同质量浓度(50、100、200、400 mg/L)紫金龙氯仿-甲醇组分,ELISA法或比色法检测白介素-6 (IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)含有量,Western blot法测定诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2 (COX-2)蛋白表达,以及核转录因子κ转抑制蛋白α(IκBα)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)磷酸化水平。结果紫金龙氯仿-甲醇组分可显著抑制TNF-α、IL-6、IL-1β、NO、PGE2释放(P <0. 05,P <0. 01),下调i NOS、COX-2蛋白水平(P <0. 01),降低p38、JNK、Erk1/2、IκBα磷酸化水平(P <0. 05,P <0. 01)。结论紫金龙氯仿-甲醇组分可有效抑制脂多糖诱导RAW264. 7细胞炎症,其机制可能与抑制NF-κB、MAPKs信号通路激活、减少炎症因子释放有关。

荭草花有效组分在人肠道菌群中体外代谢特征分析

为考察荭草花有效组分在离体人肠道菌群中的代谢特征。通过在离体培养的人肠道菌液中,加入荭草花有效组分,并在厌氧环境下进行培养,孵育的代谢产物采用超高效液相串联电喷雾飞行时间质谱仪进行检测。运用Metabolite ToolsTM分析平台对样品中的代谢产物进行预测分析,结合Mass Defect Filter技术并运用Data Analysis中的Smart Formula功能推测代谢产物化学式。结果表明从药物-肠菌孵育液中共检测出14个代谢产物,主要包括N-p-香豆酰酪胺,N-trans-对羟基苯乙基阿魏酰胺的氢化、氢化羟基化、甲基化羟基化代谢产物,山柰酚的双脱氧、C2-C3双键还原、脱氧氢化代谢产物,槲皮素的羟基化、O-C2键开环裂解脱氧化、C2-C3双键还原O-C2键开环裂解代谢产物,儿茶素的氢化代谢产物和没食子酸的脱羧、甲基化代谢产物。上述结果表明荭草花有效组分在人离体肠道菌群中主要发生还原、氧化、水解Ⅰ相反应和甲基化Ⅱ相反应,为进一步研究其在体内的作用机制提供实验依据。

心脉通软胶囊的质量控制及稳定性考察

目的建立心脉通软胶囊的质量控制方法,考察其稳定性。方法采用薄层色谱法鉴别心脉通软胶囊中的荭草、山楂叶和三七;采用高效液相色谱法对君药荭草中的异荭草素、荭草素进行含量测定;运用加速试验和长期试验方法对心脉通软胶囊的稳定性进行考察。结果薄层色谱法均检出了心脉通软胶囊中的主要药材,异荭草素、荭草素的质量浓度分别在11.05~88.40μg/mL(r=0.9999)和10.83~86.60μg/mL(r=0.9997)范围内与峰面积积分值线性关系良好,且3批心脉通软胶囊经6个月加速试验和24个月长期试验考察,各项指标均符合质量标准要求。结论心脉通软胶囊质量可控,稳定性好。

紫金龙抗炎活性成分的筛选

目的考察紫金龙(AVK)不同提取部位的抗炎活性,筛选出活性成分。方法采用脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞构建体外细胞炎症反应模型,以一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)为活性指标评价紫金龙水组分(AVHC)、乙醇组分(AVEC)、甲醇-水组分(AVMHC)、氯仿-甲醇组分(AVTMC)和氯仿组分(AVTC)抗炎活性,筛选出抗炎有效组分,并从抗炎有效组分中筛选紫金龙的抗炎活性成分。结果除AVHC外,其余各组分均下调了LPS处理后RAW264.7细胞的NO和TNF-α释放量(P<0.05),其中AVTMC的抑制作用最强;从AVTMC中分离到的单体化合物中,Vilmorinine、Vilmorrianine D、Talatisamine和8-deacetyl-yunaconitine等化合物具有降低NO与TNF-α释放量的作用,且8-deacetyl-yunaconitine活性最强。结论 AVTMC是紫金龙抗炎主要有效组分,且从中筛选到4种抗炎活性成分。本研究为该药材的深入开发和质量控制提供了实验依据。

白茄根中绿原酸的含量测定

[目的]建立白茄根中绿原酸的含量测定方法。[方法]采用HPLC建立白茄根中指标成分绿原酸的含量测定方法,对所建立的方法进行了专属性、线性关系考察、精密度、准确度和耐用性等试验。[结果]该研究建立的白茄根中绿原酸含量测定的方法的专属性、线性关系、精密度、准确度和耐用性均符合要求,并成功用于3个批次不同产地白茄根中绿原酸的含量测定,其中绿原酸的含量为0.026%~0.031%。[结论]该方法准确,可用于白茄根的质量控制。

川贝母基因组DNA提取方法的研究

目的通过比较不同方法提取的基因组DNA的质量差异,选择一种可靠、简单且低成本的川贝母基因组DNA提取方法,满足药典中川贝母分子鉴别的要求。方法采用碱裂解法、十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)、十二烷基硫酸钠法(SDS法)、改良SDS法和试剂盒法分别提取川贝母基因组DNA,经蛋白核酸分析仪检测、琼脂糖电泳分析和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法来评价提取基因组DNA的质量。结果除碱裂解法外,CTAB法、SDS法、改良SDS法和试剂盒法均能从川贝母中提取基因组DNA,其中改良SDS法和试剂盒法提取的基因组DNA质量相当,但是改良SDS法成本更低,操作更简单。结论改良SDS法更适用于药典中的川贝母分子鉴别试验。

PBL教学模式在生物技术制药理论课教学中的应用

生物技术制药知识广而散,学生在理解时非常困难。使用PBL教学法进行生物技术制药理论教学后,极大地提高了学生的学习积极性,加深了他们对相关知识的理解,为更好地进行生物技术制药以及相关课程的理论教学提供参考。

白及主要活性成分Militarine对斑马鱼胚胎发育的安全性评价

目的探讨白及主要活性成分Militarine对斑马鱼胚胎发育的影响。方法以受精后小时(hpf)为时间段,将6 hpf的胚胎暴露在不同质量浓度(0.025,0.050,0.100,0.200,0.800,1.600,3.200 g/L) Militarine溶液中,且设置空白对照组,24 h更换1次药液。分别于24,48,72,96,144 hpf时通过显微镜观察斑马鱼胚胎的发育形态,测定24 hpf胚胎尾部自主抽动频率,48 hpf心率,48,72,96 hpf孵化率,72,96,144 hpf死亡率和畸形率。结果除质量浓度为0.025,0.050,0.100 g/L溶液中孵育的胚胎外,其余质量浓度溶液中孵育的胚胎24 hpf尾部抽动数与空白对照组比较有显著差异(P<0.05),且随着质量浓度的增加,斑马鱼胚胎的尾部自主抽动次数减少;除质量浓度为0.025 g/L和0.05 g/L溶液中孵育的胚胎外,其余质量浓度孵育的胚胎与空白对照组比较有显著差异(P<0.01),且随着质量浓度的增加,斑马鱼胚胎的心率变缓;各浓度组胚胎孵化率在不同时间段呈现不同趋势,中间浓度组胚胎的孵化率较高,与空白对照组比较有明显差异(P<0.05);斑马鱼胚胎的死亡率和畸形率均随时间的延长和浓度的增大而逐渐增大。结论初步评价了白及有效成分Militarine对斑马鱼胚胎发育的安全性,为其创新药物研制和临床安全用药提供了参考。

UPLC-Q-TOF-MS/MS分析苗药云实皮的化学成分

目的:建立全面、快速分析苗药云实皮化学成分的方法,为该药质量控制和药效物质基础研究提供参考。方法:采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)。色谱柱为Agilent SB-C18,流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液(梯度洗脱),流速为0.25 mL/min,柱温为30℃,进样量为2μL;电喷雾离子源,正、负离子模式全程扫描,扫描范围为m/z 50~1500,毛细管电压为4.5 kV,雾化气(氮气)压力为1.2 Bar,去溶剂气为氮气,去溶剂气流速为8 L/min,去溶剂气温度为200℃。使用Data Analysis 4.2软件分析各成分峰的碎片离子信息,结合相关文献和对照品质谱图指认云实皮的化学成分。结果:在正离子模式下,共确定并指认9个化合物,峰1、2、3、4、5、6、7、8、9分别为儿茶素、原苏木素B、表儿茶素、没食子酸乙酯、槲皮素、木犀草素、3-去氧苏木查耳酮、异甘草素、亚油酸;在负离子模式下,共确定21个色谱峰,并指认了其中13个,峰3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、15、21分别为儿茶素、短叶苏木酚酸、原苏木素B、表儿茶素、没食子酸乙酯、表儿茶素没食子酸酯、槲皮素、白藜芦醇、苏木查耳酮、木犀草素、3-去氧苏木查耳酮、异甘草素、亚油酸。结论:成功建立了可分析云实皮化学成分的UPLC-Q-TOF-MS/MS法。

白及醇提物中5种主要活性成分的在体肠吸收特征研究

目的:考察白及醇提物中主要活性成分4-(葡萄糖氧基)-肉桂酸葡萄糖氧基苄酯(A1)、2-异丁基苹果酸(A2)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(A3)、二氢菲1(A4)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-O-肉桂酰基-6-O-乙酰基)葡萄糖苷(A5)在大鼠肠道中的吸收动力学特征。方法:以葛根素为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测肠循环液中A1～A5的质量浓度。色谱柱为Acquity UPLC BEH C_(18),流动相为乙腈(含0.1%甲酸)-水(含0.1%甲酸)(梯度洗脱),流速为0.35 mL/min,柱温为45℃,进样量为3μL;采用电喷雾离子源,以多反应监测模式进行正、负离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 593.2→431.1(A1)、m/z 189.0→129.0(A2)、m/z 725.3→457.2(A3)、m/z 347.1→332.1(A4)、m/z 1 059.3→793.1(A5)、m/z 417.0→267.0(内标)。采用大鼠在体肠循环灌流模型,以累计吸收转化率(A)和吸收转化速率常数(Ka)为指标,考察不同剂量白及醇提物(低、中、高剂量分别为166、333、667μg/mL)、胆汁、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂(维拉帕米)、不同肠段对上述5种成分肠吸收的影响。结果:A1、A2、A3、A4、A5检测质量浓度的线性范围分别为0.22～14.00、0.34～21.75、1.99～127.16、0.15～9.75、0.16～10.00μg/mL(r>0.99),定量下限分别为0.22、0.34、1.99、0.15、0.16μg/mL,最低检测限分别为0.028、0.085、0.251、0.035、0.010μg/mL,日内、日间RSD均小于10%,方法回收率为83.60%～106.91%,基质效应不影响待测物的测定。白及醇提物低、中剂量组A1的A、K_a值均显著高于高剂量组,低剂量组A3的A值显著高于中、高剂量组(P<0.05或P<0.01)。不结扎组A1、A3的A、K_a值均显著低于对照组,而A4的A、K_a值均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);P-gp抑制剂组A1、A3的A、K_a值均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。空肠组、回肠组、结肠组A1的A值以及结肠组A1的K_a值,结肠组A2的A、Ka值,回肠组A3的A值,回肠组、结肠组A4的A、K_a值,空肠组、回肠组A5的A值以及空肠组A5的K_a值均显著低于十二指肠组;而空肠组、回肠组、结肠组A3的K_a值均显著高于十二指肠组(P<0.05或P<0.01)。结论:本研究建立的UPLC-MS/MS法专属性强、灵敏度高、操作简便,可用于A1～A5的定量分析及药动学研究。白及醇提物中5种活性成分均为全肠道吸收,且吸收肠段各有不同;A1、A3在肠道中的吸收较多,可能已达饱和;胆汁可抑制A1、A2的肠吸收,但可促进A4的肠吸收;A1～A5可能均不是P-gp的底物。

黑骨藤提取物中3种活性成分在AA模型大鼠体内的药代动力学研究

目的建立同时测黑骨藤提取物中3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸和5-O-咖啡酰基奎宁酸的HPLC-MS/MS分析方法,研究黑骨藤提取物中3种活性成分在佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠体内的药代动力学特征。方法采用弗氏完全佐剂制备AA大鼠模型,于造模d21口服黑骨藤提取物,HPLC-MS/MS法测定AA模型大鼠血浆中3种成分的浓度,葛根素做内标。采用WinNonlin 6.4软件计算药动学参数。结果3种成分的提取回收率和基质效应为81.19%~111.94%,日内和日间精密度的RSD(%)均小于13%,稳定性及线性关系良好,满足生物样品测定要求;3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸和5-O-咖啡酰基奎宁酸的Cmax分别为(144.60±23.13)、(72.07±7.02)、(71.31±23.14)μg·L^-1,Tmax分别为(1.00±0.00)、(1.00±0.00)、(1.33±0.29)h。结论建立的HPLC-MS/MS法专属性强,灵敏度高,快速准确,并成功应用于黑骨藤的药动学研究。