脑动脉内皮细胞缺氧时内皮型一氧化氮合酶基因表达的变化及蛋白激酶C的作用

目的 :研究缺氧时脑动脉内皮细胞 (CAECs)内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)基因表达的变化 ,并探讨可能的分子机制。方法 :分别采用RT -PCR和蛋白质免疫印迹技术检测原代培养的猪脑动脉内皮细胞缺氧 2、6、12、2 4、4 8h后eNOSmRNA和蛋白质表达的变化 ,并观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂对缺氧 2 4h引起的eNOSmRNA和蛋白质变化的影响。加入转录抑制剂放线菌素D后观察缺氧 2 4h对eNOSmRNA稳定性的影响。结果 :缺氧 2h后脑动脉内皮细胞eNOSmRNA和蛋白质表达均增加 ,12h达到高峰 ,约分别为常氧组的 2 5倍和 2 0倍 ,缺氧 4 8h仍高于常氧组。缺氧对eNOSmRNA稳定性无明显影响。选择性PKC抑制剂BIMI(1μmol/L)、G 6 983(1μmol/L)均能降低缺氧2 4h所引起的eNOS基因表达的上调。结论 :脑动脉内皮细胞缺氧时可通过PKC信号途径上调eNOS基因的表达 ,并可能由此介导缺氧时脑血管的扩张反应 ,发挥其神经保护作用。