膜联蛋白A1激活甲酰肽受体2依赖的内皮型一氧化氮合酶途径减轻脓毒症相关肺损伤

目的探讨膜联蛋白A1(ANXA1)是否通过激活甲酰肽受体2(FPR2)依赖的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)途径改善脓毒症相关肺损伤。方法将24只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(Control组)、脂多糖(LPS)诱导肺损伤模型组(LPS组)、LPS+ANXA1模拟肽组(LPS+Ac2-26组)、LPS+ANXA1模拟肽+FPR2抑制剂组(LPS+Ac2-26+WRW4组),每组6只。制模前3 d,LPS+Ac2-26组大鼠经尾静脉注射1 mg/kg Ac2-26,LPS+Ac2-26+WRW4组经尾静脉注射1 mg/kg Ac2-26和2.2 mg/kg WRW4;Control组和LPS组注射等量生理盐水。经气管插管肺内注入5 mg/kg LPS制备肺损伤模型;Control组给予等量生理盐水。制模后48 h麻醉大鼠,取颈动脉血检测氧合指数(OI)。处死后取肺组织,测定湿/干质量(W/D)比值;光镜下观察肺组织病理学变化并进行病理学评分;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β、IL-6、IL-10)、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测eNOS、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达。结果光镜下显示,LPS+Ac2-26组肺组织炎症细胞浸润程度较LPS组减轻,肺泡间隔厚度改善;LPS+Ac2-26+WRW4组肺组织炎症细胞浸润程度较LPS+Ac2-26组加重,肺泡间隔厚度增加。提示ANXA1可明显抑制炎症细胞浸润,改善肺泡间隔厚度;WRW4可逆转ANXA1的肺改善作用。与Control组比较,LPS组OI明显降低,肺组织W/D比值和病理学评分及TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA、MPO水平均明显升高。与LPS组比较,LPS+Ac2-26组OI和肺组织IL-10水平均明显升高,肺组织W/D比值和病理学评分及TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA、MPO水平均明显降低,提示ANXA1可改善肺损伤大鼠的氧合能力,改善肺组织渗漏,减轻水肿,抑制肺组织炎症反应。与LPS+Ac2-26组比较,LPS+Ac2-26+WRW4组OI和肺组织IL-10水平均明显降低〔OI(mmHg,1 mmHg≈0.133 kPa):132.16±24.00比248.67±18.70,IL-10(ng/L):27.30±3.04比36.10±3.92,均P<0.05〕,肺组织W/D比值和病理学评分及TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA、MPO水平均明显升高〔W/D比值:5.29±0.02比4.83±0.02,病理学评分(分):5.00±0.28比2.67±0.52,TNF-α(ng/L):39.80±4.36比32.10±2.15,IL-1β(ng/L):200.00±15.68比152.60±9.74,IL-6(ng/L):181.50±18.02比148.50±7.34,MDA(mmol/mg):82.01±8.22比70.43±5.69,MPO(pg/mg):6.50±0.32比4.60±0.56,均P<0.05〕,提示WRW4可阻断ANXA1的上述改善作用。Western blotting检测结果显示,与Control组比较,LPS组eNOS、iNOS和NF-κB的蛋白表达均明显上调。与LPS组比较,LPS+Ac2-26组eNOS的蛋白表达明显上调(eNOS/β-actin:0.25±0.01比0.14±0.01,P<0.05),iNOS和NF-κB的蛋白表达明显下调(iNOS/β-actin:0.09±0.02比0.12±0.02,NF-κB/β-actin:0.35±0.06比0.59±0.13,均P<0.05),提示ANXA1可激活eNOS通路,下调NF-κB的表达。与LPS+Ac2-26组比较,LPS+Ac2-26+WRW4组eNOS的蛋白表达明显下调(eNOS/β-actin:0.17±0.02比0.25±0.01,P<0.05),iNOS和NF-κB的蛋白表达明显上调(iNOS/β-actin:0.12±0.02比0.09±0.02,NF-κB/β-actin:0.52±0.10比0.35±0.06,均P<0.05),提示WRW4可阻断ANXA1激活eNOS通路的作用。结论ANXA1通过激活FPR2依赖的eNOS途径可以改善脓毒症相关肺损伤。