中医专业胚胎学教学与大众化教育相结合的实践

中医院校胚胎学学时少,学生生物学基础薄弱。我们一直在探索如何在有限学时内让学生掌握更多知识。本文阐述针对不开设妇产科课程的中医专业,通过讲授基本知识,联系日常生活和临床常见疾病为原则的教学方法普及胚胎学知识,为实现精英教育向大众化教育的转轨及适应知识结构的更新做尝试。

朱砂和朱砂安神丸对小鼠肝组织金属硫蛋白表达的影响

目的探讨朱砂及朱砂安神丸中汞对肝组织金属硫蛋白(MT)表达的影响。方法健康小鼠分别ig给予生理盐水、Hg S 0.2 g·kg-1、朱砂0.2和2 g·kg-1、朱砂安神丸1.8 g·kg-1、氯化汞(Hg Cl2)0.032 g·kg-1、甲基汞0.026 g·kg-1,每天1次,连续30 d,取肝组织。用原子荧光光谱法检测肝汞蓄积量,HE染色法观察肝组织病理变化,实时荧光定量PCR法检测肝组织Mt-1基因的表达,免疫组织化学和Western蛋白印迹法检测肝组织MT蛋白的表达,并分析肝汞蓄积量与肝组织Mt-1基因和MT蛋白表达的相关性。结果与正常对照组比较,Hg S、朱砂0.2 g·kg-1和朱砂安神丸组小鼠肝组织汞蓄积量未见明显增高,肝组织Mt-1基因和MT蛋白表达无明显变化,且未见明显病理改变。朱砂2 g·kg-1,Hg Cl2和甲基汞组小鼠肝汞蓄积量明显增高(P<0.05,P<0.01),分别为正常对照组的6.9,82.2和173.1倍;肝组织Mt-1mRNA表达明显增加(P<0.01),分别为正常对照组的3,11和45倍,同时MT蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01);肝组织可见肝细胞水肿,淋巴细胞浸润。肝汞蓄积量与Mt-1基因和MT蛋白表达水平具有正相关性。结论对比不同形式的汞,ig给予小鼠Hg S、朱砂和朱砂安神丸后肝组织汞蓄积量远低于氯化汞和甲基汞;朱砂0.2 g·kg-1和朱砂安神丸未导致肝组织Mt-1基因和MT蛋白表达水平的变化,肝组织亦未出现病理变化。

成年贵州小型猪淋巴结组织形态学观察及免疫组化研究

目的对成年贵州小型猪淋巴结进行形态学观察及免疫组化研究,为其用于建立人类免疫相关疾病模型提供参考。方法分别取24只成年贵州小型猪淋巴结组织进行固定、切片、HE染色,光镜下观察组织形态,免疫组化SP法检测CD3、CD4、CD8及CD20阳性细胞的比例和分布。结果成年贵州小型猪淋巴结皮质、髓质分布不规则,皮质、髓质并非完全倒置。皮质由淋巴小结和弥散性淋巴组织构成,髓质内可见髓索和髓窦。CD3、CD4、CD8阳性细胞主要分布在副皮质区,CD20阳性细胞主要分布在淋巴小结和髓质内。结论成年贵州小型猪淋巴结组织结构与其他哺乳动物有所不同,淋巴结内可见皮质、髓质倒置分布,但并非完全倒置。淋巴结中T、B细胞分布与人和其它哺乳动物之间没有明显的差异。

人恶性黑色素瘤多发转移裸鼠动物模型的建立

目的探讨建立人恶性黑色素瘤多发转移裸鼠动物模型的方法,为进一步研究恶性黑色素瘤的发病机制提供动物模型。方法将MV3人黑色素瘤细胞注射于裸鼠背部皮下,待裸鼠背部皮下出现肿瘤后,通过病理学检查及免疫组化技术对动物模型进行鉴定。结果裸鼠皮下接种人黑色素瘤细胞28d后背部皮下相继出现肿瘤,肿瘤组织免疫组化结果显示S-100及HMB45阳性,肿瘤组织HE染色及肺、脾、肝、脑、肾各组织免疫组化结果显示各组织均出现不同程度转移灶,表明成功建立人黑色素瘤多发转移裸鼠模型。结论该研究选择来源于人的恶性黑色素瘤细胞MV3接种于裸鼠背部皮下,28d后成功建立了人黑色素瘤多发转移裸鼠动物模型,该模型为进一步研究黑色素瘤的生物学特性及新药开发提供了实验依据。

药前酶基因修饰的骨髓间充质干细胞对黑色素瘤靶向治疗的研究

目的:利用药前酶基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)提高恶性黑色素瘤局部化疗效果。方法:从雄性大鼠股骨、胫骨骨髓中分离、培养大鼠BMSCs并鉴定;将细胞色素氧化酶P4502E1(CYP2E1)以含增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组腺病毒为载体转染BMSCs,用RT-PCR和荧光显微镜观察绿色荧光的方法来检测目的基因的表达;将人黑色素瘤细胞MV3注射到裸鼠背部皮下,建立裸鼠MV3移植瘤模型,将移植瘤模型分为4组,分别给予CYP2E1-BMSCs及达卡巴嗪,单用CYP2E1-BMSCs,单用达卡巴嗪以及生理盐水治疗,并检测各组的体内局部抗肿瘤效应。结果:成功分离培养大鼠BMSCs,形态上均一,贴壁生长,以长梭形为主,体积小,核浆比大,呈明显的同向性改变,漩涡状盘旋排列;流式细胞术检测提示高表达CD29、CD71,低表达CD34、CD45;体外经不同诱导体系培养后提示具有成骨、成脂、成软骨潜能;鉴定后的BMSCs经重组腺病毒转染后,荧光显微镜可观察到转基因靶细胞EGFP表达,RT-PCR法从mRNA水平检测到目的基因在转基因细胞中表达;荧光显微镜观察治疗后裸鼠的肿瘤及各脏器的组织切片提示CYP2E1-BMSCs能聚集在肿瘤组织及转移灶周围,CYP2E1-BMSCs联合化疗药物组局部凋亡率明显高于单纯化疗组及空白对照。结论:CYP2E1-BMSCs在体内具有协同化疗药物抗肿瘤的作用,并有向肿瘤细胞聚集的特点。

海洛因依赖大鼠空、回肠嗜银细胞定位和表达

目的探讨海洛因依赖对大鼠空、回肠嗜银细胞的影响。方法成年SD大鼠66只,按配对原则随机分为空白组,盐水组和海洛因组,建立海洛因依赖动物模型。分别于10、17、24、31、38 d取空、回肠组织,应用镀银染色法及图像分析法观察空、回肠嗜银细胞的数量及染色强度变化。结果与空白组及盐水组比较,海洛因组大鼠空、回肠嗜银细胞的数量增加,染色明显加深。图像分析结果表明海洛因组大鼠空、回肠嗜银细胞平均灰度值显著降低(P<0.01);空肠各时间点、回肠第17天和第24天时间点嗜银细胞数量明显增多(P<0.05)。结论海洛因依赖期间,大鼠空、回肠嗜银细胞数量和表达明显增加。

成年贵州小型猪脾脏的组织形态学观察及免疫组化研究

为了给人类免疫相关疾病模型的建立提供参考,试验分别取24头贵州小型猪脾脏组织进行组织形态观察,用免疫组化SP法检测CD3、CD4、CD8及CD20阳性细胞的比例和分布。结果表明:12头雌性小型猪脾脏指数为18.91±1.59,12头雄性小型猪脾脏指数为17.26±2.44,无显著差异(P>0.05)。CD3+、CD4+、CD8+细胞主要分布在动脉周围淋巴鞘,CD20+细胞主要分布在脾小体,12头雌性小型猪CD3+、CD4+、CD8+、CD20+细胞比例(46.67±6.56,24.25±5.04,25.33±4.52,52.83±6.60)与雄性小型猪(43.17±7.58,23.33±3.58,23.58±5.91,54.42±9.27)比较无显著差异(P>0.05),CD4+/CD8+比值在0.7～1.5之间波动;雌性小型猪和雄性小型猪脾脏中CD20+细胞比例均较CD3+细胞多,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。