多花黄精组织培养快繁技术的研究

[目的]:建立多花黄精组织培养快速繁殖体系。[方法]:以多花黄精带芽根茎为外植体,消毒后将其置于富含不同激素配比的培养基中培养,筛选各阶段合适的培养基。[结果]:在附加有2,4-D的诱导培养基上出现不定芽,增殖培养以MS+6-BA4.0 mg/L+2,4-D0.2 mg/L为好,增殖倍数可达10倍。在增殖培养基中加入GA3有利于壮苗。6-BA、2,4-D、GA3组合更加有利于形成粗壮无根苗。培养基1/2 MS+IBA0.7 mg/L最适合用于诱导黄精不定芽生根,生根率可达95%。[结论]:2,4-D比NAA更有利于多花黄精的不定芽诱导。该繁殖体系可在短时间内提供大量黄精种苗。

长寿花高繁殖组培体系及瓶外生根技术

[目的]建立长寿花高繁殖的组培体系和瓶外生根技术,促进长寿花工厂化生产。[方法]选用长寿花叶片和茎段作为外植体,在加有6-BA1.00mg/L和NAA0.20mg/L培养基上培养诱导出芽丛,再将芽丛转接到继代增殖培养基,调节不同外源激素配比获得长寿花高繁殖组培体系的最佳培养基组合。[结果]在MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L+GA30.10mg/L的培养基组合中,诱导丛芽增殖率达到95.35%,增殖倍数达到20倍以上,试管苗生长势好。利用海绵作为载体进行瓶外生根,生根率达到95.00%以上,移栽苗成活率达到100%。[结论]利用海绵作为载体进行试管苗瓶外生根是完全可行的。

家蝇小热休克蛋白(sHsp20.6)的生物信息学分析

研究家蝇小热休克蛋白sHsp20.6的生物学功能。方法应用生物信息学的方法和工具对家蝇sHsp20.6的理化性质、疏水性、跨膜区和信号肽、膜体分析、二级结构功能域、蛋白质的功能分类预测、多重序列比对与系统发育树构建、三级结构建模进行分析。结果表明:家蝇sHsp20.6是一个亲水蛋白,分子量为20.64kD,等电点为5.66,不具有跨膜区和信号肽,包含有一个HSP20的结构域,主要构成原件为α螺旋和无规则卷曲,三维结构预测显示该蛋白为棒状结构,C端结构域具有7个片层结构。聚类分析显示,家蝇sHsp20.6蛋白与昆虫中的直系同源小热休克蛋白(orthologoussmallheatshockprotein)聚为一类。

致倦库蚊防御素基因的克隆与生物信息学分析

目的:获取致倦库蚊(贵阳株)防御素基因CxDefensin全长编码序列。方法:采用RT-PCR方法扩增致倦库蚊(贵阳株)CxDefensin开放阅读框(ORF)序列,并通过生物信息学方法分析其核苷酸和蛋白质序列。结果:CxDefensin ORF序列全长300 bp,编码99个氨基酸,包含1个内含子,蛋白质分子量是10.58 kDa,等电点为6.52。CxDefensin蛋白与其他昆虫的defensin蛋白具有同源性。结论:所获致倦库蚊(贵阳株)防御素基因Cx-Defensin归属昆虫防御素基因家族,为昆虫β型防御素。

按蚊防御素基因家族转录模式和启动子的生物信息学分析

运用生物信息学方法分析冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)中防御素基因家族的表达模式和启动子保守区。在ENSEMBL数据库中搜索防御素基因家族序列,然后将基因编号输入angaGEDUCI数据库中进行分析。结果在冈比亚按蚊中存在有4个防御素基因的异构体分子,其中DEF1基因表达模式与其它3个基因存在明显差异。4个防御素基因启动子序列都存在AP-1、GATA-1、GCN4、GR、HNF-3B、TFIID 6个转录因子的识别结合位点,表明这6个转录因子是冈比亚按蚊防御素基因家族表达调控所必需的。值得注意的是,DEF1基因启动子序列中存在与性别决定有关的SOX proteins转录因子的结合位点,暗示DEF1基因的转录调控可能与性别分化有关;而在DEF2基因启动子序列中存在有热激因子(HSTF)的识别结合位点,表明热刺激会调控DEF2基因的表达。

肝癌细胞对成熟树突状细胞生物物理学特性的影响

目的:研究肝癌细胞微环境成熟树突状细胞(Mature dendritic cells,mDCs)的生物物理学特性的影响,从交叉学科的角度来探索肿瘤细胞的免疫逃逸机制。方法:用免疫磁珠从人外周血分离CD14+单核细胞,加入rhGM-CSF和rhIL-4将单核细胞诱导分化为imDCs,利用TNF-α将未成熟树突状细胞(Immature dendritic cells,imDCs)诱导为mDCs,mDCs与HCCs在Transwell中共培养48h,分别利用微吸管法、荧光偏振法和Transwell法研究细胞粘弹性、膜流动性和迁移能力。结果:与肝癌细胞(Hepa tocellular carcinoma cells,HCCs)共培养后,mDCs的粘弹性和膜流动性显著下降,细胞的迁移能力受到显著的损伤。结论:HCCs可能能够损伤mDCs的生物物理学特性来影响其迁移能力,这可能是肿瘤逃脱机体免疫监视的方式之一,这对进一步深入理解肿瘤的免疫逃逸机制具有重要意义。

仙客兰组织培养快繁技术的研究

目的:建立仙客来组织培养快速繁殖体系。方法:以仙客来叶片为外植体,消毒后将其置于富含不同激素配比的培养基中培养,筛选各阶段合适的培养基。结果:在MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L的培养基组合中,诱导愈伤率达到80%,增殖培养以MS+6-BA3.5 mg/L+NAA0.5 mg/L为最好,可达到10倍以上。MS+NAA3.0 mg/L培养基为最佳诱导生根培养基,生根苗移栽成活达到90%。结论:实验初步建立了仙客来的组培快繁体系。

家蝇转铁蛋白基因的克隆和生物信息学分析

为了研究家蝇转铁蛋白基因功能,获得全长cDNA序列并对其蛋白序列进行生物信息学分析,利用在线分析程序和相关工具软件分析转铁蛋白基因的开放读码框,分析编码蛋白的理化性质、结构域、并预测其空间结构和功能。结果表明家蝇转铁蛋白基因编码蛋白由622个氨基酸组成,分子量为70.58kDa,理论等电点为5.33,为稳定蛋白,有跨膜区,含有信号肽,该蛋白属于TR-FER保守结构域家族,亚细胞定位于细胞核,二级结构以无规则卷曲为主,功能预测该蛋白具有酶活性。

用生物技术促进中药现代化

贵州是我国四大中药榜产地之一，蕴藏有丰富的资源，西部大开发为贵州中草药的发展带来了良好机遇，2003年，贵州省得到国家批准组建中药现代化科技产业基地，作为实施国家中药现代化研究与生产开发项目之一．生物技术已在发达国家和中国发达地区得到广泛应用，并在农业、医药．环境．能源等领域取得了一系到的重大研究成果。产业化规模也在不断扩大。生物技术应用于中药领域将大大促进中药现代化进程．本文就贵州省中药现代化现状存在问题及如何应用生物技术促进中药现代化作一综述。

热胁迫后家蝇幼虫cDNA文库构建与随机EST测序分析

目的构建家蝇幼虫cDNA文库,筛选重要免疫因子。方法采用热激法处理家蝇3日龄幼虫,提取处理后培养24h的家蝇幼虫总RNA,运用SMART技术构建cDNA文库并随机挑选克隆进行EST测序分析。结果 cDNA文库的滴度为1.2×106。PCR扩增鉴定显示所选的30个克隆均含有重组的插入片段,大小均大于1kb。随机挑取192个克隆进行表达序列标签(EST)测序,有效序列为171条,根据EST测序结果计算文库重组率达94%。经序列拼接得到129个Unigenes。通过序列比对发现其中72个Unigenes与GenBank中的已知基因同源,并从中鉴定出热激蛋白、变态原、转铁蛋白、几丁质酶、副肌球蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制因子等重要免疫因子。结论高质量的家蝇幼虫cDNA文库构建成功,该文库的构建将有助于家蝇热应激免疫相关功能基因分离和进一步研究。

The Study on Induction and Proliferation of Tube Bulbs in Lilium brownii

With different parts of bulb scale as explants, the proliferation method of Guizhou Lilium brownii were studied with 3% sodium hypochlorite and MS medium with different concentrations of hormones. The results show that it is feasible to disinfect the bulbs of Lilium brownii with 3% sodium hypoehlorite, moreover, the sodium hypochlorite is very cheap and harmless to researchers, experimental materials and environment. MS ＋ NAA 0.3 mg/L ＋ 6-BA 1.5 mg/L is optimum for the induction of bulbs and, the basal part of Lilium brownie is the optimum explants. After culture for 25 d on the same medium, the tube bulbs could be obtained with the characteristics of high propagation coefficient, strong and new roots. The survival rate is over 90% for transplantation of tube bulbs with diameter between 1-2cm. The method developed in the present study can proliferate abundant Lilium brownii seedling in short time.

川芎嗪调节Bcl-2促进帕金森病小鼠多巴胺神经元存活

目的探讨川芎嗪对PD小鼠多巴胺神经元的保护作用。方法 30只健康雄性C57BL/6小鼠,随机分为正常对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组给予腹腔注射百草枯和代森锰建立PD模型,建模成功后,治疗组给予川芎嗪腹腔注射2 w,正常对照组给予同剂量生理盐水。观察3组小鼠行为学的改变、并用免疫组织化学、Western印迹法检测中脑多巴胺神经元数量、形态参数及Bcl-2的表达。结果模型组与治疗组比较,爬杆时间明显延长,中脑多巴胺神经元数量显著减少、Bcl-2的表达显著增高。结论川芎嗪治疗可上调Bcl-2的表达,增加黑质TH阳性神经元数量,有明显的神经保护作用。

野百合试管鳞茎诱导与增殖的研究

以贵州野百合鳞片不同部位为外植体,用3%次氯酸钠进行消毒,以MS为基本培养基,附加不同浓度的激素进行培养。结果表明,用3%次氯酸钠对野百合鳞茎进行外植体进行消毒完全可行,且对操作人员,实验材料和环境都不存在不良影响,价格低廉;最佳的诱导培养基为MS＋6-BA1.5mg/L＋NAA0.3mg/L;最适合的外植体为百合鳞片基部。用相同的培养基进行增殖培养,25d后,可获得繁殖系数高、生长势好、并有新根生成的试管鳞茎;将直径为1～2cm的试管鳞茎移栽培养,成活率高于90%。该研究得出的方法可在短时间内提供大量的贵州野百合种苗。

转化生长因子-β1以浓度依赖的方式重组人成熟树突状细胞的细胞骨架丝状肌动蛋白

目的:探索转化生长因子β1(tansforming growth factor-β1,TGF-β1)对人成熟树突状细胞(mature dendritic cells,mDCs)骨架丝状肌动蛋白(filament actin,F-actin)及其部分骨架结合蛋白表达的影响,为深入理解树突状细胞(dendritic cells,DCs)的生物学行为和提高基于DCs的抗肿瘤免疫治疗的临床效率提供线索。方法:不同浓度的TGF-β1处理mDCs后,用激光共聚焦显微镜和免疫印迹实验分别研究细胞骨架F-actin的结构和部分细胞骨架结合蛋白表达水平的变化。结果:(1)与对照组相比,TGF-β1处理后的mDCs的F-actin出现了明显重排,F-actin的表达量在3 ng/ml组下调(P=0.000),在5 ng/ml组上调(P=0.000)。(2)mDCs表面丝状突起长度和数量的变化,长度在3 ng/ml和5 ng/ml组较对照组细、短(P=0.001,0.000);数量在1、3 ng/ml和5 ng/ml组较对照组少而稀疏(P=0.000);在7 ng/ml组mDCs表面丝状突起长度和数量的变化均无统计学意义(P=0.114);通过回归分析细胞丝状突起长度和数量与F-actin表达量之间存在非线性相关性(R2分别为0.828和0.746,P=0.000)。(3)细胞骨架蛋白结合蛋白的表达,fascin1在所有实验组中均出现了下调(P=0.001、0.000);p-cofilin1与总cofilin1的表达水平比在1 ng/ml和3 ng/ml组均下调(P=0.000);profilin的表达在1、3 ng/ml和5 ng/ml组均上调(P=0.001、0.001、0.013)。结论:TGF-β1以浓度依赖的方式影响mDCs的细胞骨架F-actin结构及其部分结合蛋白的表达,提示在临床上施行基于DCs的抗肿瘤免疫治疗时,需以适当的方式阻断TGF-β1的信号转导通路,这对进一步深入理解DCs的生物学行为和肿瘤的免疫逃逸机制具有重要意义。

美洲大蠊i型溶菌酶基因的克隆及其功能预测

溶菌酶是昆虫先天性免疫系统的重要组成成分。以冈比亚按蚊i型溶菌酶氨基酸序列为种子序列,在美洲大蠊EST库中查找相似序列。通过RT-PCR和RACE PCR技术,克隆获得美洲大蠊i型溶菌酶基因。生物信息学分析表明,所克隆的溶菌酶基因片段长度为525bp,包括5'非编码区12bp,3'非编码区18bp和完整的开放阅读框495bp,其编码164个氨基酸,包括溶菌酶成熟肽137个氨基酸和27个信号肽氨基酸。经同源比对,它与黑腹果蝇和冈比亚按蚊的i型溶菌酶具有同源性,并且具备了异构肽活性的功能位点H,但缺失了抑菌活性的功能位点E/D/S,这为其功能和分子进化研究提供了重要的基础。

Matlab在旷场实验行为视频分析中的运用

目的:实现旷场实验行为学视频的自动分析。方法:应用Matlab程序设计软件结合数字图像处理方法实现帕金森病小鼠模型组及正常对照组旷场实验行为学视频的分析,绘制运动轨迹图,对比两组小鼠自主运动行为的改变。结果:旷场实验行为学视频系统快速、有效的绘制出小鼠运动轨迹图,并计算出小鼠运动距离,证实模型组小鼠运动距离较正常组显著降低。结论:旷场实验行为学分析系统方便、快捷且准确,可进一步推广至其它的行为学视频分析。

肝癌细胞微环境对不同分化阶段树突状细胞功能状态的影响

目的:肿瘤的发生发展伴随有其对免疫系统各效应单元的显著抑制,树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是目前所知功能最为强大的抗原呈递细胞(Antigen presenting cells,APC)并在天然和适应性免疫应答的启动方面发挥着至关重要的作用。本文探讨肝癌细胞(Hepatocellular carcinoma cells,HCC)分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对树突状细胞的功能状态的影响,以探索傅立叶变换红外光谱(Fourier transformed infrared spectrum,FT-IR)技术在基于DCs的抗肿瘤细胞免疫治疗中的临床应用。方法:用免疫磁珠(Miltenyibiotec)从人外周血分离CD14+单核细胞,加入粒-巨噬细胞集落刺激因子(Recombinant human granulocyte-macrophage CSFr,hGM-CSF)、白介素4(Recombinant human interleukins 4r,hIL-4)将单核细胞诱导分化为未成熟DCs(ImmatureDCsi,mDCs),利用肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)将imDCs诱导为成熟DCs(Mature DCs,mDCs),分别将imDCs和mDCs与HCC在Transwell中共培养48 h,正常培养和撤生长因子培养的DCs作为对照,采用FT-IR技术和分子生物学技术研究HCC对DCs功能状态的影响。结果:与正常培养和撤生长因子培养的DCs相比,与HCC共培养DCs的基因转录活性和能量状态受到了显著的抑制,免疫印迹的结果进一步证实DCs的转录因子NF-κB的确受到了由HCC分泌的细胞因子的抑制。结论:HCC能够抑制DCs的基因转录活性和能量状态,FT-IR的变化与转录因子NF-κB的表达具有高度的相关性,这为FT-IR技术应用于检测DCs的功能状态奠定了基础,对基于DCs的抗肿瘤免疫治疗具有重要意义。

产虫茶昆虫灰直纹螟及其虫茶形态特征记述

灰直纹螟是一种主要的产虫茶昆虫。对以化香为寄主的灰直纹螟及其虫茶形态学进行了系统研究。详细观察了灰直纹螟各虫态的形态特征,其中幼虫和蛹的形态记述为首次报道。灰直纹螟虫茶颗粒形状为长圆柱状;虫茶颗粒颜色主要有两种,其潘通U卡色号分别为黑7U和465U,黑7U占主导;虫茶颗粒大小分为5种规格,自规格一至规格五,虫茶颗粒长径、短径均逐渐增加;虫茶香气为清香型,汤色为红褐色,明亮,滋味醇和、鲜爽。研究结果为灰直纹螟——化香虫茶品种的准确鉴定提供了科学资料。

金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区的表达及其抗血清制备

为在大肠埃希菌中表达金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区并制备相应纯化重组蛋白的抗血清,通过生物信息学软件分析SirH的主要抗原表位区,PCR扩增SirH主要抗原表位区的编码序列,插入表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX4T1-sirH。该载体经酶切和DNA测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,GST亲和层析纯化获得重组蛋白后,采用Western blot方法检测目的蛋白的反应原性。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗血清效价。结果显示,PCR扩增的SirH主要抗原表位区的编码序列长度约759bp,SDS-PAGE初步测定表达蛋白的分子质量约为54ku,与理论值相符。亲和层析纯化获得了目的蛋白,Western blot结果证实该纯化蛋白能与乳房炎患病奶牛恢复期的血清发生反应。应用纯化蛋白免疫新西兰大白兔后制备的抗血清效价在1∶409 600以上。结果表明,SirH主要抗原表位区能刺激机体产生较强的体液免疫应答,SirH是一个有潜力的疫苗候选抗原。

贵州产坚龙胆组织培养体系的建立

以贵州野生坚龙胆(Gentiana rigescens Franch)带有顶芽或腋芽的茎段作为外植体,建立坚龙胆的组织培养体系。结果表明,适宜的不定芽诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,最佳的增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA,最适生根培养基为1/2MS+0.1 mg/L IBA。在组织培养过程中还观察到了瓶苗开花的现象。