氟中毒大鼠脑组织和PC12细胞中脂质和尼古丁受体的改变

目的观察氟中毒对大鼠脑组织和神经细胞中细胞膜性脂质和神经型尼古丁受体的影响．探讨氟中毒引起神经系统功能紊乱的分子作用机制。方法用不同剂量氟饲养大鼠和处理体外培养的大鼠嗜铬神经细胞瘤细胞株(PC12神经细胞),用生物化学方法测定细胞3-4,5-二甲基噻唑-2,5-二酚基四唑溴化物 (MTT)还原能力、脂质过氧化和蛋白氧化水平,用高效液相色谱方法测定细胞膜性脂质,用放射核素标记放射性配体-受体实验方法测定不同的尼古丁受体类型,用蛋白印迹方法测定α3、α4、α7和β2尼古丁受体亚单位蛋白水平。结果经氟处理的神经细胞中MTT水平降低36％,氟中毒大鼠和高浓度氟处理的神经细胞中氧化应激水平升高55％-89％,细胞膜性磷脂减少24％-34％,辅酶Q减少13％-30％,含α3、α4和α7亚单位的尼古丁受体类型在受体-配体结合率和蛋白水平均降低20％-44％,用抗氧化剂处理可减弱氟中毒对受体的损害作用。结论氟中毒导致神经型尼古丁受体水平降低,其原因可能与氟中毒时氧化应激水平升高及所引起的细胞膜性脂质结构异常改变有关,这些可能是氟中毒时神经系统功能紊乱的重要发生机制。

SH-SY5Y神经细胞中α3神经型尼古丁受体对细胞凋亡及p38MAPK信号通路的影响

目的研究人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中α3神经型尼古丁受体（nAChR）对细胞凋亡及凋亡相关信号通路p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的影响，了解α3 nAChR在老年性痴呆发病中的作用机制。方法将细胞分为稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒组、空质粒组及正常对照组，用real-time PCR和Western blot法检测α3 nAChR mRNA水平和蛋白水平的表达，以评价RNA的干扰效率；real-time PCR方法检测凋亡相关蛋白bax及bcl-2 mRNA水平。将3组细胞用10μmol／Lβ淀粉样蛋825-35（Aβ25-35）处理48h，进一步用流式细胞术检测细胞凋亡率；用Western blot迹方法检测细胞中p-p38及p38蛋白表达水平的变化。将3组细胞用p38通路阻断剂阻断信号转导后再用Aβ25-35处理，测定细胞凋亡率。结果稳定转染cdnAChR siRNA表达质粒的细胞克隆株，od nAChR mRNA及蛋白表达水平分别降低了95％和86％；与空质粒和正常对照组相比，凋亡相关蛋白bax mRNA水平增加2．11倍（P〈0．01），bcl-2 mRNA水平下降0．53倍（P〈0．01），凋亡率未发生变化（3．40％4-0．20％），但能增加Aβ诱导的细胞凋亡（24．52％±1．59％）；与Aβ处理SH-SY5Y细胞组相比，Aβ引起α3 nAChR沉默细胞p-p38蛋白表达水平增加178％（P〈0．01）；在加入p38特异性阻断剂后加入Aβ，与未加阻断剂时相比，3组细胞凋亡率均减少（P〈0．01），其中α3 nAChR沉默细胞组最明显。结论α3 nAChR沉默可能通过增强凋亡相关信号通路p38MAPK从而增加Aβ25-35的致凋亡作用；α3 nAChR沉默可以通过增加促凋亡相关蛋白bax，减少抗凋亡相关蛋白bcl-2从而增加Aβ25-35的致凋亡作用。

α7尼古丁受体基因抑制对SH—SY5Y细胞β淀粉样蛋白生成的影响

目的通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞）中胡神经型尼古丁乙酰胆碱受体（nAChR）的基因表达，以了解α7nAChR对β淀粉样蛋白（AB）的影响，进一步探讨阿尔茨海默病的发病机制。方法SH-SY5Y细胞转染α7nAChR的小干扰RNA（siRNA），用real-timePCR法和蛋白免疫印迹法分别测定细胞中α7nAChR、β分泌酶两个亚型（BACE1和BACE2）在mRNA和蛋白表达水平的变化；用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定Aβ1-42含量的变化。结果转染α7nAChRsiRNA后，与对照组相比，α7nAChRmRNA及蛋白表达水平分别降低了84％和79％（P〈0．01）；BACElmRNA及蛋白表达水平分别升高了527％和71％（P〈0．01）；BACE2mRNA及蛋白表达水平分别降低了58％和75％（P〈0．01）；Aβ1-42含量升高了208％（P〈0．01）。结论α7nAChR基因表达抑制后Aβ含量明显升高，其机制可能与BACE1表达上升和BACE2表达抑制有关，这种改变可能与阿尔茨海默病的发病有一定的关系。