灯盏细辛注射液对老年脑梗死患者血中ET及NO水平的影响

目的:探讨灯盏细辛注射液治疗老年脑梗死患者血中内皮素(ET)及一氧化氮(NO)水平的影响。方法:选择86例老年脑梗死患者,随机分为对照组(43例)和观察组(43例),所有患者均给予降压、降血糖和防止并发症等综合治疗,观察组在常规治疗的基础上加用灯盏细辛注射液治疗,疗程14 d;对比两组的治疗效果、血液流变学改变和血中ET及NO的变化。结果:观察组治疗总有效率为95.3%,对照组为79.1%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);与治疗前比较,治疗后两组患者全血低切黏度、全血高切黏度和红细胞压积均显著降低(P<0.05),观察组下降幅度大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与治疗前比较,治疗后两组患者ET和NO均显著降低(P<0.05),观察组下降幅度大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗期间均未见明显不良反应发生。结论:灯盏细辛注射液能有效降低老年脑梗死患者血液黏度,改善血管内皮功能,保护脑细胞,具有较好的临床效果。

幽门螺杆菌NCTC11637、NCTC11639毒素相关基因A的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

目的克隆幽门螺杆菌毒素相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)全长序列并进行序列分析,构建表达CagA的真核表达载体,研究CagA调控胃泌素基因的表达。方法PCR扩增出CagA基因全长片段后构建克隆载体pMD18-T/CagA7和pMD18-T/CagA9,测序结果登录GenBank,登录号分别为GQ161098(NCTC11637)和GQ161099(NCTC11639),用测序后筛选的PstI和BamHI内切酶将原核载体上的CagA基因酶切后连接到pcDNA3.1/ZEO(-)真核表达载体上,构建真核表达载体pcDNA3.1ZEO(-)/CagA7和pcDNA3.1ZEO(-)/CagA9,并经双酶切和CagA PCR扩增鉴定,最后转染胃癌细胞,检测胃癌细胞中胃泌素基因的表达。结果序列比对结果显示NCTC11637和NCTC11637 CagA的同源性为88.77%,NCTC11637与已收录的NCTC11637(AB015416)同源性为99.22%,序列分析显示两者均有两个Ca-gA酪氨酸磷酸化位点,转染细胞后CagA上调胃泌素基因的表达。结论成功克隆了CagA全长基因,并构建了含CagA全长基因的真核表达载体,在胃癌细胞内上调了胃泌素基因的表达。

CCR5Δ32等位基因多态性与贵州特殊人群HBV感染的相关性

目的:探讨CCR5Δ32等位基因在贵州世居少数民族(彝、瑶)与汉族人群的分布,并分析CCR5位点突变与HBV的关系.方法:采用PCR技术分别扩增贵州92份黔西彝族、101份威宁彝族、138份荔波瑶族以及165份毕节汉族CCR5编码区片段,通过琼脂糖凝胶电泳对CCR5Δ32多态性进行分析,最后抽取样本并进行DNA测序验证.结果:经过PCR特异性扩增,琼脂糖凝胶电泳后,496份样本均未发现CCR5Δ32突变型和杂合子.DNA测序验证所有样本CCR5基因未发生32碱基缺失的突变.结论:CCR5Δ32的分布有较明显的地域和种族差异,该位点与HBV感染的相关性有待于进一步深入研究.

贵州省燃煤型氟中毒病区人群髓过氧化物酶基因mRNA表达水平及启动子区转录调控研究

目的：探讨髓过氧化物酶（Myeloperoxidase， MPO）基因遗传变异与燃煤型氟中毒发病机制的相关性，了解改灶和健康教育等综合干预措施对病区人群的健康影响。方法2007年，选择贵州省毕节市燃煤型地方性氟中毒重病区人群，在没有进行改炉灶的鸭池镇，选择150名氟斑牙患者为氟中毒非干预组；在已进行改灶2年的长春镇，选择150名氟斑牙患者为氟中毒干预组；在非地方性氟中毒病区贵州省长顺县白云山镇，选择150名村民作为对照组。采用实时荧光定量PCR方法，检测各组人群外周血白细胞中MPO mRNA 的表达。体外培养人肝癌细胞株HepG2，构建MPO-463G/A启动子序列报告基因质粒pGL3-A、pGL3-G；pGL3-A、pGL3-G、pGL3-Basic （空白对照）、 pGL3-Control （阳性对照）分别和内参质粒 pRL-TK 共转染 HepG2细胞，即HepG2细胞分为pGL3-A 组、pGL3-G 组、pGL3-Basic 组、pGL3-Control 组。利用双荧光素酶报告基因检测分析MPO基因启动子区-463G/A位点点突变对基因转录活性的影响。结果氟中毒非干预组人群外周血白细胞中MPO mRNA表达（0.054±0.003）高于氟中毒干预组和对照组（0.019±0.003、0.019±0.004，P均＜0.05），而氟中毒干预组MPO mRNA 表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）；MPO基因-463G/A位点发生遗传变异后，pGL3-G 组荧光素酶表达（0.7534±0.0866）高于 pGL3-A 组（0.4900±0.0223，P 〈0.05）。结论 MPO基因启动子区-463G/A位点A等位基因可能是燃煤型氟中毒的保护因素。综合干预措施在防治地方性氟中毒方面有一定作用。

维生素D受体基因多态性与贵州省燃煤型氟中毒易感性的相关性研究

目的观察维生素D受体（VDR）基因多态性在贵州省燃煤型氟中毒人群中的分布情况，探讨VDR基因多态性与燃煤型氟中毒易感性的关系。方法在贵州省毕节地区燃煤型氟中毒病区非改灶村抽取150名村民作为非干预组，在改灶村抽取150名村民作为干预组。同时在非病区长顺县抽取150名村民作为对照组。采集观察对象外周静脉血，提取DNA，采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法测定3组人群VDR Bsm I、Fok Ⅰ基因型，观察燃煤型氟中毒地区人群VDR各基因型分布情况．并分析组间基因型分布的差异。结果对照组[AA：19．3％（29／150），AG：39.3％（59／150），GG：41_3％（62／150）]、非干预组[AA：4．7％（7／150），AG：14．0％（21／150），GG：81．3％（122／150）]、干预组[AA：7.3％（11／150），AG：23-3％（35／150），GG：69．3％（104／150）]VDR基因BsmI位点基因型分布频率比较，差异有统计学意义（X^2=56．6，P〈0．05）。对照组[TT：45．3％（68／150），TC：48．7％（73／150），CC：6．0％（9／150）]、非干预组[TT：29．3％（44／150），TC：55．3％（83／150），CC：15.3％（23／150）]、干预组[TT：32．7％（49／150），TC：55-3％（83／150），CC：12．O％（18／150）]VDR基因Fok Ⅰ位点基因型分布频率组间比较，差异有统计学意义（X^2=11．9，P〈0．05）；与对照组比较，非干预组CC基因型频率明显增高（X^2=6．9，P〈0．05）。单因素分析显示携带GG基因型的个体比携带AA和AG基因型的个体增加了发生氟中毒的风险（非干预组、干预组与对照组比较，OR值分别为6．2、3．2，P均〈0．05），而携带TC和CC基因型的个体比携带TT基因型的个体增加了发生氟中毒的风险（非干预组、干预组与对照组比较，OR值分别为1.3、2．8，1．3、2．1，P均〈0．05）。结论VDR基因多态性可能是影响燃煤型氟中毒易感因素之一。

贵州省侗族、汉族人群乙型肝炎病毒感染结局与趋化因子RANTES基因-403G／A及-28C／G位点多态性研究

目的探讨贵州省世居侗族和汉族人群趋化因子RANTES基因（regulated upon activation normal T cell expressed and secreted）-403G／A和-28C／G位点多态性与乙型肝炎病毒（HBV）感染后结局的相关性。方法采取病例对照方法，募集侗族和汉族共计229例HBV持续感染者、161例HBV清除者作为研究对象，同时选取200例正常者作为对照组。应用TaqMan—MGB探针实时荧光聚合酶链反应SNP分型技术对趋化因子RANTES基因-403G／A和-28C／G位点进行分型测定。结果趋化因子RANTES基因-403G／A和-28C／G基因型频率在侗族汉族HBV持续感染组、HBV清除组和正常对照组间差异无统计学意义（P〉0．05），单因素分析发现-403AG和-28GG增加HBV持续感染的危险度（OR=1．292，OR=1．151）。趋化因子RANTES-28C／G基因型频率在侗族和汉族HBV持续感染组分布差异有统计学意义（P〈0．05），而RANTES-403G／A各基因型在两族人群中分布的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论携带趋化因子RANTES-403AG和-28GG基因型HBV持续感染风险性高。RANTES-403A有助于HBV清除。