医学院校生物技术专业外语教学探讨

在认真分析医学院校生物技术专业外语教学现状的基础上,结合本校实际,建立了我校基础医学(生物技术方向)专业的专业外语教学体系,并组织教学。

2-型猪链球菌保护性抗原RfeA的B细胞表位预测

以2-型猪链球菌（SS2）保护性抗原RfeA推定的氨基酸序列为基础,采用Kyte-Doolittle法分析蛋白的亲水性,Emini法预测蛋白的表面可能性,以及Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原指数;辅以Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法对蛋白二级结构中柔性区域的分析,预测SS2保护性抗原RfeA的B细胞表位。结果表明,推测RfeA的B细胞表位位于RfeA蛋白N-端第21~27、53-60、104~117、140~160区域。用多参数预测SS2保护性抗原RfeA的B细胞表位,为实验研究SS2的多表位疫苗奠定基础。

2型猪链球菌溶血素及其抗血清的免疫保护活性研究

目的探讨2型猪链球菌(SS2)溶血素(SLY)及其抗血清的免疫保护活性。方法以纯化的SLY重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定抗血清的效价及其中的IgG亚型,用致死剂量的SS2强毒株攻击小鼠,评价SLY的免疫保护活性。制备SLY抗血清并以其被动免疫小鼠,4h后用致死剂量的SS2强毒株攻击小鼠,评价抗血清的保护作用。结果用重组蛋白SLY免疫小鼠后收集抗血清,效价为1∶25 600,含IgG1和IgG2a两种亚型抗体,但IgG1与IgG2a的含量差异不显著。用致死剂量的SS2强毒株攻击小鼠14d后,SLY主动免疫组小鼠的存活率(60%)明显高于对照组(10%,P<0.05);SLY抗血清被动免疫组小鼠在SS2强毒株攻击7d后的存活率(90%)明显高于对照组(20%,P<0.05),攻击后14d,抗血清被动免疫组存活率(40%)与对照组(20%)差异不显著(P>0.05)。结论 SLY及其抗血清具有免疫保护活性。

2-型猪链球菌分泌性保护性抗原RfeA的确认

目的确认RTX家族胞外蛋白A(RTX family exoprotein A,RfeA)为2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的分泌蛋白。方法通过生物信息学软件分析RfeA的氨基酸序列,预测RfeA在SS2中的分布;以纯化的RfeA重组蛋白为免疫原免疫小鼠,制备RfeA鼠多抗血清,间接ELISA检测抗血清效价;以制备的RfeA抗血清为一抗,利用ELISA方法分析RfeA在05ZYH33株培养上清中的分布,通过实验证实生物信息学预测的结果。结果生物信息学软件分析RfeA氨基酸序列,预测RfeA为SS2分泌性蛋白;ELISA方法分析发现RfeA存在于05ZYH33株培养上清中,是SS2分泌性蛋白。结论实验研究结果与生物信息学预测一致,RfeA为SS2分泌性蛋白的确定为进一步研究RfeA的功能以及在SS2致病过程中扮演的角色奠定了基础。

2-型猪链球菌谷氨酸脱氢酶的表达和免疫学活性研究

目的表达2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的谷氨酸脱氢酶(glutamatedehydrogenase,GDH),研究其免疫学活性,探讨其作为疫苗候选分子的可能性。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出gdh基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-gdh。该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化E.coli Rosetta,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白。蛋白免疫印迹(western blot)证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性。重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接原位末端标记法(ELISA)检测其效价。结果 PCR扩增的gdh基因长度约为1300碱基对(bp),所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框。IPTG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的14.2%。亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的患者血清发生阳性反应。重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1∶25600以上。结论成功构建了表达载体pET30b-gdh,可在工程菌E.coli Rosetta中表达;表达蛋白具有良好的免疫学活性。