骨髓间充质干细胞移植治疗肺动脉高压大鼠肺血管病变的研究

目的探讨骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对野百合碱诱导的实验性肺动脉高压大鼠肺血管病变的干预作用。方法体外分离、培养并纯化SD大鼠骨髓MSCs。健康雄性SD大鼠随机分为3组,肺动脉高压组(n=20)、MSCs移植组(n=20):2组大鼠均一次性向背部皮下注射野百合碱50 mg/kg,诱导肺动脉高压动物模型;正常对照组(n=15):注射同体积的生理盐水。同等条件饲养3周后,MSCs移植组大鼠经舌下静脉注射5×106/ml的经Hoechst33342荧光染料标记的MSCs细胞悬液1 ml,肺动脉高压组和正常对照组大鼠注射等量L-DMEM液。移植后观察4周,测定3组大鼠生存率、肺动脉平均压、肺小动脉的微观结构的改变。结果肺动脉高压大鼠移植MSCs 4周后,生存率由30%上升到90%,肺动脉平均压由(42.7±2.3)mmHg下降到(24.7±2.3)mmHg,下降了50%;右心指数由(45.30±3.13)%下降到(37.90±3.18)%(q=29.86,P<0.01),肺小动脉病变得到有效改善。荧光显微镜观察到Hoechst 33342标记的MSCs在肺内定植且分化成大量新生血管并形成侧枝循环,肺动脉重构得到有效逆转。结论MSCs移植可有效减轻并逆转肺动脉重构的进程,其作用机制是MSCs分化形成新生血管,建立了侧枝循环,从而修复野百合碱诱导的肺血管损伤。

两步法体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为CD_(34)^+/Sca-1^+造血干细胞的研究

目的 建立一种体外诱导胚胎干细胞 (embryonicstemcell,ESC)定向发育为CD+ 3 4 /Sca 1+ 造血干细胞 (hematopoieticstemcell,HSC)的实验方法。方法 联合应用血管内皮生长因子(vascularendothelialcellgrowthfactor ,VEGF)、干细胞因子 (stemcellfactor ,SCF)、白细胞介素 3(interleukin 3,IL 3)、白细胞介素 6 (interleukin 6 ,IL 6 )和促红细胞生成素 (erythropoietin ,EPO)分阶段首先诱导ESC形成富含CD+ 3 4 /Sca 1+ 细胞的胚胎体 (embryoidbody ,EB) ,然后分别观察EB细胞在甲基纤维素半固体培养体系和骨髓基质细胞饲养层培养体系中进一步分化为HSC的情况。结果VEGF联合其他细胞因子能有效促进EB中HSC的形成 ,CD+ 3 4 /Sca 1+ 细胞数高达 (13 72± 1 92 ) %。收获此阶段的EB进一步诱导发现 ,甲基纤维素培养体系造血克隆形成率明显低于骨髓基质细胞培养体系 ,在甲基纤维素中CD+ 3 4 /Sca 1+ 细胞数最高只能达到 (2 0 5 2± 2 78) % ,而基质细胞中CD+ 3 4 /Sca 1+ 细胞数可达 (34 6 0± 3 71) % (t=5 2 6 ,P <0 0 0 1)以上 ,且来自骨髓基质细胞培养体系的造血分化细胞在造血集落培养时能形成类型和数量更多的造血克隆。结论 使用VEGF联合SCF、IL 3、IL 6、EPO分阶段诱导ESC形成富含CD+ 3 4

胚胎干细胞诱导分化为造血干细胞重建造血功能的研究

使用胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESC）诱导分化为造血干细胞（hematopoietiestem cells，HSC）解决移植供体来源匮乏是目前国际上研究的热点问题。我们使用小鼠ESC体外定向诱导分化为HSC，并移植给骨髓摧毁模型小鼠，观察重建体内造血的情况，借以评价其功能性。

骨髓间充质干细胞移植对肺动脉高压大鼠模型肺组织超微结构的影响

肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension，PAH）是一类以肺血管阻力进行性增高为主要特征，最终导致右心衰竭甚至死亡的疾病。肺血管重建是PAH的核心病理机制。近年来，随着干细胞治疗技术在临床的逐步应用，使用干细胞修复损伤的肺动脉或使其再生，有可能达到根治PAH的效果。本研究通过建立野百合碱（monocrotaline）诱导的大鼠PAH肺血管重构模型，观察骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）移植对肺组织超微结构的影响，探讨MSC移植逆转肺血管重构的机制。