Nrf2-Keap1抗氧化系统与肝脏疾病

核转录相关因子(NF-E2-related factor 2,Nrf2)是重要的转录因子,在氧化应激等情况下被激活与Kelch样ECH联合蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)解离进入胞质启动Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因的表达,增加细胞对氧化应激和亲电子化学物质的抗性.活性氧族和氧化应激在肝脏疾病的发病中取着重要的作用.本文对Nrf2-Keap1抗氧化系统与肝脏疾病的关系进行探讨.

传染病学双语教学效果评价与分析

目的:探索《传染病学》双语教学的方法,评价双语教学效果,为进一步在该课程中全面开展和改进双语教学提供依据。方法:选取开展双语教学后本科2007级临床医学专业65名学生进行问卷调查,研究他们对双语教学的看法,评价教学效果,并与未开展双语教学的本科2002级临床医学专业65名学生的传染病学考试成绩进行对比研究。结果:74.6%的学生认为有必要开展双语教学,69.8%的认为双语教学有助于专业知识的拓展,84.1%的学生认为应采用中、英文结合教材,83.7%的学生"能听懂或基本能听懂,"79.3%的学生对教师满意,两级学生期末考试成绩无显著性差异(P>0.05)。结论:在《传染病学》课程中开展双语教学是必要的,目前的双语教学模式不影响教学效果,但在教师授课技巧、教学时数等方面有待进一步改进。

慢性乙型肝炎的抗病毒治疗

自1965年Blumberg发现HBsAg以来,乙型病毒性肝炎(HBV)在分子病毒学、组织病理学、免疫学、流行病学及临床诊断治疗学等方面已取得了长足的发展,一些问题得到阐明达成了共识,但仍存在许多问题,我国是乙型肝炎的高流行区,全世界的慢性乙型肝炎患者我国占50％以上,而我国的乙型肝炎防治工作存在一些国外不曾有过的问题,这些问题需要我们自己来研究解决,可以说,在乙型肝炎临床与科研过程中充满了艰辛,我国的临床医师及基础科研工作者尽管在治疗中做了大量工作,遗憾的是至今尚未有重大性突破,这使我们喜忧参半、任重而道远。在临床研究中我国与欧美存在较大的差距,除外经济、政治和学风中的一些问题外,主要存在以下一些问题:(1)临床治疗试验不规范,难以严格的按照随机、双盲、对照和多中心原则实施临床科研方案;(2)临床科研与基础实验研究结合不够,重基础研究,轻临床科研;(3)存在多经验,少证据的现象;(4)肝活体组织检查较少,尤其是治疗前、后自身对照的肝活体组织标本甚少;(5)缺乏长期随访资料,医学资料保管不善,丢失现象较为普遍;(6)国内诊断试剂质量不稳定,缺乏统一标准,大多不能通过国际质检要求,实验数据难以得到国际权威性杂志的认可;(7)临床研究及经典流行病学调研难以获得基金资助等。慢性乙型肝炎已成为相关临床医生面临的重要问题,为了更好地解决这些临床问题,我们组织国内部分专家结合个人的临床经验及科研体会,对"慢性乙型病毒性肝炎的诊断与治疗"进行讨论,目的是引导临床医生科学、准确地处理这些问题,同时进一步深入开展慢性乙型肝炎的临床实用性研究,为提高我国慢性乙型肝炎诊治水平做出应有的贡献,造福于人类,这也是本期"焦点论坛"主办者的心愿。

蓝莓对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝细胞核因子相关因子2表达的影响

目的:研究蓝莓对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠的保护作用及相关机制。方法:40只健康C57BL/6J小鼠随机分为4组:正常组、蓝莓组、姜黄素组、模型组。正常组饲喂正常饲料,其余各组饲喂高脂饲料。蓝莓组每日灌胃蓝莓原浆(15 ml·kg-1·d-1);姜黄素组每日灌胃姜黄素溶液(200mg·kg-1·d-1);其余组小鼠灌胃等体积生理盐水,12周后处死。油红染色观察各组肝脏形态变化;全自动生化分析仪检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)含量;酶联免疫法检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及三酰甘油(TG)含量;Western blot检测小鼠肝组织中核因子相关因子2(Nrf2)蛋白的表达。结果:与模型组小鼠相比,蓝莓组、姜黄素组油红染色肝组织中脂肪沉积明显减少,血清AST、ALT、TG、TC含量明显降低(P<0.05),肝组织中TG、MDA含量明显下降(P<0.05),而SOD活性、GSH含量及Nrf2蛋白表达明显增高(P<0.05)。结论:蓝莓对NAFLD有较好的防治作用,其机制可能与上调肝组织中Nrf2的表达,提高机体抗氧化能力相关。

丹芍化纤胶囊对肝细胞线粒体脂质过氧化的影响

目的 :观察丹芍化纤胶囊对四氯化碳 (CCl4)中毒性肝纤维化模型大鼠肝细胞线粒体脂质过氧化的作用。方法 :分别提取正常对照组、肝纤维化模型组、自然恢复组、低剂量丹芍化纤胶囊治疗组、高剂量丹芍化纤胶囊治疗组大鼠的肝组织线粒体 ,测定丙二醛 (MDA)的含量。结果 :肝纤维化组及自然恢复组较正常组大鼠肝细胞线粒体MDA含量明显增高 (P <0 0 5 ) ,治疗后 ,高剂量治疗组及低剂量治疗组大鼠肝细胞线粒体MDA含量均较肝纤维化组及自然恢复组明显降低 ,基本恢复正常水平。结论 :丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠肝脏线粒体脂质过氧化具有一定的抑制作用 ,可能是其发挥抗肝纤维化疗效的机制。

善得定治疗肝硬化上消化道出血的疗效观察与成本分析

目的 :评价善得定和垂体后叶素治疗肝硬化上消化道出血的药物疗效与治疗成本。方法 :6 9例肝硬化上消化道出血病人随机分为善得定治疗组、垂体后叶素对照组 ,运用药物经济学成本 -效果比进行分析。结果 :治疗组的平均止血时间为 2 7 4 8h ,总有效率为 91 4 3% ,成本 -效果比为 14 2 7;对照组平均止血时间为 36 4 4h ,总有效率为 82 35 % ,成本 -效果比为 9 0 3。结论 :肝硬化上消化道出血的治疗可首选成本 -效果比较低的垂体后叶素 ,如效果不佳及时更换善得定治疗。

蓝莓对酒精性肝损伤大鼠肝组织TLR4表达的影响

目的:探讨蓝莓对酒精性肝损伤大鼠的保护作用及可能机制.方法:48只健康SD大鼠随机均分为4组:正常组、蓝莓组、异甘草酸镁组及模型组.除正常组不灌胃乙醇溶液,给予等体积生理盐水外,其余各组均使用560 mL/L的乙醇溶液灌胃.蓝莓组与异甘草酸镁组在灌乙醇溶液1 h后分别灌服蓝莓原浆及异甘草酸镁溶液.4 wk后处死所有大鼠.HE染色观察各组肝脏形态变化,采用自动生化仪检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)含量;Elisa法测定肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及白介素-8(interleukin8,IL-8)的含量;RT-PCR、Western blot检测大鼠肝组织中Toll样受体4(Toll-likereceptor 4,TLR4)的表达.结果:正常组大鼠HE染色未见异常,模型组HE病理切片出现弥漫性空泡,部分区域出现炎症细胞浸润,蓝莓组与异甘草酸镁组明显少见.与蓝莓组及异甘草酸镁组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC含量明显升高(F=47.984,14.974,149.338,94.896,均P<0.01);蓝莓组及异甘草酸镁组肝组织中SOD的蛋白活性明显高于模型组(F=35.390,P<0.01),而TNF-α、IL-8含量、TL R4 mRNA和蛋白质的表达明显低于模型组(F=76.250,37.971,141.932,62.750,均P<0.01).结论:蓝莓对酒精性肝损伤大鼠有较好的保护的作用,其机制可能与下调肝组织中TLR4的表达,并降低肝组织中TNF-α、IL-8的含量,提高SOD活性相关.

茅台酒对肝脏的作用及其影响的实验研究

目的 探讨饮用贵州茅台酒 (下称茅台酒 )对肝纤维化发生的影响及其可能的作用机制。方法 ( 1)雄性SD大鼠用茅台酒灌胃连续 5 6天后 ,处死并剖腹取肝 ,测肝组织金属硫蛋白和丙二醛含量 ;( 2 )分离鼠肝星状细胞及人肝星状细胞株做体外试验 ,观察茅台酒对肝星状细胞增殖和胶原生成的影响 ;( 3)SD大鼠茅台酒灌胃 ,连续 14周 ,取肝右叶进行病理组织学检查。结果 ( 1)茅台酒诱导大鼠肝脏金属硫蛋白含量比正常对照组增加 2 2倍 ,经茅台酒诱导处理的大鼠用CCl4中毒损伤 ,肝脂质过氧化产物丙二醛的形成较对照组明显减少 (P <0 0 5 ) ;( 2 )茅台酒呈浓度依赖性抑制肝星状细胞增殖 ,对胶原基因的表达与蛋白质分泌均有一定的抑制作用 ;( 3)茅台酒诱导高脂低蛋白饮食大鼠肝内有脂滴沉积 ,并有脂肪变性 ,肝间质仅有轻度纤维化 ,乙醇对照组大鼠肝脏呈典型肝硬化改变。结论 茅台酒诱导肝脏金属硫蛋白含量增加 ,从多环节抑制星状细胞的活化及其胶原蛋白生成可能是干预肝纤维化形成的重要机制。

蓝莓对大鼠肝星状细胞增殖、活化的影响及机制探讨

目的 观察蓝莓对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖、活化的影响及其机制.方法 采用Ⅳ型胶原酶消化和Nycodenz密度梯度离心的方法,分离、培养大鼠HSC,加入10%蓝莓低剂量及10%蓝莓高剂量动物血清干预体外培养的HSC,并设10%丹芍化纤阳性对照血清组（阳性对照血清组）和10%生理盐水血清对照组.用MTT比色法测定各组HSC的增殖效应,ELISA方法测培养液上清Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）的含量,免疫细胞染色法检测各组HSC内α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,采用Western印迹检测HSC、核转录相关因子（Nrf2）、Ⅰ型血红素氧化酶（HO-1）的表达.结果 与生理盐水血清组比较,蓝莓血清组均可显著抑制大鼠HSC的增殖（P＜0.05）,其抑制率与阳性对照血清组接近 蓝莓低剂量、高剂量血清组培养液上清Col Ⅰ的含量明显减低（P＜0.05） HSC内α-SMA的表达强度降低（P＜0.05）,与阳性对照血清组相当 Western印迹检测显示,与生理盐水血清组比较,蓝莓低剂量、高剂量血清组与阳性对照血清组HSC Nrf2和HO-1蛋白表达增多,以监莓低剂量、高剂量血清组增高更为明显（P＜0.05）.结论 蓝莓可抑制体外大鼠HSC的增殖和活化,减少细胞外基质的合成,对大鼠肝纤维化有潜在的干预作用,其机制可能与激活HSC Nrf2增加HO-1的表达有关.

蓝莓对大鼠肝星状细胞T6凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨蓝莓对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响.方法 血清药理学方法制备大鼠10％蓝莓低、中、高剂量血清、复方鳖甲软肝片血清及生理盐水血清.传代培养的HSC-T6分为生理盐水血清组、蓝莓低剂量血清组、蓝莓中剂量血清组、蓝莓高剂量血清组及复方鳖甲软肝片血清组,将上述血清分别加入各组HSC-T6,培养72 h后采用Annexin V/PI检测各组HSC-T6的凋亡,Western印迹及免疫细胞化学检测各组HSC-T6 Bax及Bcl-2蛋白的表达.结果 与生理盐水血清组比较,蓝莓低、中、高剂量血清组HSC-T6 Bax蛋白表达差异无统计学意义;蓝莓高剂量血清组HSC-T6早期及总凋亡率明显高于生理盐水血清组（5.55％±0.98％比2.53％±0.46％,7.01％±1.05％比2.96％±0.81％,均P＜0.05）;Bcl-2蛋白表达明显低于生理盐水血清组（A值,82±35比51±13,P＜0.05）;Bcl-2/Bax比值明显低于生理盐水血清组（0.26±0.02比0.46±0.03,P＜0.05）;蓝莓低、中剂量血清组HSC-T6早期及总凋亡率、Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax的比值与生理盐水血清组比较差异均无统计学意义.结论 蓝莓可通过下调Bcl-2、降低Bcl-2/Bax的比值诱导HSC-T6的凋亡,从而对大鼠肝纤维化有潜在的干预作用.

蓝莓对肝纤维化大鼠血红素加氧酶-1表达的影响

目的 观察蓝莓对大鼠肝纤维化的预防作用及对血红素加氧酶-1（HO-1）表达的影响.方法 45只SD大鼠随机分为生理盐水对照组（A组）、模型组（B组）、蓝莓汁预防组（C组）、丹芍化纤胶囊预防组（D组）及蓝莓汁加丹芍化纤胶囊预防组（E组）,每组9只.CCl4复合因素制备大鼠肝纤维化模型,各预防组给予蓝莓汁或（和）丹芍化纤胶囊灌胃,共饲养8周.测定各组大鼠血清ALT水平及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的表达,并进行肝组织病理学检查.采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫组织化学法和Western blot分析大鼠肝组织HO 1的mRNA及蛋白质表达.多组间数据比较用单因素方差分析,等级资料用秩和检验.结果 B组大鼠血清ALT水平高于A组[（203.25±31.62）U/L比（57.25±6.88）U/L,F=92.498,P＜0.05）],各预防组较B组明显减少[C、D和E组分别为（149.44±16.51）U/L、（136.88±10.07）U/L和（127.38±11.03）U/L,F=92.498,P＜0.05）].C、D、E组大鼠肝组织匀浆SOD水平分别为（1.36±0.09）U/mg、（1.42±0.13）U/mg、（1.50±0.15）U/mg,高于B组的（1.08±0.19）U/mg（F=13.671,P＜0.05）;MDA水平分别为（0.294±0.026）nmol/mg、（0.285±0.025）nmol/mg、（0.284±0.028）nmol/mg,低于B组的（0.335±0.056）nmol/mg（F=20.809,P＜0.05）.各预防组肝纤维化程度较B组也有所减轻（x2-24.956,P＜0.05）.B组大鼠肝组织HO-1的mRNA和蛋白质表达高于A组（F值分别为4.549和22.926,P值均＜0.05）,各预防组大鼠肝组织HO-1的mRNA和蛋白质表达均高于B组,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 蓝莓对CCl4所致大鼠肝纤维化有一定的预防作用;在慢性肝损伤时,蓝莓对HO-1的表达无明显影响.

蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化超微结构及CYP2E1表达的影响

目的:观察蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化超微结构及细胞色素P4502E1(CYP2E1)表达的影响。方法:50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、蓝莓原浆预防组(蓝莓组)、复方鳖甲软肝片预防组(复方组)、蓝莓原浆加复方鳖甲软肝片预防组(蓝莓+复方组)。猪血清复制大鼠肝纤维化模型,各预防组在造模同时给予蓝莓原浆或(和)复方鳖甲软肝片灌胃。12周后处死大鼠,观察肝组织超微结构变化,RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学法检测大鼠肝组织CYP2E1 mRNA及蛋白质的表达。结果:与模型组比,3个用药组肝纤维化程度明显减轻(P<0.05),超微结构病变明显改善,肝组织CYP2E1 mRNA及蛋白质表达无明显差异。结论:蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化有一定的预防作用,对肝细胞超微结构病变有一定的保护作用,对CYP2E1的表达无明显影响。

蓝莓对大鼠肝纤维化及肝细胞超微结构的影响

目的观察蓝莓对大鼠肝纤维化及肝细胞超微结构的影响。方法60只健康清洁级Wistar大鼠随机分为正常对照组（A组）、肝纤维化模型组（B组）、蓝莓原浆低、中、高剂量组（C、D、E组）及复方鳖甲软肝片组（F组），共6组，每组10只。除正常对照组外，其余各组均腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型，C、D、E、F组在造模同时分别给予蓝莓原浆或复方鳖甲软肝片灌胃，1次／d，共12周。12周末处死大鼠，行肝脏HE、Masson染色，并在透射电镜下观察肝组织超微结构变化。计算大鼠肝脏指数、测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平、肝组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、羟脯氨酸（Hyp）及还原型谷胱甘肽（GSH）含量。结果各组大鼠血清ALT、AST水平差异无统计学意义（P〉0．05）；蓝莓原浆中、高剂量组肝组织匀浆SOD活性、GSH含量明显高于肝纤维化模型组（均P〈0．05），肝脏指数、MDA及Hyp含量明显低于肝纤维化模型组（均P〈0．05）；肝纤维化程度明显减轻（P〈0．05），胶原表达减少，超微结构病变明显改善。结论蓝莓对猪血清所致大鼠肝纤维化有一定的预防作用，对肝细胞线粒体等细胞器损伤有一定的保护作用，以蓝莓原浆中、高剂量组效果较好。其机制可能与其增加肝脏SOD活性及GSH含量，降低MDA含量，提高机体抗氧化应激的能力有关。

谷胱甘肽复方注射液对免疫性肝纤维化大鼠肝组织MMP-13及TIMP-1表达的影响

目的:研究谷胱甘肽复方注射液(CGII)对猪血清所致免疫性肝纤维化大鼠肝组织中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及组织抑制剂-1(TIMP-1)mRNA和蛋白表达的影响。方法:猪血清腹腔注射8周,复制大鼠免疫性肝纤维化模型。将雄性Wistar大鼠随机分为正常组(N组)、模型组(M组)、还原型谷胱甘肽(GSH)组、CGII高(CH,10.8 mg·kg-1)、中(CM,5.4 mg·kg-1)、低(CL,2.7 mg·kg-1)剂量组,第6周末取大鼠肝组织行病理切片,苏木素-伊红(HE)染色,观察病理学改变;用实时荧光定量PCR和Western Blot检测大鼠肝组织中MMP-13以及TIMP-1 mRNA和蛋白的表达。结果:病理结果显示,与模型组相比,CH,CM和CL各组大鼠肝纤维化程度均有明显改善,大鼠肝组织内TIMP-1 mRNA及蛋白水平显著降低,MMP-13 mR-NA和蛋白表达水平明显升高。结论:CGII可明显减轻免疫性大鼠肝纤维化程度,其机制可能与下调TIMP-1 mRNA及蛋白水平,上调MMP-13 mRNA及蛋白水平,改善肝纤维化中MMP-13/TIMP-1的不平衡表达有关。

谷胱甘肽复方注射液治疗猪血清致大鼠肝纤维化的药效研究

目的:研究谷胱甘肽复方注射液(CGII)治疗猪血清致大鼠免疫性肝纤维化的药效作用。方法:建立猪血清诱导免疫性肝纤维化模型,全自动生化仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(A)及球蛋白(G)水平;酶免法检测血清中透明质酸(HA)的含量;称取肝脏湿重,计算肝脏指数;消化法检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量;苏木素-伊红(HE)及Masson染色处理肝脏组织切片;光镜观察病理学改变。结果:在猪血清诱导的大鼠肝纤维化模型中,所有剂量水平的CGII(2.7,5.4,10.8 mg.kg-1,im)能显著降低大鼠血清ALT,AST,A/G值和HA水平;中、高剂量CGII(5.4,10.8 mg.kg-1,im)能显著降低大鼠肝组织Hyp含量,明显改善肝脏病理组织状况;高剂量CGII(10.8 mg.kg-1,im)能显著降低大鼠肝脏指数。结论:CGII对猪血清致大鼠肝纤维化有治疗作用。

谷胱甘肽复方注射液对肝纤维化大鼠肝组织PDGF-B及TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究谷胱甘肽复方注射液(CGII)对猪血清所致免疫性肝纤维化大鼠肝组织中血小板衍生生长因子-B(PDGF-B)及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA和蛋白表达的影响。方法:建立猪血清诱导免疫性肝纤维化模型成功后,药物治疗6周。实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测大鼠肝组织中PDGF-B和TGF-β1 mRNA以及蛋白的表达。结果:在猪血清诱导大鼠肝纤维化模型,CGII(5.4,10.8 mg.kg-1,im)能明显降低肝组织PDGF-B及TGF-β1 mRNA的表达;CGII(2.7,5.4,10.8 mg.kg-1,im)能明显降低肝组织PDGF-B及TGF-β1蛋白的表达。结论:CGII抗大鼠免疫性肝纤维化的作用机制可能与其下调肝组织PDGF-B和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的表达有关。

血小板衍生生长因子及其新成员在肝纤维化发生机制中的作用

随着分子生物学技术的广泛应用，在肝纤维化研究领域不断取得新的进展。目前的研究已初步证实，肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）激活是肝纤维化发生的基础和中心环节。PLT衍生生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）则在肝脏慢性损伤引起HSC激活、发生型的转变过程中起主要作用，尤其是对HSC的增殖和趋化作用。