蚊幼虫病原真菌贵阳腐霉的生物学研究(英文)

为了开发灭蚊真菌贵阳腐霉Pythiumguiyangense用于蚊虫防治,对贵阳腐霉生物学特性进行了研究。采用菌丝生长率、真菌产孢情况以及对致倦库蚊Culexquinquefaciatus1龄幼虫的毒力作为评价的指标。测试了7种人工培养基、7种单糖、7种氮源、真菌生长所需的pH范围和温度范围、以及4种光-暗比的光照程序对真菌的影响。结果证明该真菌生长的适合温度为5℃～35℃,最佳温度为25℃～30℃;适合pH范围是5～12;在pH9～11范围内菌丝和游动孢子生长最好;测试的人工培养基中,按照菌丝生长速度从高到低排列,依次为Czapek’SFE、PYG、KPYG2、SDAY、CMA和PDA。其中从真菌的游动孢子形成量和对蚊幼虫的毒力来看,最佳培养基为SFE;葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露糖和可溶性淀粉都是本真菌的合适碳氢营养源;含有机氮的培养基比含无机氮的培养基好;不同的光照程序没有表现明显的影响,但是观察到紫外光对本真菌有明显的抑制作用。

海藻糖的生物合成与分解途经及其生物学功能

海藻糖是一类在干旱、低温、热击或脱水等逆境环境下具有独特抗逆保护作用的二糖,广泛分布于藻类、细菌、真菌和动植物体内。近年来,随着对海藻糖研究的深入,海藻糖已经被广泛应用到食品、医药、化妆品和分子生物学研究等领域。该文简述了海藻糖在生物体内的代谢途径、生物学功能和研究进展,并对灭蚊真菌Pythiumsp.GY1938菌株海藻糖代谢酶基因的研究前景加以展望。

生物技术专业学生对细胞生物学设计性实验的评价分析

目的:探索医学生物技术专业细胞生物学设计性实验的教学方法。方法:开设"中药或保健食物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力影响"的设计性实验,采用问卷调查方式,对教学效果进行评价。结果:教学效果良好,学生实验设计、操作和分析能力提高。结论:设计性实验在一定程度上有利于学生综合素质的培养,实施过程需要逐渐完善。

贵州树鼩生物学特性初步研究

研究了贵州省西南部树鼩的分类地位、地理分布、生态环境以及野外自然条件下的繁殖和食性等生物学特性。确认贵州树鼩统属中缅树鼩滇南亚种(Tupaia belangeriyunalis Thomas)在贵州西南盘江流域各县均有分布,修正了《贵州省脊椎动物分布名录》(1979)所记载的仅分布于兴义的海南亚种记录。野外自然条件下繁殖期集中在7～8月,怀孕树鼩胚胎一般4个,食性仍以昆虫为主。

灭蚊真菌贵阳腐霉Pythium guiyangense对大鼠的长期安全性测试

为了解灭蚊真菌贵阳腐霉Pythium guiyangense对大鼠是否有长期毒性作用。将大鼠120只随机分4组,经饮水口服贵阳腐霉菌丝体。菌丝剂量分别为200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg,对照组饮自来水。分别于试验期的90d和180d各组取鼠总数的1/3处死进行检查,剩余1/3大鼠待停用菌丝体悬液2周后处死。观察大鼠一般情况、血常规、肝肾功能等各项生化和组织学指标。结果表明各组大鼠均发育正常,精神食欲好,体重增加;血液学、生化指标变化无明显的剂量-效应关系;内脏系数无异常;对重要脏器的解剖学及组织学检查未见明显异常。本研究结果证明灭蚊真菌贵阳腐霉对大鼠是安全的,从而为其在防治蚊虫的推广应用中的安全性提供了重要的毒理学依据。

灭蚊真菌贵阳腐霉对小菜蛾幼虫安全性的室内检测

目的:了解灭蚊真菌贵阳腐霉对非靶生物小菜蛾幼虫是否有毒害作用。方法:采用胃毒法和触杀法处理小菜蛾四龄幼虫,24 h后观察幼虫死亡率、叶片重量差,5 d后观察化蛹率。结果:胃毒法和触杀法处理小菜蛾幼虫平均死亡率分别为15.5%和12.5%,叶片重量差分别为0.89 g和0.41 g,平均化蛹率分别为22%和17%。与对照组比较差异无显著性。结论:灭蚊真菌贵阳腐霉对小菜蛾幼虫是安全的。

贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)菌丝体及无性繁殖阶段的扫描电镜形态学观察

本研究通过快速制样方法制备标本,并用扫描电镜观察,首次对具有灭蚊作用的腐霉属新种—贵阳腐霉的菌丝及其无性繁殖阶段的外部形态和表面结构进行研究。观察发现菌丝呈索状,表面粗糙;孢子囊壁有厚实感,表面粗糙,有微细皱折、独特纹饰和绒毛,一些孢子囊可见1个-4个凹陷;游动孢子表面具纹饰,凸面较光滑,凹面粗糙,体表也具有绒毛状突起及凹陷。

贵阳地区常见嗜尸性蝇类丽蝇科DNA条形码的构建

目的:构建贵阳地区常见嗜尸性蝇类丽蝇科的系统发育树。方法:对家兔尸体上采集到的嗜尸性蝇类丽蝇科的卵、幼虫及成虫提取DNA,扩增COI基因条形码区的序列,采用CLC Sequence View、MEGA软件进行序列分析,构建系统发育树。结果:共采集到丽蝇科5属9种嗜尸性蝇类,经序列测定确定各样本的形态学鉴定与分子鉴定是符合的,并以此序列构建出贵阳地区常见嗜尸性蝇类丽蝇科的系统发育树。结论:可以利用COⅠ基因条形码区序列构建的系统发育树进行贵阳地区嗜尸性蝇类的种属鉴定。

贵阳腐霉类枯草杆菌蛋白酶(Pr1)的纯化与部分特性研究(英文)

目的:纯化灭蚊真菌贵阳腐霉胞外蛋白酶类枯草杆菌蛋白酶,并测定其分子量。方法:培养贵阳腐霉菌丝体,用几丁质诱导,使其产生大量胞外酶,对其产酶条件进行了部分优化。将粗酶液经过脱盐,浓缩进一步纯化,再过Sephadex G-100柱子层析并进行SDS-PAGE,分离类枯草杆菌蛋白酶。结果:(1)以几丁质为唯一碳氮源,在26℃,初始pH值6.0,1%的菌丝接种量为最佳诱导条件;(2)分离得到的类枯草杆菌蛋白酶,并测定其分子量约为33kDa。结论:类枯草杆菌蛋白酶纯化成功,结果较理想,为进一步研究提供依据。

生物技术专业本科毕业论文设计性实验的初探——以环带库蚊ISSR-PCR反应体系建立及优化为例

毕业论文作为本科教学过程中的一个重要环节,具有不可替代的作用。以环带库蚊ISSR-PCR反应体系建立及优化为例,从毕业论文的选题、可行性分析、实验准备及实验研究等方面介绍贵阳医学院生物技术专业毕业论文实验的设计过程。学生顺利完成本科毕业论文实验,建立了环带库蚊稳定的ISSR-PCR反应体系,为今后系统研究环带库蚊的种群遗传多样性奠定了基础,达到了生物技术专业本科毕业论文实践教学的目的。

灭蚊真菌贵阳腐霉对几种动物的急性安全性测试

目的:了解灭蚊真菌贵阳腐霉(Pythium guiyangenseSU)对非靶动物是否有毒害作用。方法:用贵阳腐霉菌丝体及游动孢子以灌胃法和腹腔注射法处理小鼠,观察小鼠的食欲、活动等一般情况并监测体重;用贵阳腐霉菌丝体通过经皮、黏膜染毒,过敏休克试验,接触过敏试验等方法处理豚鼠、家兔、鱼、鸡等动物,观察动物受试部位的局部变化及一般综合情况。结果:真菌菌丝体对小鼠经口LD50(1600 mg/kg,经腹腔注射LD50(400mg/kg;游动孢子经口、腹腔注射的LD50(104孢子/ml,对小鼠、豚鼠、家兔等无感染致病性;对皮肤、黏膜无刺激性,试验动物无超敏反应表现。结论:灭蚊真菌贵阳腐霉对小鼠、豚鼠、草鱼、金鱼以及家禽等受试动物是安全的,是一株具有开发应用价值的灭蚊真菌,为贵阳腐霉防治蚊虫的推广应用及安全使用提供了毒理学依据。

贵阳腐霉类枯草菌素蛋白酶基因的原核表达

目的:实现贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)类枯草菌素蛋白酶(subtilisin-like protease,Pr1)基因在大肠杆菌中的活性表达,验证已获得的基因序列(YP1977)是否属于subtilisin-like protease基因家族成员。方法:(1)提取贵阳腐霉总RNA,以已获得的序列(YP1977)为模版设计引物,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增Pr1基因ORF片段;(2)构建含有Pr1基因ORF序列、绿色荧光蛋白基因ORF序列的重组质粒pTWIN1-Pr1-EGFP,转化表达菌株E.coliER2566,IPTG诱导菌株表达Pr1蛋白酶。结果:成功构建含有Pr1基因ORF序列、绿色荧光蛋白ORF序列的重组质粒pTWIN1-Pr1-EGFP,实现了Pr1基因在大肠杆菌中的活性表达。结论:证明已获得的DNA序列是贵阳腐霉的一个Pr1基因的编码区。

贵阳腐霉类胰蛋白酶产酶条件的研究(英文)

目的:观察灭蚊真菌贵阳腐霉产生类胰蛋白酶(Pr2)所需的诱导条件。方法:通过单因素诱导物、温度、pH值等比较试验摸索其产生Pr2的适宜条件。结果:贵阳腐霉产Pr2的适宜条件是在100 m l基本盐培养基中,以1%蝉蜕为唯一碳氮源,在26℃,初始pH值8.0,1%的菌丝接种量。结论:本研究初步确定的贵阳腐霉的Pr2产酶条件,为该酶的进一步研究提供了有价值的参考。

灭蚊真菌贵阳腐霉原生质体诱变育种实验研究

目的:建立采用紫外线和氯化锂诱导灭蚊真菌发生突变的方法,为培育理想菌株开辟新的途径。方法:对出发菌株贵阳腐霉的原生质体进行诱变处理,通过正突变率与紫外、化学诱变剂量的相互关系,确定最佳诱变条件,经过酪蛋白平板透明圈和菌粉得率粗筛突变株,连续8代传代培养及摇瓶实验检测突变株的遗传稳定性。结果:当用0.6%氯化锂处理90min时,突变株的致死率和正突变率分别为86.9%和26.9%;用20W紫外灯30cm照射180s,突变株致死率为81.3%、正突变率为78.5%;筛选了7株突变株,其中U22经传代实验证明其遗传性状稳定。结论:本研究所建立的对贵阳腐霉原生质体诱变系统基本成功,为该菌的细胞工程育种创造了条件。

绿色荧光蛋白在贵阳腐霉的组成性表达

以潮霉素抗性基因hph为筛选标记,以双元载体pPK2为基本骨架,将增强型绿色荧光蛋白基因egfp置于组成型启动子PgpdA和色氨酸C终止子TtrpC之间,构建了组成性表达egfp的载体pPK2-EGFP,利用根癌农杆菌介导的遗传转化法,转入贵阳腐霉(Pythium guiyangense)表达。对转化子进行RT-PCR和荧光显微镜检测,结果表明,egfp基因在贵阳腐霉转化子中能稳定表达。

灭蚊真菌贵阳腐霉长期保存方法的研究

目的:探讨贵阳腐霉最佳的保存方法,以延长其有效保质期。方法:以菌丝体生长速度和灭蚊毒力为指标,观察分别在不同培养基、温度、氧分压条件下保存1、2、3、4、5个月的贵阳腐霉的质量,总结对该真菌保存影响较大的因素。结果:观察发现,在水琼脂培养基上保存的菌丝体生长速度最快;在葵花籽提取物(SFE)培养基上保存的菌丝体灭蚊毒力最高;4℃是贵阳腐霉长期保存的最佳温度,在-25℃和-75℃条件下菌丝体不能存活;氧分压分别为100%、66.7%、33.3%及0时保存的菌丝体差别不大,但33.3%氧分压保存的菌丝体稍好。结论:本研究总结了贵阳腐霉保存的最佳条件,为其商业开发和工厂化生产提供了有价值的资料。

致倦库蚊防御素基因的克隆与生物信息学分析

目的:获取致倦库蚊(贵阳株)防御素基因CxDefensin全长编码序列。方法:采用RT-PCR方法扩增致倦库蚊(贵阳株)CxDefensin开放阅读框(ORF)序列,并通过生物信息学方法分析其核苷酸和蛋白质序列。结果:CxDefensin ORF序列全长300 bp,编码99个氨基酸,包含1个内含子,蛋白质分子量是10.58 kDa,等电点为6.52。CxDefensin蛋白与其他昆虫的defensin蛋白具有同源性。结论:所获致倦库蚊(贵阳株)防御素基因Cx-Defensin归属昆虫防御素基因家族,为昆虫β型防御素。