猫脊髓前角运动元区的P物质——免疫电镜研究

用包埋前免疫电镜ABC法研究猫脊髓前角运动元区的P物质样免疫反应(SP-LI)超微结构定位。发现:SP-LI出现于前角运动神经元核周体内游离型及结合型核糖体、粗面内质网、线粒体外膜以及高尔基复合体浓缩大泡,并且还出现于中小型树突的核糖体、微管和线粒体外膜。在阳性树突棘内通常可发现标记的大颗粒囊泡(LGVs)与质膜融合。在神经网内还检测到大量阳性标记的轴突终末。终末内若干LGV聚集成团,远离突触活性区和轴膜融合。上述发现提示脊髓前角运动神经元既是胆碱能又是P物质能。同时发现,在前角运动元区也存在含P物质LGV的胞吐现象。本研究在方法上进行了四个方面的修改。结果证明,修改后的方法既能保存细胞的膜结构完整性又保持了抗原的活性。

透射电镜超薄切片法与负染法探讨

透射电镜生物样品超薄切片技术是医学生物学研究中常用的方法。其它一些制备技术如免疫电镜、电镜细胞化学、放射自显影等，都必须进行超薄切片；而超薄切片所显示的生物样品的微细结构，也是识别扫描电镜图像、冷冻蚀刻复型及其他电镜图像的基础。负染色是相对正染色而言...

日立H-7650透射电镜的快速调整与操作

现代透射电镜是电镜与计算机结合的产物,由于计算机软件程序对电镜操作的控制,使透射电镜运行的复杂过程简单一键开机、光轴调整、样品观察到三个步骤。H-7650的样品台和成像部分,安装了三维马达驱动和CCD,掌握好H-7650的操作要点,该透射电镜的多项机械和电子光学参数调整,都可以在瞬间自动或手动完成。

原因不明男性不育精子超微结构与顶体酶关系的研究

目的 研究原因不明不育男性精子超微结构与顶体酶活性之间的关系。方法 利用透射电镜和明胶底物膜技术对 12例原因不明男性不育患者和 10例有生育力男性精子超微结构和顶体酶活性关系进行对比观察。结果 正常生育组顶体酶活性阳性反应率高于男性不育组 ( P<0 .0 5 ) ,并且前者顶体酶活性反应较后者强 ,但两者间无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。电镜观察 :不育组精子顶体膜受损程度、脱落的生精细胞以及胞质残体均高于正常生育组。

精子顶体完整率与顶体酶活性的关系

选择精子顶体完整率正常和异常的男性不育患者以及生育男性新鲜精液标本各１０例，研究精子顶体完整率对顶体酶活性的影响，结果发现：生育组与精子顶体完整率正常的男性不育组顶体酶活性阳性反应率比较，Ｐ＜０．０５。进行顶体酶活性强度比较，Ｐ＞０．０５。生育组与顶体完整率异常的男性不育组上述两方面比较，Ｐ均＜０．０１，提示精子顶体完整率与精子顶体酶活性有一定的相关性。

燃煤型氟中毒对大鼠睾丸超微结构的影响

目的研究燃煤型氟中毒对SD大鼠睾丸超微结构的影响。方法以SD大鼠为研究对象,按体质量均衡随机分为7组:对照组、高氟组、中氟组、低氟组、高氟加营养组、中氟加营养组、低氟加营养组。各染毒组喂饲含不同比例的燃煤型氟中毒病区煤烘玉米的饲料,复制燃煤型氟中毒动物模型。分3批(90 d,120 d,180 d)以股动脉放血法处死动物,查看氟斑牙,测尿氟。常规制作睾丸超薄切片,用透射电镜观察睾丸超微结构的变化。结果 (1)建成氟中毒动物模型,90 d各染毒组均出现氟中毒表现,对照组正常。中毒程度随氟剂量增加和染毒时间延长而加重;氟剂量相同时,营养好,中毒程度轻。(2)对照组结构正常。染毒组曲精小管内各级生精细胞生成减少,精子数量减少,各级生精细胞、睾丸间质细胞、肌样细胞、支持细胞的超微结构均有不同程度的病理变化。随氟剂量增加和染毒时间延长,病变加重。相同染氟剂量和加营养组比较,加营养组病变程度减轻。结论 (1)燃煤型氟中毒对SD大鼠睾丸组织超微结构有明显的损伤作用,随氟剂量和染毒时间延长,病变加重。(2)降低摄氟量及改善营养状况,可改善氟中毒对大鼠睾丸超微结构的损伤。

灵芝三萜类化合物对AD模型大鼠脑组织保护作用的研究

目的:观察灵芝三萜类化合物(GLT)对AD模型大鼠海马组织形态的影响。方法:70只大鼠随机分为生理盐水组,假手术组,模型组,溶媒组,GLT低、中、高剂量组;除生理盐水组和假手术组外,其余各组大鼠单侧海马内一次性注射Aβ25-35制作AD大鼠模型,术后生理盐水组、假手术组、模型组大鼠分别灌胃生理盐水,溶媒组灌胃食用油,GLT各组分别灌胃低、中、高剂量的GLT20d,然后采用透射电镜观察海马神经元的超微结构变化。结果:GLT能明显改善模型大鼠脑组织海马CA1区神经元的退行性变化。结论:GLT能改善大鼠海马CA1区神经元的退行性变化。

大鼠慢性氟中毒听觉损伤的实验观察

目的探讨慢性氟中毒大鼠耳蜗毛细胞形态学的改变和听力损失的机制。方法借助畸变产物耳声发射(distortion product otoacoustic emissions,DPOAE)测试和扫描电镜技术,对60只大鼠进行了实验观察。结果DPOAE测试结果显示对照组与低氟组、高氟组8kHz反应幅值差异均有显著性(P<0.05),0.5、1、2、4kHz各组数据经统计学处理(P>0.05),无统计学意义。对照组耳蜗内、外毛细胞排列规则。低氟组的内、外毛细胞都有不同程度的损害,表现为静纤毛粘连、倒伏。高氟组内、外毛细胞的损害严重,出现明显的粘连、倒伏、融合,并可见散在的节段性缺失,以底圈明显。表皮板结构发生不同程度的病变,严重者表皮板穿孔,细胞内容物流出,形成气球样改变。结论慢性氟中毒明显影响听力,导致高频感音神经性耳聋,其损害机制可能是氟对耳蜗毛细胞的直接损害造成的。听功能损害的严重程度与氟中毒程度相关。

依达拉奉体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化

目的采用密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、培养、纯化及鉴定成年Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和依达拉奉联合诱导MSCs定向分化为神经元样细胞。方法选用1月龄健康雄性Wistar大鼠,采用Percoll分离液密度梯度离心法获取骨髓中的MSCs,通过差速贴壁法反复传代培养、纯化,取第3代细胞采用流式细胞术、免疫细胞化学等方法检测MSCs的纯度,利用bFGF联合依达拉奉诱导MSCs向神经元样细胞分化,并通过扫描电镜、免疫细胞化学等对诱导后的细胞进行鉴定。结果第3代MSCs经免疫细胞化学及流式细胞仪等检测,间充质干细胞特异性的标记物CD44表达阳性,不表达造血干细胞及白细胞的特异性标记物CD34、CD45,MSCs纯度高达95.5%。诱导分化后扫描电镜检测可观察到典型的神经元样细胞结构;免疫细胞化学检测发现,细胞表达神经元特异性烯醇化酶(NSE),不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP),Nestin的表达随着细胞成熟而减弱。结论密度梯度离心和差速贴壁法可获得高纯度的MSCs;依达拉奉能高效地定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。

国产环氧树脂618半薄切片制备及染色法

对用国产６１８树脂包埋的样品进行半薄切片过程中的修块、定位及染色过程进行了探索，提出了１套完整的方法。该方法得到的半薄切片色彩鲜艳。

人生精细胞内酶性磷酸酶活性与膜结构关系的研究

目的 研究人生精细胞内酸性磷酸酶 (ACP)活性与细胞膜结构之间的关系。方法 选取 5例抗精抗体 (AsAb)阳性 (不育A组 ) ,9例生殖系统有过炎症中 (不育B组 )及 6例原因不明 (不育C组 )共 2 0例男性不育患者新鲜精液 ,同时取 8例正常生育男性新鲜精液作对照 ,用Gomori s铅法对标本进行孵育后 ,在透射电镜下观察。结果 AsAb阳性和有炎症史男性不育患者标本中 ,见较多的脱落生精细胞 ,有大量与铅结合的ACP显现于溶酶体 ,ACP活性明显升高。ACP阳性反应数在生育组和不生育A、B、C组分别为 4、16、19和 5 ,生育组与不育组A、B组间的差异均有显著性 (P <0 .0 5或 0 .0 1)。结论 ACP活性大小与精子和膜的损伤密切相关 ,检测ACP活性可推断生精细胞和膜受损程度 。

不育男性精液中精子头部及尾部超微结构的研究

目的:研究不育男性与正常男性精子超微结构的差异。方法:利用透射电镜对10例不育男性和8例生育男性新鲜精液标本中的精子头及精子尾部超微结构进行对比观察。结果:在电镜下,不育组精子存在多形态超微结构异常,精子顶体膜受损程度、精子尾部线粒体肿胀变形及胞质残体均高于生育组,经统计学处理,两组间存在的差异有显著性意义(P<0.05)。结论:男性不育与顶体膜结构受损及精子超微结构的异常等密切相关。

慢性镉中毒小鼠睾丸及肝、肾的细胞形态计量学研究

应用透射电镜和细胞形态计量方法对慢性镉中毒小鼠的睾丸及肝、肾等的超微结构形态定量分析，用５只镉中毒雄性小鼠及５只正常对照鼠进行体视学研究，提取了几十个形态参数，全面描述有关细胞器的病理改变特征，为镉损伤所致的形态变化提供定量依据。主要参数与正常组对照有显著性差异。（Ｐ＜０．００１～０．０５）。

隐性遗传营养不良型大疱性表皮松解症2例

例1．男，6岁。闪全身反复出现水疱、糜烂6年于2007年6月就诊。患儿出生后第2天，左手背出现一绿豆大水疱，疱壁薄，疱液清，家属自行用针刺破后水疱干涸结痂。后全身出现散在绿豆至蚕豆大水疱、血疱．破溃后形成糜烂面、结痂，愈后遗留萎缩性瘢痕。

贵州省侗族人群mtDNA 9 bp序列缺失频率及DYS287位点多态性研究

目的:分析贵州省侗族人群线粒体DNA 9 bp序列缺失频率及Y染色体DYS287位点的多态性。方法:用PCR-聚丙烯酰胺凝胶法(PAGE)分析mtDNA 9 bp缺失多态性,DNA序列分析法验证结果;用PCR-琼脂糖凝胶电泳检测法分析DYS287位点多态性。结果:在96例侗族男性个体中,mtDNA 9 bp缺失多态频率为13.54%(13/96),DYS287全部显示为YAP-。结论:获得贵州省侗族人群mtDNA 9 bp序列缺失频率及Y染色体DYS287位点多态数据,为该民族群体遗传分析及起源提供了相关遗传背景资料。

慢性镉中毒小鼠曲细精管基膜和界膜厚度的测定

应用形态计量方法测算镉中毒小鼠曲细精管的基膜和界膜厚度,发现基膜的算术平均厚度是正常值的1.97倍,界膜的算术平均厚度是正常值的1.77倍,实验结果表明,镉中毒使小鼠基膜、界膜的厚度增加。

镉中毒小鼠肝细胞的立体学定量研究

本文用立体学定量分析镉中毒小鼠肝细胞核、线粒体、脂滴的变化,计算其比表面,体密度、数密度等细胞相对结构参数,发现肝细胞核及线粒体的平均体积(V)、表面积(S)均显著缩小,高剂量组的V、S与正常对照组有高度显著性差异(P<0.01);脂滴的V、S则明显增大。

体外培养胚鼠中脑神经干/祖细胞超微结构分析

目的:研究并分析神经干细胞的超微结构和生物学特征。方法:无血清培养大鼠胚胎中脑组织中神经干细胞,用血清诱导分化。扫描及透射电镜观察神经球及单个神经干/祖细胞的超微结构。结果:培养的神经干/祖细胞呈神经球样生长,经血清诱导可分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞。扫描电镜下神经球表面的细胞直径约为5～10μm,常3～5个以上彼此粘附聚集成簇,松散不规则分布。透射电镜下神经球由神经干细胞和无定形结构的物质构成,根据电子密度不同分为明细胞和暗细胞。神经球内部大部分相邻细胞排列紧密,部分细胞可见有贯通两相邻细胞膜的通道;少部分相邻细胞排列疏松,并见部分相邻细胞间有壁呈腺泡样结构的囊泡的释放活动。神经球内干/祖细胞核质比高,多种细胞器不发达,高尔基复合体、核糖体、溶酶体等在不同神经干/祖细胞中的数量和分布不一致。多见自噬小体,髓样体。大部分细胞为单核,罕见双核、肾形核,常染色质多分布均匀,异染色质少,多见单个核仁。结论:胚鼠中脑神经干/祖细胞球内紧密排列的相邻细胞间有贯通两胞膜的孔道,排列疏松的相邻细胞间有腺泡样结构的囊泡的释放活动。研究结果为进一步研究多因子对神经干/祖细胞的发育增殖、定向分化的调控及其相关途径奠定了一定基础。