siRNA干扰GADD45联合顺铂对人卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究siRNA沉默GADD45联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV-3增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的GADD45基因siRNA序列转染至SKOV-3细胞中,将SKOV-3细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组、干扰组、顺铂组、联合组(干扰+顺铂)。通过MTT比色法、流式细胞术和分光光度法分别检测SKOV-3细胞增殖率、细胞凋亡率、细胞周期各时相分布、Caspase-3和Caspase-9的活力变化以及胞质中Cytochrome C水平变化。结果 GADD45 siRNA转染后,相对于顺铂处理组,联合组细胞凋亡率明显增加(P<0.01);细胞周期各时相重新分布,G0/G1期细胞显著减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞则显著增多(P<0.01);Caspase-3和Caspase-9活力显著升高,胞质中细胞Cytochrome C水平明显增加(P<0.01)。结论 GADD45靶向siRNA沉默联合顺铂处理通过调节细胞周期进程阻碍DNA损伤修复进而促进了线粒体依赖性的细胞凋亡,GADD45可作为人卵巢癌基因治疗的后选靶点。

PARP-1抑制剂ABT-888对依托泊苷诱导A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨PARP抑制剂ABT-888在依托泊苷(VP-16)诱导的A549细胞增殖及凋亡中的作用。方法:常规培养A549细胞,经VP-16和(或)ABT-888处理24小时后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察细胞的增殖情况,通过流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡情况,通过彗星实验评价DNA损伤程度,通过Western blot法检测细胞线粒体和胞浆中线粒体相关细胞凋亡因子细胞色素c水平变化。结果:VP-16和ABT-888联用组的细胞增殖率明显低于对照组和VP-16组(P<0.01),细胞凋亡率则显著高于对照组和VP-16组(P<0.05);同时,VP-16和ABT-888联用组细胞DNA损伤水平较对照组和VP-16组明显加重(P<0.01),而细胞色素c在胞浆中的水平则显著高于对照组和VP-16组(P<0.01)。结论:PARP抑制剂ABT-888可通过抑制PARP活性,进而阻碍细胞DNA修复,来增强A549细胞对于抗癌药物VP-16的药敏性,此可为肺癌的临床治疗提供一个新的靶点。