芒果LAR cDNA的电子克隆及序列分析

为了克服传统的基因电子克隆利用EST数据库需要反复比对与拼接而带来的繁琐,本研究利用SRA、TSA等数据库,通过BLAST搜索同源序列,Serial cloner软件寻找同源序列的开放阅读框架,CLUSTAW比对序列同源性等分析手段,建立了一种基因电子克隆的新方法。通过此方法,获得了芒果无色花青素还原酶(leucocyanidin reductase, LAR)基因的编码序列。根据此编码序列、设计引物,通过RT-PCR扩增,获得了长度为1 062 bp的芒果LAR基因序列,经双酶切、连接等方式,构建了含有LAR基因的重组植物表达载体pMAA-RedMilar。本研究结果将有助于进一步解析芒果LAR基因在原花青素生物合成中的作用,也为其他基因的电子克隆提供了新方法。