miR-23a对肺腺癌细胞95-D迁移和侵袭能力的影响

目的:研究miR-23a对人肺腺癌细胞95-D增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:常规培养人肺腺癌细胞95-D,经脂质体转染miR-23a mimic和inhibitors片段后,通过MTT、流式、Transwell实验,观察对95-D细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果:MTT结果表明miR-23a mimic可促进细胞生长(P<0.05),miR-23a inhibitors可抑制细胞生长(P<0.05),但抑制率不高;流式结果表明miR-23a对细胞周期影响不大;Transwell实验结果表明miR-23a mimic可以促进细胞侵袭和迁移(P<0.01),而miR-23a inhibitors可以减弱细胞侵袭和迁移能力(P<0.01)。结论:miR-23a可促进肺癌细胞的侵袭转移。

敲减NLRC3表达对人正常支气管上皮BEAS-2B细胞生长的影响

目的:探讨敲减含胱天蛋白酶募集结构域的NOD样受体家族蛋白3(NLRC3)表达对人正常支气管上皮细胞株BEAS-2B活力和凋亡的影响及机制。方法:使用Lipofectamine 2000转染试剂将NLRC3基因的小干扰RNA(siRNA)片段转染至BEAS-2B细胞;RT-qPCR筛选干扰片段;MTT法检测细胞活力;JC-1检测细胞线粒体膜电位变化;annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果:NLRC3基因的干扰片段3(siNLRC3-3)干扰效果最佳(P<0. 01)。在BEAS-2B细胞中敲减NLRC3可显著增强细胞活力(P<0. 01)。敲减NLRC3表达可显著升高线粒体膜电位,使细胞凋亡率显著下降(P<0. 05)。敲减NLRC3表达使细胞中Bcl-2蛋白表达水平显著上调,而Bax蛋白表达水平显著下调(P<0. 01)。结论:敲减NLRC3基因可通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达,增强BEAS-2B细胞活力并抑制其凋亡。

双黄连逆转肺炎克雷伯菌耐药的体内效果初探

目的:探讨双黄连逆转肺炎克雷伯菌耐药的体内效果。方法:建立耐药的SD大鼠肺炎克雷伯菌模型;再随机分4个治疗组:PBS组、双黄连组、头孢他啶组及联合治疗组;治疗3天后观察各组临床表现,并测定各组大鼠肺内活菌数,以及这些活菌对头孢他啶的药敏效果。结果:临床表现和病理切片结果表明耐药肺炎克雷伯菌大鼠建模成功;各组治疗结果表明,联合治疗组大鼠在临床表现上痊愈,肺内活菌数及活菌的MIC与两个单独治疗组和PBS对照组相比显著减少(P<0.01),而两个单独治疗组的大鼠在临床表现上基本无好转,肺内活菌数及活菌的MIC与PBS组相比相对减少,差异不大。结论:中药双黄连可降低肺炎克雷伯菌大鼠的耐药。

人胎盘源间充质干细胞的分离、培养及生物学鉴定

目的:探讨机械剪碎组织加酶液消化法分离、培养人胎盘间充质干细胞的可行性,并对间充质干细胞进行生物学鉴定。方法:取足月产人胎盘,采用机械剪碎组织加酶液消化法分离,密度梯度离心法提纯胎盘组织中的细胞,利用细胞生长特性对细胞进行进一步分离、纯化并传代培养,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术鉴定细胞表面标记。结果:在倒置显微镜下,细胞为贴壁生长,形态呈长梭形,少数为多角形,胎盘组织来源间充质干细胞在体外可稳定长期传代培养,应用流式细胞仪检测结果显示CD73、CD90、CD105表达阳性,CD34、CD45、HLADR表达阴性。结论:联合利用机械剪碎胎盘组织和酶消化法可高效获取胎盘间充质干细胞,获取的胎盘间充质干细胞在体外培养过程中生长稳定,增殖能力强,可长期传代或冻存。

血清胱抑素C在介入治疗糖尿病足中的意义

目的:探讨胱抑素C(Cys C)在糖尿病足发病及介入手术术后的意义。方法:选取2014年1月至2015年4月期间来我院就诊的糖尿病足患者40例(糖尿病足组),单纯糖尿病患者40例(单纯组),健康体检者40例(正常组);术前抽血检测患者血清胱抑素C(Cys C)、C-反应蛋白(C-RP)水平;糖尿病足组患者于术后第1、3、7天复查血清胱抑素C、C-反应蛋白水平及踝肱指数(ABI)。结果:术前正常组、单纯组与糖尿病足组血清Cys C和C-RP平均水平存在差异,差异有统计学意义(P <0. 05)。32例糖尿病足患者成功开通闭塞血管。糖尿病足组患者术后第1、3、7天血清Cys C、C-RP水平均呈先升高后降低趋势,各时间点两者水平均存在差异,差异有统计学意义(P <0. 008 3)。术后随访24月中,前12个月再次返院治疗者13例,后12个月再次返院治疗者16例;回顾性分析两组患者术前Cys C水平,前者较后平均水平要高,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:血清胱抑素C可能是糖尿病足的一项独立危险因素与预后的一项指标,可以作为糖尿病足介入手术疗效的评价指标。

心脏转录因子Nkx2-5、GATA-4真核表达质粒的构建

目的:构建人类心脏特异性转录因子Nkx2-5、GATA-4的真核表达质粒,探讨Nkx2-5、GATA-4在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法:以质粒人脑c DNA为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2-5、GATA-4编码区序列。将真核表达载体pCDNA 3.1-HA、pCDNA 3.1-flag分别和Nkx2-5、GATA-4的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCDNA 3.1-HA-Nkx2-5、pCDNA 3.1-flag-GATA-4,转化至大肠杆菌,质粒抽提后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果:成功设计引物扩增出Nkx2-5、GATA-4基因编码区约1 kbp及1.3 kbp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2-5、GATA-4基因序列。结论:成功构建了含有Nkx2.5、GATA4的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。

NLRC3在肿瘤发生发展中作用的研究进展

模式识别受体(如TLR,NLR,CLR,RLR)是宿主免疫系统的重要组成部分并与肿瘤发生关系密切[1-3]。NOD样受体(nucleotide-binding domain,leucine-rich repeat containing receptors,NLRs)是与内外源性病原或损伤相关分子模式(PAMPs、DAMPs)引起的免疫和炎症反应相关的模式识别受体。NLRs分子[4]根据其生物学功能的差异将其分为形成炎性小体NLRs(如:NLRP1、NLRP3、NLRP6、NLRC4、NLRC5)和非形成炎性小体NLRs(NLRP12、NLRX1、NLRC3)。其中NLRC3是含有CARD(caspase-recruitment domain)结构域的NOD样受体家族3简称,是一种新发现的在免疫细胞内高表达的非形成炎性小体家族成员,由第16号染色体的基因所编码的在进化上高度保守的胞质内模式识别受体[5]。

miR-23a在肺癌进程中的作用

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的非编码RNA,由于其能调节细胞代谢、增殖、凋亡、迁移等基本过程,因此在哺乳动物细胞的发育、分化和细胞内稳态中起着重要作用。它们的表达异常会导致各种病理过程发生。由于单个microRNA能够靶向大量的mRNA序列,因此miRNA异常表达能够影响转录并激活癌症相关通路。miR-23a是miRNA家族中的一员,研究表明miR-23a在肺癌形成和发展中发挥重要作用,本文就miR-23a在肺癌发生发展中的作用进行综述。

Flap核酸内切酶1与恶性肿瘤相关性研究

Flap核酸内切酶1(flap endonuclease 1,FEN1)是一种具备特异性结构的多功能核酸酶,其参与机体细胞多种DNA代谢途径,在维护人类基因组稳定性、防止细胞恶性转化中发挥着不可或缺的作用。近年来,FEN1的功能、作用机制逐渐成为研究热点,异常表达的FEN1与肿瘤发生、发展有着密切的关联,通过认识FEN1在肿瘤细胞活动调节中的具体作用与机制显得尤为必要。文章将从FEN1分子结构、生物学功能、在肿瘤细胞的调节作用与机制等方面予以论述,同时对FEN1参与表观遗传学调控机制进行适当阐述,以期为今后肿瘤相关领域的基础科研与临床研究提供新思路。

组蛋白乙酰化修饰与类风湿关节炎的研究进展

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种具体发病机制不明的慢性炎症性自身免疫病,基本病理改变为关节滑膜炎症,伴关节软骨和骨的渐进性破坏,病情未控制者最终会出现关节畸形、功能丧失。近年来,组蛋白乙酰化修饰在炎症免疫性疾病中的作用机制受到广泛关注,组蛋白去乙酰化酶抑制剂在自身免疫性疾病的有益作用不断被发现,为疾病的治疗提供了新思路。作者综述了组蛋白乙酰化修饰及相关酶抑制剂在RA中的作用的相关研究进展。