橄榄苦苷改善肝纤维化机制的实验研究

目的探讨橄榄苦苷对肝纤维化的改善作用及其机制。方法选取雄性SD大鼠40只,采用随机数字表法分为正常对照组、模型组、橄榄苦苷低剂量组(10 mg/kg)、橄榄苦苷高剂量组(40 mg/kg),每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均腹腔注射50%的CCl4橄榄油溶液(剂量为1 ml/kg),2次/周,共持续8周。从造模第5周起,橄榄苦苷低剂量组和橄榄苦苷高剂量组大鼠灌胃相应浓度的橄榄苦苷,正常对照组和模型组大鼠灌胃等体积的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)溶液,1次/d,持续至第8周。HE染色和Masson染色观察大鼠肝组织病理学变化。Western blot检测肝组织中α-SMA、p38、ELK-3、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平。结果HE染色和Masson染色结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝组织有明显的肝损伤,细胞形态异常,炎症细胞浸润,胶原沉积面积百分比显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,橄榄苦苷低剂量组和橄榄苦苷高剂量组大鼠肝组织肝损伤和炎症浸润程度减轻,胶原沉积面积百分比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),且降低了CCl4诱导的肝纤维化。Western blot结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝组织α-SMA、ELK-3、Vimentin蛋白和p38磷酸化表达水平均显著升高,E-cadherin蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,橄榄苦苷低剂量组和橄榄苦苷高剂量组大鼠肝组织α-SMA、ELK-3、Vimentin蛋白和p38磷酸化表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论橄榄苦苷通过下调p38 MAPK/ELK-3信号通路阻止上皮-间质转化,进而改善肝纤维化的进程。

橄榄苦苷通过调控ELK-3抑制人肝癌细胞上皮-间质转化的机制研究

目的探讨橄榄苦苷与ELK-3以及人肝癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT的关系及其作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度橄榄苦苷(50、100、200、400、800μmol/L)对HepG2细胞活力的影响,筛选合适的作用浓度。Western blot法检测HepG2细胞中ELK-3、p38以及EMT标志物E-cadherin、vimentin蛋白表达水平。Transwell迁移小室检测HepG2细胞侵袭能力。结果MTT法检测结果显示,与空白对照组相比,不同浓度(50、100、200、400、800μmol/L)的橄榄苦苷作用于HepG2细胞后,细胞存活率均下降,且有浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),选取HepG2细胞存活率接近50%的200μmol/L橄榄苦苷进行后续实验。与人正常肝细胞(LO2细胞)相比,HepG2细胞中的ELK-3蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);橄榄苦苷(200μmol/L)处理HepG2细胞后ELK-3、vimentin和p38磷酸化水平均显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭实验显示,细胞侵袭24 h后,空白对照组成功转移的细胞数为(61±4)个,橄榄苦苷组(200μmol/L)成功转移的细胞数为(13±1)个,HepG2细胞侵袭能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论橄榄苦苷通过调控ELK-3/p38抑制人肝癌细胞EMT的发生。

维甲酸相关孤儿核受体-γ蛋白在肝细胞癌组织中的表达及其与上皮-间质转化的关系研究

目的探讨维甲酸相关孤儿核受体-γ(retinoid-related orphan receptor-γ,ROR-γ)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)临床病理特征及人肝癌细胞系HepG2上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系,并探讨其作用机制。方法选取2016年6月至2020年5月赤峰学院附属医院90例肝癌组织及56例癌旁正常组织石蜡标本、20例肝癌组织及癌旁正常组织新鲜术后标本,采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法(Western blotting)检测ROR-γ在肝癌及癌旁正常组织中的表达。将ROR-γ小干扰RNA转染至HepG2细胞,采用Western blotting检测ROR-γ、Smad2以及EMT标志物(E-cadherin、vimentin)蛋白表达水平。结果免疫组织化学染色和Western blotting结果显示,与癌旁正常组织比较,肝癌组织中ROR-γ蛋白阳性表达率显著升高(71.1%比42.9%),差异有统计学意义(P<0.05),且ROR-γ蛋白阳性表达率与肝癌患者肿瘤数目(83.3%比52.8%)、Edmondson分级(90.0%比61.7%)、TNM分期(66.2%比84.0%)和门静脉浸润(63.0%比74.6%)有关,差异均有统计学意义(P<0.05)。人肝癌HepG2细胞中干扰ROR-γ后,与对照组相比,E-cadherin蛋白表达水平显著升高,vimentin、ROR-γ蛋白和Smad2磷酸化水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ROR-γ蛋白表达与肝癌患者的临床病理特征密切相关,且干扰ROR-γ可下调Smad2的表达,进而抑制人肝癌细胞的EMT。

血清特异性免疫球蛋白E水平检测在内蒙古锡林郭勒盟地区儿童湿疹中的应用效果分析

目的探讨血清特异性免疫球蛋白E(IgE)水平检测在内蒙古锡林郭勒盟地区儿童湿疹中的应用。方法以776例湿疹患儿为对象,统计其特异性免疫球蛋白E(sIgE)阳性结果,比较蒙古族、汉族、各项过敏原及吸入性和食入性过敏原sIgE阳性结果,对比不同性别、年龄段患儿sIgE阳性结果。结果776例湿疹患儿sIgE阳性发生率为25.52%,其中吸入性过敏原sIgE阳性占59.60%,食物性过敏原sIgE阳性占40.40%。各项过敏原中sIgE阳性构成比前五项为鸡蛋白、艾蒿、花生、牛奶、树木类[柳树/杨树/榆树]及猫毛。蒙古族sIgE阳性发生率高于汉族(P<0.05)。蒙古族树木类(柳树/杨树/榆树)、猫毛及蟑螂sIgE阳性发生率高于汉族(P<0.05),而牛奶sIgE阳性发生率低于汉族(P<0.05)。蒙古族吸入性和食入性过敏原sIgE阳性发生率高于汉族(P<0.05)。男性sIgE阳性发生率高于女性(P<0.05);男性鸡蛋白、猫毛sIgE阳性发生率高于女性(P<0.05)。<1岁sIgE阳性发生率高于1~5岁、6~12岁(P<0.05),且1~5岁sIgE阳性发生率高于6~12岁(P<0.05)。结论内蒙古锡林郭勒盟地区的湿疹患儿各项过敏原中以鸡蛋白、艾蒿、花生、牛奶、树木类(柳树/杨树/榆树)及猫毛sIgE阳性构成比较高,与汉族比,蒙古族sIgE阳性发生率较高,另男性sIgE阳性发生率较女性高,且随年龄增高,sIgE阳性发生率呈降低趋势。