附丹霞石栽培金钗石斛矿质元素吸收与分配研究

为明确附丹霞石栽培金钗石斛矿质元素吸收与分配特性。本研究以附丹霞石种植3年与4年的金钗石斛为研究对象,测定金钗石斛各部位干物质总量、矿质元素含量,丹霞石养分含量及伴生苔藓矿质元素含量,探究附丹霞石种植金钗石斛对矿质营养的吸收特性。结果表明,丹霞石富含多种矿质元素,主要以SiO_(2)、Al_(2)O_(3)、Fe_(2)O_(3)为主,占丹霞石质量的91.40%,有机质、碱解氮、速效磷、速效钾含量总体处于中低等水平;金钗石斛各部位对N、K、Ca、P具有较强的富集能力;各器官中N、K、Ca、P、Mg、Mn、B等7个元素均以叶片中含量最高,幼嫩部位对N、P、K等植物生长必需营养元素需求较大;金钗石斛各部位干物质总量与矿质元素总量密切相关,根、2年生茎、3年生茎、2年生叶中各元素总量占植株的75.02%~94.62%;苔藓伴生促进了金钗石斛对大部分元素的吸收,各元素含量较无苔藓伴生提高了1.42%~199.41%。本研究初步探讨了N、P、K等营养元素在金钗石斛不同部位中的吸收与分配特性,以期为附丹霞石种植金钗石斛质量评价及栽培管理提供科学依据。

正交试验优选醋炙金钗石斛的炮制工艺

为金钗石斛精加工提供技术参考,在研究不同辅料及其用量对金钗石斛水溶性成分及石斛碱溶出影响的基础上,采用正交试验探讨增加金钗石斛水溶性成分及石斛碱溶出度的最佳炮制工艺。结果表明:金钗石斛的最佳炮制工艺为100kg金钗石斛中加入30kg白醋(乙酸含量为4%),切片厚度2～4mm,干燥温度55℃。此条件下制备的金钗石斛饮片中石斛碱含量为0.583%～0.597%,可溶性糖含量为7.33%～7.41%;与金钗石斛直接干燥品相比,石斛碱溶出率增加21%～24%;可溶性糖溶出率增加7%～9%。乙酸含量为4%的白醋可提高金钗石斛石斛碱的溶出,同时饮片外观品相好,方法简单易行。

氮磷钾配施对金钗石斛幼苗生长的影响

为探明金钗石斛高产栽培的氮磷钾最佳配方,以金钗石斛幼苗为材料,采用田间试验研究不同氮磷钾配比施肥对金钗石斛幼苗生长的影响。结果表明:不同处理对金钗石斛幼苗生长效果不同,其中,以施用尿素10.87kg/667m2+过磷酸钙31.25kg/667m2+硫酸钾10.00kg/667m2效果最好,其药用部位(茎)的生长量为1.74g/株,较CK增加5.45%,微量元素铜、锌、铁和锰含量分别较CK增加46.24%、50.80%、69.35%和25.70%,药用成分茎多糖和石斛碱分别较CK增加42.36%和46.67%。合适的氮磷钾配比能够明显促进金钗石斛幼苗产量和品质的提高。

四种石斛花氨基酸和挥发性成分比较

目的:分析比较金钗、鼓槌、铁皮和紫皮4种石斛花的氨基酸组分和挥发性成分。方法:采用氨基酸自动分析仪测定石斛花的氨基酸含量,并用4种相关的非生物学指标对其营养价值进行全面评价;通过GC-MS技术分析鉴定石斛花的挥发性成分,用峰面积归一化法测定各化合物的相对含量。结果:4种石斛花均包括人体必需的氨基酸7种,除鼓槌石斛花外,其他3种石斛花均符合理想蛋白的条件。金钗、铁皮和紫皮3种石斛花氨基酸总评分和化学总评分更接近于1,但数值相差不大,而氨基酸比值系数分为金钗>紫皮>铁皮>鼓槌,综合表明,金钗石斛花营养价值最高,紫皮、铁皮石斛花次之,而鼓槌石斛花最低。从紫皮、鼓槌、铁皮和金钗石斛花的挥发性成分中分别分析鉴定出37、31、26、21种化合物,其挥发性成分分别占总量的53.44%、61.74%、73.72%、63.17%,所含的挥发性成分主要是醛类、烷烃类、酯类、醇类和含氮化合物,其中金钗石斛花较其他3种差异更明显。结论:金钗石斛花营养价值高于其他3种石斛花,4种石斛花的挥发性成分有较大差异,且部分物质含香气和丰富的药理活性,可为石斛花的开发利用提供科学依据。

金钗石斛不同采收时间质量变化研究

研究金钗石斛不同采收时间质量变化,为其适宜采收期的确定提供依据。按照2015版《中国药典》(一部和四部)测定不同时间采收的金钗石斛中的水分、浸出物、总灰分和石斛碱含量,利用比色法、苯酚硫酸法分别测定黄酮和多糖含量,采用主成分分析法分析不同时间采收的金钗石斛的质量变化并进行综合评价。两个采样点的金钗石斛水分、总灰分、浸出物和石斛碱含量均在相同时间达到最大值,多糖和黄酮含量达到最大值的时间不一致;两个采样点金钗石斛中6个检测指标在12个月均存在显著差异;两个不同采样点金钗石斛水分含量的变异系数最小,分别为5.20%和5.73%,多糖含量的变异系数最大分别为42.35%和34.78%;主成分分析法综合评定得出两个采样点金钗石斛适宜采收期分别为8月至12月和9月至翌年1月,两个采样点最佳采收期为11月。贵州赤水金钗石斛最佳采收期为11月。

不同叶面肥对金钗石斛幼苗生长和药用成分含量的影响

为明确不同叶面肥对金钗石斛幼苗生长和药用成分的影响,在金钗石斛幼苗栽培基质上设置不同小区,喷施不同种类的叶面肥后,测定金钗石斛幼苗形态指标、多糖和石斛碱的含量。结果表明:不同叶面肥对石斛幼苗生长效果不同,喷施沼液肥效果最好,与不施肥相比,茎粗增加33%、根长增加67%、株高增加29%、分蘖数增加75%、叶片数增加79%、茎节数增加54%、产量增加67%,根多糖含量增加93%、茎多糖含量增加110%、叶多糖含量增加68%、茎部石斛碱含量增加156%。无机性叶面肥1、叶面肥2和多元素复合肥的施用效果差于沼液肥。所以喷施沼液肥能够显著促进金钗石斛幼苗的生长和药用成分含量的提高。

金钗石斛居群内石斛碱的含量差异比较

目的测定金钗石斛居群内不同丛和不同年生枝条中石斛碱的含量,并对其进行比较与分析。方法采用气相色谱法,DB-1毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),火焰离子化检测仪(FID)为检测器测定不同丛和不同年生枝条石斛碱的含量。结果金钗石斛居群内不同丛和不同年生枝条中石斛碱含量均有差异,最高含量为0.94%,最低含量为0.13%。生长年限是影响同一丛中不同枝条石斛碱含量的主要因素,1年生>2年生>3年生。在生长年限相同的条件下,地势是石斛碱含量差异的主要因素,高地势金钗石斛中石斛碱含量显著高于低地势。结论金钗石斛居群内样本中的石斛碱含量差异显著,可以为金钗石斛的种植、采收提供参考。

不同基肥对金钗石斛组培苗生长的影响

为有效加快金钗石斛试管苗的人工繁殖,通过在移栽基质中施加不同基肥对金钗石斛试管苗的成活率和生长情况进行研究,结果表明,豆饼肥力持久,组培苗长势均好于其他基质,且有显著性差异,因此豆饼为最佳基肥。

基于矿质元素和氮稳定同位素比值的金钗石斛栽培模式判别研究

该研究探讨矿质元素含量和氮同位素比值对金钗石斛栽培模式判别的可行性,以期为金钗石斛栽培模式的判别提供理论支撑。测定大棚栽培、附树栽培、附石栽培3种栽培方式下金钗石斛及其栽培基质样品中11种矿质元素氮(N)、钾(K)、钙(Ca)、磷(P)、镁(Mg)、钠(Na)、铁(Fe)、铜(Cu)、锌(Zn)、锰(Mn)、硼(B)含量和氮同位素比值。结合方差分析、主成分分析、逐步判别分析对不同栽培类型样品进行分类。结果表明,除Zn元素外,氮同位素比值与其余元素含量在不同栽培类型金钗石斛间均存在显著差异(P<0.05);相关性分析结果表明,金钗石斛中的氮同位素比值、矿质元素含量及药效成分含量与对应栽培基质中的氮同位素比值和矿质元素含量存在不同程度的相关。主成分分析可初步对金钗石斛样品归类,但部分样品存在交叉现象。通过逐步判别分析,筛选出δ15N、K、Cu、P、Na、Ca等6个指标可用于建立金钗石斛栽培方式的判别模型,经回代检验、交叉检验及外部验证的整体正确判别率均为100%。因此,氮同位素比值和矿质元素指纹结合多元统计分析可有效判别金钗石斛的栽培类型,研究结果为金钗石斛的栽培类型及产地识别提供了一种新的方法,也为金钗石斛的品质评价和质量控制提供实验依据。

附丹霞石栽培金钗石斛品质与矿质元素相关性研究

目的探讨附丹霞石栽培金钗石斛不同年生假鳞茎矿质元素含量与药材品质的相关关系,为金钗石斛仿野生附丹霞石栽培管理与品质评价提供参考。方法以附丹霞石种植4年的金钗石斛为供试材料,测定金钗石斛不同年生假鳞茎浸出物、多糖、石斛碱3种药效成分与N、P、K、Ca、Mg、Na、Fe、Cu、Mn、Zn、B共11种矿质元素含量,运用相关性分析和逐步回归分析分析矿质元素含量与药材品质间的相关性。结果金钗石斛不同年生假鳞茎石斛碱、多糖、浸出物含量均为2年生茎显著高于3/4年生茎(P<0.05),3与4年生茎间含量差异不显著;11种元素含量在1~4年生茎中总体呈降低的趋势;相关性分析结果表明,石斛碱、多糖、浸出物含量分别与茎的年限呈极显著负相关(P<0.01),与P、Mg、Na、Fe、Cu、Mn、B 7元素呈极显著正相关(P<0.01);逐步回归分析表明,Ca、Cu、Mn、B 4元素是评价金钗石斛药材品质的特征元素。结论综合分析金钗石斛不同年生假鳞茎药效成分与矿质元素含量,生产上应选取3~4年生假鳞茎进行采收。

气相色谱法测定不同采收月份和年限金钗石斛中石斛碱

目的:测定不同采收月份和年限金钗石斛中石斛碱的含量,探索不同采收月份和年限石斛碱含量变化规律。方法:采用气相色谱法测定不同采收月份和年限金钗石斛中石斛碱的含量。结果:不同采收月份中,9月份石斛碱含量最低,为0.239%,1月份石斛碱含量最高,达0.559%,不同采收年限中,一年生石斛碱含量最高,达0.546%。结论:不同月份、不同年限的金钗石斛中石斛碱均有明显差异,实验为金钗石斛采收期的确定提供评价依据。

菌根真菌对金钗石斛幼苗生长及石斛碱和多糖积累的影响

目的研究菌根真菌对金钗石斛幼苗生长和主要化学成分积累的影响。方法金钗石斛种苗移栽时,在苗根部施加菌根真菌MF23;定期取样,以茎高和干重等为指标考察菌株对幼苗生长的影响;以石斛碱和多糖含量为指标考察菌株对幼苗主要化学成分积累的影响。结果栽培18个月,处理组茎高和根、茎、叶干重均显著高于对照组,分别比对照组提高25.34%、29.28%、34.64%和47.12%。菌株MF23能提高石斛碱和多糖的最高积累量,并延长多糖的积累时间。栽培12个月处理组和对照组石斛碱含量最高,分别为0.59%和0.51%;处理组和对照组分别在栽培15个月和12个月时多糖含量最高,分别为20.05%和17.89%。结论利用菌株MF23菌根化育苗能显著促进金钗石斛幼苗生长,该菌株用于金钗石斛栽培生产有良好的应用前景。

基于ITS2和psbA-trnH序列的金钗石斛DNA条形码鉴定研究

石斛药材品种繁多,外观鉴定较困难,为保证药材临床疗效,药材品种溯源是关键。本研究以60份贵州赤水产金钗石斛（包括鱼肚兰,竹叶兰和圆茎兰三种种质,各20份）为研究对象,提取其基因组DNA并作为PCR扩增模板,扩增核糖体ITS2和叶绿体psb A-trn H基因片段,并进行测序和相关分析。结果显示,金钗石斛三种种质核糖体ITS2共有序列相似度达96.69%,两两比较,相似度均为100.0%,长度分别为圆茎兰491 bp、竹叶兰492 bp、鱼肚兰493 pb;3种种质叶绿体psb A-trn H共有序列相似度达87.32%,两两比较,相似度均达99.0%以上,长度分别为圆茎兰465 bp、竹叶兰534 bp、鱼肚兰469 bp。两条基因在种内遗传变异较小,均不能区分金钗石斛三种种质。在中药材DNA条形码鉴定系统中,ITS2可将金钗石斛与其他物种区分开,但psb A-trn H不能,可将二者组合作为贵州赤水产金钗石斛的DNA条形码。

基于SRAP分子标记的金钗石斛遗传多样性研究

目的研究贵州赤水主要金钗石斛种植基地的金钗石斛栽培种的遗传多样性。方法采集贵州赤水4个不同地区共15份金钗石斛栽培种样品,运用SRAP分子标记法检测其遗传多样性。结果15对引物组合共扩增出383条带,其中多态性条带共351条,多态性百分率为91.64%。平均每对引物扩增出的条带数和多态性条带数分别为25.5条和23.4条。各金钗石斛栽培种样品间的遗传相似系数在0.4729~0.7977,平均为0.6063。从UPGMA聚类分析的结果来看,以阈值0.6063可将这15份栽培种样品分为3类。结论15份金钗石斛样品多态性丰富,SRAP分子标记法能有效地反映出金钗石斛栽培种的遗传多样性;多年种植后同一栽培种的高矮杆遗传差异不明显,高矮杆可能是环境作用的结果;同一地区但不同栽培种遗传差异较大,环境并未完全同质化不同来源栽培种的遗传差异。