中国河北省卢龙县儿童轮状病毒腹泻研究

轮状病毒是我国儿童重症腹泻的主要病原。按照WHO轮状病毒监测方案,于1999年7月至2003年6月,在河北省卢龙县开展了医院和社区为基础<5岁儿童轮状病毒腹泻的监测。结果表明:卢龙县<5岁儿童腹泻的发病率为1 3次/人/年。4年中全县共有2350名<5岁急性腹泻患儿住院,占所有住院儿童的38%(2350/6213)。住院的腹泻患儿每年有两个高峰,一个是夏季(6～8月),占全年腹泻住院病例的22%;另一个在冬季(12月至次年2月),占58%。住院的轮状病毒腹泻只有一个高峰,是在冬季(12月至次年2月),高峰期的轮状病毒腹泻住院患儿数占全年轮状病毒腹泻患儿住院数的86%。按全年统计,轮状病毒腹泻占住院腹泻患儿的46%,轮状病毒腹泻的住院率为11/1000儿童/年。在门诊腹泻患儿中轮状病毒腹泻患儿占28%,在社区腹泻患儿中轮状病毒腹泻占10%。轮状病毒毒株的分布,G3型(45%)最常见,其次为G1型(35%)、G2型(8%)、G4型(3%)、G9型(0 6%),混合感染较少(1%)。还有8%的毒株未能分出型别。在轮状病毒腹泻患者中,9～11月龄的儿童检出率最高(53%),其次是12～17月龄(51%)、18～23月龄(36%)和6～8月龄(30%)。在4年研究期间共有5～10名1～59月龄儿童可能因为轮状病毒腹泻死亡,其中有1例确诊为P[8]G1型毒株感染。初步估计。

健康儿童睁闭眼不同状态下多频段大脑磁活动研究

目的探讨健康儿童睁眼和闭眼不同状态下的多频段大脑磁活动特征。方法记录24名健康儿童睁眼和闭眼时的脑磁图数据。应用累积源成像方法,对大脑磁活动在多个频段进行分析,包括δ(1~4 Hz)、θ(4~8 Hz)、α(8~12 Hz)、β(12~30 Hz)、低γ(30~55 Hz)和高γ(65~90 Hz)频段。结果纳入研究24名,平均年龄(10.3±2.4)岁,男14名、女10名。闭眼状态组儿童的α和β频段脑磁源绝对强度较睁眼状态组显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。与睁眼状态组相比,闭眼状态组儿童α和β频段脑磁源相对强度显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。闭眼状态组的δ、低γ和高γ频段脑磁源相对强度较睁眼状态组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。各频段的脑磁源位置分布在睁、闭眼状态下差异无统计学意义(P>0.05)。结论睁眼和闭眼状态下,大脑活动在较宽的频率范围内发生显著变化。闭眼可以调节多种频率范围内的大脑生理活动。在脑磁图或脑电图的研究中,应考虑睁眼闭眼的基线条件差异。

儿童炎症性肠病的热点问题

龚四堂教授复旦大学附属儿科医院消化科、复旦大学附属儿科医院儿童炎症性肠病（IBD）诊治研究基地主办的＂2016儿童炎症性肠病国际高峰论坛＂于6月12-13日在上海召开。值此非常荣幸地接受《中国循证儿科杂志》编辑部的邀请,与加拿大SickKids儿童医院Aleixo Muise教授、Thomas Walters教授、美国辛辛那提儿童医院Micheal Rosen教授和本次高峰论坛的主席黄瑛教授一起讨论儿童IBD相关热点问题。

儿童急性淋巴细胞和非淋巴细胞白血病诊断治疗

高怡瑾教授很荣幸邀请到Smith教授访问复旦大学附属儿科医院,并借此机会在上海医学会儿科学分会血液学组的学术活动中做儿童急性髓系白血病学术报告,Smith教授是美国辛辛那提儿童医院儿科学系教授,血液肿瘤科临床主任,并在美国儿童肿瘤协作组织（COG）担任儿童急性非淋巴细胞白血病（AML）临床试验组主席。

与神经系统相关的儿童线粒体疾病

王艺教授欢迎Ton教授和迟景上教授参加2010年上海神经精神国际论坛,并受邀参加由《中国循证儿科杂志》编辑部组织的线粒体疾病的现状专家对谈录。随着检测技术的发展,能量代谢性疾病越来越引起内科医生的重视,尤其是线粒体疾病,由于多数累及中枢神经系统,但其表现型多样,临床认识非常有限,请Ton教授结合您在2010年上海神经精神国际论坛上的这方面专题报告中的系列疾病做一介绍。

1999-2005年我国婴幼儿人杯状病毒腹泻研究

人杯状病毒(HuCV)是世界范围内急性腹泻的重要病原。此文收集我国长春、北京、河北卢龙、兰州、昆明等13个地区1999-2005年5岁以下腹泻患儿检测轮状病毒为阴性的粪便标本4426份,用ELISA和RT-PCR方法检测HuCV,结果表明HuCV检测阳性率为19%(8.3%-38.6%)。对其中151株HuCV PCR产物测序进行核苷酸序列比对构建的系统发生树表明,我国流行的HuCV以诺如病毒(NV)为主(146/151,占96.7%),其中绝大多数为GGⅡ/4基因型(99/146),其它依次为GGⅡ/3(22/146)、GGⅡ/5(8/146)、GGⅡ/6(2/146)、GGⅡ/7(2/146)、GGⅡ/8(2/146)和GGⅠ/2(2/146),札如病毒(SV)共5株,均属SGⅡ。此外有9株NV GGⅡ遗传组毒株,尚不能归入现有基因型,可能为我国特有的新基因型,表明我国流行的HuCV毒株存在很高的遗传多样性。我国婴幼儿HuCV腹泻全年都有发生,但秋冬季(10月-次年1月)有一个发病高峰,病例以6-17月龄组最多,至3岁时超过96%的儿童都感染过HuCV。对我国流行的HuCV不同毒株的地区分布,不同年度HuCV检测阳性率的变化趋势进行了讨论。

与线粒体DNA A1555G突变有关的非综合征型耳聋

在氨基糖甙类抗生素引起的耳聋中,有一部分患者表现为对这类抗生素的特殊敏感性,这类患者常常是由于其线粒体DNA的12srRNA基因有A1555G的突变。后来又有研究发现,携带A1555G突变的人,可以在没有使用氨基糖甙类抗生素的情况下出现先天性或者后天性的非综合征型的耳聋,而且这种耳聋的临床表现具有多样性。这种临床表现的多样性可能是由于环境因素、核基因和线粒体的单体型的影响。本文简要介绍了这些因素对与mtDNAA1555G突变有关的耳聋的表现型的影响以及药物性耳聋发生的简要机理。

长春地区轮状病毒流行株VP7基因的遗传变异

A组轮状病毒是引起婴幼儿秋冬季病毒性腹泻的主要病原。目前没有有效的治疗药物,应用安全而有效的疫苗是控制重症腹泻的首要措施。对当地A组轮状病毒流行株的主要中和抗原VP7的编码基因进行遗传变异分析,可以为疫苗的应用和开发提供有益的指导。利用ELISA方法对长春地区1999～2005年的腹泻患儿标本检测A组轮状病毒,RT-PCR方法对阳性标本进行G血清分型,发现长春地区2001年以后流行的轮状病毒以G3型血清为主。选取1999～2005年的G3型轮状病毒标本31份,对其VP7基因进行扩增、克隆、测序,经过计算机分析比对,31株G3型轮状病毒VP7基因核苷酸序列没有显著差异。同一流行季节的毒株具有较相似的遗传变异特征。在2003年轮状病毒流行季节内,有6株G3型分离株的VP7基因在碱基1038位置上出现一个碱基缺失。毒株发生在A、B、C三个高变区的碱基突变,位点相同或者位置临近。2002年以后毒株的基因突变增加,非高变区的碱基变异增加,这可能有助于维持G3型轮状病毒成为流行株。有规律的变异多发生在高变区,但是非高变区的非连续性变异的增加值得引起注意。

细胞外信号调节激酶系统(ERKs)在正常发育和单眼剥夺大鼠视皮层蛋白表达的研究

为了研究正常发育和单眼视觉剥夺大鼠视皮层 ERK1/ ERK2基因蛋白质表达的变化 ,本研究建立了 SD大鼠单眼视觉剥夺模型 ,以多克隆抗 ERK1/ ERK2抗体和单克隆抗双磷酸化 ERK抗体检测出生后第 1、14、2 1、2 8、45 d和成年 (90 d)正常发育和单眼视觉剥夺 (14～ 45 d)视皮层 ERK1/ ERK2蛋白表达和活性改变。结果表明 ,出生后大鼠视皮层 ERK1/ ERK2蛋白表达逐渐增加 ,至 45 d达到高峰 ,此后下降至成年达稳定水平。磷酸化 ERK蛋白表达仅见于成年大鼠视皮层。单眼视觉剥夺导致ERK1/ ERK2蛋白表达减少。提示 ERK的蛋白表达依赖于正常的视觉输入信号的刺激 ,异常的视觉经验造成表达的明显下调 ,阻断正常的发育进程。说明 ERK1和

FUT2基因单核苷酸位点多态性与母乳中性寡糖水平关联性研究

目的检测产后2周母乳中性寡糖水平,并分析母亲FUT2基因SNP位点rs1047781多态性与母乳中性寡糖水平的关系。方法选取健康足月儿及计划产后3个月内至少75%以母乳喂养婴儿的母亲为研究对象。产后2周收集母乳及母亲唾液。采用已验证的高效液相色谱分析法检测母乳9种中性寡糖水平,计算其中3种α1,2连接岩藻糖基寡糖的总水平。采用基因测序法进行SNP位点rs1047781多态性的检测。结果 2008年3～12月在上海国际和平妇婴保健院产科住院的健康母亲110名进入研究。78/110名进行了母乳中性寡糖水平检测。根据母乳中性寡糖水平分类,母亲的Lewis表型中Le(a-,b-)占21.8%(17名),Le(a-,b+)占51.3%(40名),Le(a+,b-)占26.9%(21名)。105名母亲的唾液样本成功提取DNA,进行了SNP位点rs1047781多态性检测。SNP位点rs1047781基因型AA、AT和TT频率分别为26.7%(28名)、48.6%(51名)和24.8%(26名)。60名母亲同时进行了母乳中性寡糖水平和SNP位点rs1047781多态性检测,3种基因型母亲母乳中α1,2连接岩藻糖基寡糖水平差异有统计学意义(P<0.01)。结论母乳中性寡糖Lewis表型与Lewis血型在中国人群分布相似。母亲FUT2的SNP位点rs1047781存在基因多态性,是中国母乳浕1,2连接的岩藻糖基寡糖的关键控制位点。

三维脑白质纤维束成像方法

从Riemannian流形的角度分析扩散张量成像,将脑白质中任意两点间的纤维束生成问题转化为计算Riemannian流形中两点间测地线的问题,通过Level-Set方法计算测地线,并将其作为脑白质中两点间的纤维束。利用模拟脑白质纤维束对该算法和传统算法进行比较,实验结果表明,该算法在准确性、鲁棒性等方面有较大改进。

细胞外信号调节激酶系统 (ERKs)在正常发育大鼠视皮层基因表达的研究

细胞外信号调节蛋白激酶 (ERKs)是皮层神经元生长、发育和分化的关键因子。本研究目的在于研究 ERKs(ERK1、ERK2和 ERK3 ) m RNA在视皮层各层的分布、表达量以及发育过程变化。实验用健康雄性 SD大鼠 ,于生后 (P) 14、2 1、2 8、45和 90 d(成年 )灌注固定 ,取全脑 ,切取视皮层。用 4%多聚甲醛固定 ,石蜡包埋 ,4μm厚切片。地高辛标记特异性寡核苷酸探针 (ERK1、ERK2 )和 c DNA探针 (ERK3 )。用原位杂交方法检测三种 ERKs亚型的 m RNA在各年龄组大鼠视皮层的表达。结果证明 :ERKs m RNA在出生后大鼠正常发育视皮层的表达 ,ERK1和 ERK2 m RNA的分布具有明显的层的特异性 ,表达于除 I层 (分子层 )之外的 II-VI层 ,ERK2较 ERK1m RNA的表达更广泛、信号密度更强。ERK1和 ERK2 m RNA的转录在发育敏感期增高 ,从 P2 1～P2 8逐渐增加 ,P45时达到高峰 ,到成年时降低为相当于 P2 1的水平。 ERK3 m RNA在大鼠出生后视皮层的信号表达强 ,比较恒定 ,无明显的层分布特异性。本研究结果提示 ,出生后正常大鼠发育期视皮层 ERK1和 ERK2的 m RNA表达呈上调趋势 ,而 ERK3 m RNA在大鼠出生后视皮层的表达量中等 ,比较恒定 ,缺乏发育性变化特点。表明 ERK1和

CD8+T细胞在糖尿病发病中作用

目的探讨CD8+T细胞在糖尿病发病中的作用。方法利用非肥胖糖尿病(NOD)背景的转基因小鼠,将CD4+T细胞和CD8+T细胞过继转移到有T细胞缺陷的NOD小鼠(即NOD.scid小鼠),同时转移到特异性地在β细胞上表达共刺激分子CD80的有T细胞缺陷的NOD小鼠(即NOD.scid.Rip.B7小鼠),观察两组受鼠胰岛炎和糖尿病的发病情况,并分析其差异。结果转移CD4+T细胞时,糖尿病发病率在NOD.scid受鼠和NOD.scid.Rip.B7受鼠组的差异无统计学意义(P>0.05),转移CD8+T细胞时,NOD.scid受鼠糖尿病发病率低于NOD.scid.Rip.B7组受鼠,差异有统计学意义(P<0.001)。结论CD8+T亚群启动了胰岛的淋巴细胞浸润,CD8+T细胞是通过与胰岛β细胞直接作用启动糖尿病的发生。

幼年类风湿性关节炎滑膜组织血管形成相关因子表达的分析

目的:以幼年类风湿性关节炎增生滑膜组织为研究对象,探讨血管形成相关因子在其病理过程中的作用。方法:采用RPA(RNaseprotectionassay)方法检测多种血管形成相关因子的表达。结果:多种血管形成因子在类风湿性关节炎滑膜组织中均有较高的表达。结论:滑膜组织血管翳形成与多种血管形成因子相关,其中endoglin(CD105)的表达是一种特征性标志,滑膜成纤维细胞是血管形成因子的主要来源之一。

与线粒体12S rRNA 1095 T>C突变相关的遗传性耳聋病因分析

目的探讨线粒体单倍体型、环境因素及核基因背景在1095T>C突变携带者耳聋表型中的作用。方法对通过基因筛查在赤峰市特教学校发现的3例携带1095T>C突变的耳聋患者进行病史、家系调查、常见耳聋基因检测及线粒体基因组全序列测定。结果3例耳聋患者均表现为重度-极重度感音神经性耳聋,均有聋前氨基糖甙类药物应用史,家族中其他成员听力正常,耳聋外显率低。线粒体全序列分析表明这3例患者的线粒体基因组除都有1095T>C突变之外,其线粒体DNA的多态位点还显示独特的多态性。75例中国听力正常对照中发现1例携带该突变。结论1095T>C在这些遗传背景不同的、应用过氨基糖甙类抗生素的、有听力损失的家庭中出现及其低外显率强烈提示这个突变是导致听力损失的条件致病因素,可以在携带者接触氨基糖甙类药物后发病,1095T>C突变可能与母系遗传氨基糖甙类药物性耳聋有关。

线粒体外膜电压依赖阴离子通道在携带mtDNA A4263G突变的细胞株凋亡中的作用

目的:研究线粒体外膜电压依赖的阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)在携带线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)A4263G突变的细胞株凋亡中的作用。方法:对该家系的4名母系成员(3名血压异常者,1名血压正常者)和3名遗传背景相同的对照者建立了传代淋巴细胞系。采用流式细胞仪检测线粒体膜电势;用激光共聚焦显微镜观测VDAC与Bax蛋白结合的情况。结果:VDAC及凋亡相关蛋白Bax在携带mtDNAA4263G的细胞株中重表达增高,而淋巴细胞sKCa通道的表达没有明显差异;mtDNA A4263G突变携带者的线粒体膜电势与正常者比较平均降低32%(P<0.05);而加入环孢霉素A(CsA为VDAC拮抗剂)后,线粒体膜电势升高,与正常者之间的差异消失。携带突变者线粒体外膜的VDAC可与Bax蛋白结合,而正常对照者二者没有结合,在加入CsA后,可抑制突变者线粒体外膜VDAC与Bax蛋白的结合。结论:线粒体VDAC表达异常可导致mtDNAA4263G携带突变的细胞株凋亡增加。

宫内炎症暴露对早产儿固有免疫应答的影响

目的探讨宫内炎症暴露对早产儿固有免疫应答的影响。方法 2013年6月至2014年6月出生、胎龄<35周的早产儿47例纳入本研究。依据胎盘病理检查结果,将早产儿分为宫内炎症阳性组和阴性组。采用Ficoll密度梯度离心法和贴壁黏附法分别获得脐血单个核细胞以及单核细胞。用内毒素(LPS,100 ng/ml)刺激单个核细胞12 h后,流式细胞术(PCR)检测CD14+单核细胞HLA-DR的表达量以及CD3+CD4+/CD3+CD8+的比例。用LPS(100 ng/ml)刺激单核细胞6 h后,Real-Time PCR检测单核细胞IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-αm RNA表达量的变化。ELISA检测脐血以及单核细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平。结果宫内炎症阳性组脐血血浆IL-6水平高于宫内炎症阴性组,差异有统计学意义(P=0.001)。LPS刺激后,两组单核细胞IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-αm RNA表达量及培养上清液中蛋白水平均显著升高,与刺激前比较差异均有统计学意义(P<0.05);但两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。LPS刺激后,宫内炎症阳性组CD14+单核细胞HLA-DR表达量显著降低,而宫内炎症阴性组则显著升高,与刺激前比较差异均有统计学意义(P<0.05);且阳性组HLA-DR表达量显著低于阴性组(P=0.002)。结论宫内炎症暴露并不影响早产儿脐血单核细胞对LPS的应答反应水平,但可抑制单核细胞激活后主要抗原递呈受体的表达。