基于FPN1探讨桦褐孔菌醇提物抗结肠癌的作用机制

目的基于铁离子转运蛋白中膜铁转运蛋白(FPN)1研究桦褐孔菌(IO)醇提物抗结肠癌的作用机制。方法CCK-8法检测IO醇提物抗肿瘤活性,比色法检测Fe^(2+)浓度;应用数据库、免疫组化和Western印迹分析FPN1和二价金属转运蛋白(DMT)1在结肠癌中的分布情况;实时荧光-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测IO醇提物干预后FPN1和DMT1 mRNA及蛋白表达情况;过表达和沉默ht29结肠癌细胞的FPN1,IO醇提物干预后免疫荧光和Western印迹检测FPN1蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析活性氧(ROS)等因子水平。结果IO醇提物可降低结肠癌细胞活性,改变结肠癌细胞Fe^(2+)浓度;数据库挖掘、免疫组化和Western印迹检测出在结肠癌组织FPN1蛋白明显低表达,DMT1蛋白明显高表达(P<0.05)。IO醇提物作用后,FPN1 mRNA和蛋白表达较阴性对照组明显降低(P<0.05),而DMT1 mRNA及蛋白用药前后差异不显著(P>0.05)。过表达及沉默FPN1,加入IO醇提物后,细胞增殖能力明显下降(P<0.05),细胞内FPN1蛋白表达明显降低,铁调素(Hepcidin)、ROS浓度明显提高(P<0.05)。结论IO醇提物可有效抑制结肠癌细胞增殖,对FPN1有靶向性,可能成为治疗结肠癌的新药。