在中医药院校构建医学免疫学综合设计性实验教学模式的设想

本实验教学模式拟通过让学生观察不同中药对实验动物免疫功能的调节作用,促进学生对中医药与免疫之间关系的了解。通过参与实验,使学生进一步了解和掌握科学研究的基本思路和基本过程,提高学生独立思考和解决问题的能力,提高学生的综合素质。

不同产地人参对免疫抑制小鼠血清TNF-α含量及脾细胞凋亡率的影响

目的:研究辽宁、吉林及朝鲜人参在免疫调节作用方面的药效差异。方法:检测三地人参对免疫抑制小鼠血清中TNF-α含量及脾细胞凋亡率的影响。结果:与正常空白对照组相比,免疫模型组的TNF-α含量明显下降(P<0.05);三地人参治疗组与正常空白对照组比较,TNF-α含量均无明显差异(P>0.05);三地人参治疗组之间相互比较,TNF-α含量均无明显差异(P>0.05)。与正常空白对照组相比,免疫模型组脾细胞凋亡率显著升高(P<0.005);三地人参治疗组与正常空白对照组比较,脾细胞凋亡率均无明显差异(P>0.05);三地人参治疗组与免疫模型组比较,免疫辽参治疗组脾细胞凋亡率明显低于免疫模型组(P<0.05);三地人参治疗组之间相互比较,脾细胞凋亡率均无明显差异(P>0.05)。结论:辽宁,吉林,朝鲜人参对免疫抑制小鼠均可促进TNF-α产生,抑制脾细胞凋亡,改善小鼠的免疫抑制状态,并且三地人参的免疫调节作用无明显差异。

眼针与体针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织TNF-α表达的差异研究

目的分别观察眼针与体针疗法对缺血再灌注损伤24 h后大鼠脑组织中TNF—α表达的影响,探讨眼针与体针不同疗法对免疫效应表达的差异,为眼针疗法的临床应用提供实验依据。方法线栓法制备SD大鼠大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型。将48只SD大鼠随机分为正常对照组、体针组、模型组、假手术组、眼针穴区组与眼针穴区外组(n=8)。模型组、眼针穴区组、眼针穴区外组与体针组均采用改良的线栓法制备SD大鼠大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型。采用ZeaLonga评分法进行大鼠神经功能评分;ELISA方法检测缺血再灌注24 h后大鼠血清TNF—α含量,实时定量PCR方法检测缺血再灌注24 h后大鼠脑皮质TNF—αmRNA的表达,Western Blot法检测缺血再灌注24 h后大鼠脑皮质TNF—α蛋白的表达。结果脑缺血再灌注24 h后,眼针穴区组和体针组大鼠神经功能缺损评分均较模型组大鼠评分降低(P<0.01),但两者相比无统计学差异,眼针穴区外组大鼠评分与模型组相比较无统计学差异;眼针穴区组、体针组和和眼针穴区外组大鼠血清TNF—α含量均较模型组显著减少(P<0.01),但以眼针穴区组与体针组减少更明显,眼针穴区组与体针组比较无统计学差异;眼针穴区组、体针组和眼针穴区外组大鼠脑组织TNF—αmRNA含量和蛋白质含量均较模型组显著下调(P<0.01),眼针穴区组与体针组比较无统计学差异。结论眼针与体针在改善急性脑缺血再灌注损伤中的免疫效应相当,且两种疗法的作用机制可能均与脑组织TNF—α的表达下调有关。

眼针与体针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质脑源性神经营养因子表达的影响

目的分别观察眼针与体针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨眼针疗法与体针疗法的效应差异性,为眼针疗法自成诊疗体系提供相关依据。方法线栓法制备SD大鼠大脑中动脉梗死(MCAO)再灌注模型。将SD大鼠随机分为六组,即正常对照组、假手术组、模型组、眼针穴区组、眼针穴区外组与体针组。采用Zea Longa评分法进行大鼠神经功能评分;实时定量PCR方法检测缺血再灌注3 h后脑皮质BDNF mRNA的表达;Western印迹法检测缺血再灌注3 h后脑皮质BDNF蛋白的表达。结果脑缺血再灌注3 h后,眼针穴区组和体针组大鼠神经功能缺损评分较模型组大鼠降低(P<0.01),眼针穴区组与体针组相比差异无统计学意义(P>0.05);眼针穴区组、体针组和眼针穴区外组较模型组大鼠脑皮质BDNF mRNA和蛋白质含量均升高(P<0.01),但以眼针穴区组和体针组升高较明显,眼针穴区组与体针组比较无统计学差异(P>0.05)。结论眼针与体针在改善急性脑缺血再灌注损伤中的效应相当,且两种疗法的作用机制可能与上调脑皮质BDNF表达有关。

白色念珠菌肠道感染对脾虚小鼠脾指数、γ干扰素、白介素10影响随机平行对照研究

[目的]观测白色念珠菌肠道感染对脾虚小鼠脾指数、γ干扰素、白介素10影响。[方法]使用随机平行对照方法,将60只SPF级昆明小鼠(雌雄各半,体质量20±2g)按随机数字表法分为4组,空白组(A组)、脾虚模型组(B组)、白色念珠菌感染组(单纯感染组,C组)、白色念珠菌脾虚感染组(脾虚感染组,D组),15只/组。使用饮食失节+劳倦过度复合因素方法复制脾虚模型,实验第1d起,B、D组小鼠单日游泳至耐力极限,禁食饲料,喂饲甘蓝;双日喂饲猪油脂0.5mL/只;A、C组小鼠正常饲养;连续14d。实验前7d,将白色念珠菌株在沙保斜面培养基上转种2次,37℃恒温箱培养24h,选择3个直径≥1mm菌落,无菌生理盐水制成菌悬液,血球计数板计数,调整菌液至2×108CFU/mL。灌胃干预:实验第15d,C、D组灌胃白色念珠菌悬液0.2mL/10g体质量,浓度为2×108CFU/mL,A、B组等量生理盐水。实验第35d,各组小鼠随机取10只称体质量,脊髓离断,取脾脏并称质量,冲脾法制备脾细胞悬液,光镜下计数脾细胞,调浓度至107,取100μL加1640培养液500μL混匀;二氧化碳培养箱培养48h,取上清液。观测脾指数、脾细胞IFN-γ、IL-10(双抗体夹心法,严格按照ELISA试剂盒说明操作)。[结果]实验第35d(染菌3周),脾脏外观形态单纯感染组和脾虚感染组体积增大,尤其是脾虚感染组增大明显,颜色变深,呈深暗红色。脾指数单纯感染组和脾虚感染组明显高于空白组(P<0.05,P<0.01),单纯感染组和脾虚感染组明显高于脾虚模型组(P<0.01),脾虚感染组明显高于单纯感染组(P<0.01)。IFN-γ、IL-10脾虚感染组明显高于空白组(P<0.01),单纯感染组和脾虚感染组明显高于脾虚模型组(P<0.05或P<0.01),脾虚感染组明显高于单纯感染组(P<0.01)。[结论]白色念珠菌肠道感染可升高脾虚小鼠脾指数,促进脾细胞IFN-γ和IL-10表达。

基于血清蛋白质组学研究强迫游泳应激抑制大鼠自然杀伤细胞杀伤活性的机制

目的基于血清差异蛋白质组学技术研究强迫游泳应激抑制大鼠自然杀伤细胞（natural killer cells，NK）杀伤活性的机制。方法采用游泳力竭法制备应激大鼠模型，大鼠随机分为正常对照（A）组，强迫游泳（B）组，每组12只。MTT法检测NK细胞杀伤活性，酶联免疫吸附方法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清γ-干扰素（interferon-γ，INF-γ）水平，采用iTRAQ蛋白质组学技术筛选差异表达蛋白，并采用ELISA方法验证蛋白组学检测结果的可靠性。结果与正常对照组大鼠相比，强迫游泳应激组大鼠NK细胞杀伤活性和血清IFN-γ水平降低（t＝3.68和t＝2.76，P〈0.05）。蛋白质组学检测结果表明，与正常对照组大鼠相比，强迫游泳应激大鼠111个蛋白质表达发生明显变化，其中47个蛋白质表达明显增加，54个蛋白质表达明显下降。ELISA验证结果与蛋白质组学检测结果一致。结论蛋白质组学筛选的差异表达蛋白对探讨慢性应激致免疫功能降低的机制有重要意义。