TMAO对脾虚高脂血症大鼠脂代谢的影响及香砂六君子汤的干预作用

目的 本研究拟探讨肠道菌群代谢物TMAO对脾虚高脂血症大鼠肝脂质代谢的影响,并进一步探讨香砂六君子汤干预肝脂质代谢紊乱的可能机制。方法 SD大鼠分为:空白对照组(C组);空白对照组+DMB(C+D组),DMB为TMAO抑制剂;脾虚高脂血症组(PG组);脾虚高脂血症+DMB组(PG+D组);脾虚高脂血症+香砂六君子汤组(PG+XS组)。除C组、C+D组外各组构建以劳倦过度和高脂饲料相结合建立脾虚高脂血症模型(造模12周),模型建立后C+D组、PG+D组每天饮用水中给予1%DMB,PG+XS组每天灌胃香砂六君子汤(每天11.34 g生药/kg),其余给予等量生理盐水,4周后进行取材检测。全自动生化仪检测大鼠血脂含量;HE染色、油红O染色观察大鼠肝变化及脂质沉积情况;ELISA法检测大鼠肝FFA变化;试剂盒法检测各组大鼠TG、TC含量;LC-MS法检测大鼠血浆TMAO含量;qRT-PCR法检测大鼠肝PERK、FOXO1、SREBP-2、ABCA1、miR-33 mRNA相对表达水平;Western Blot检测大鼠肝SREBP-2、ABCA1蛋白表达。结果 (1)PG组大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量较C组升高明显,HDL-C含量较C组下降显著;PG大鼠肝组织中FFA、TG、TC含量较C组增加显著;肝脂质沉积较C组加深,脂肪空泡数量大幅度增加;以上指标中C+D组较C组比较无显著性差异;PG+D组、PG+XS组与PG组相比可显著降低大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量,升高HDL-C含量,降低肝组织中FFA、TG、TC含量,缓解肝组织脂质沉积现象,减少肝空泡;PG+D组与PG+XS组之间比较无显著性差异。(2)与C组比较,PG组大鼠血浆中TMAO含量增加显著,肝PERK和FOXO1、miR-33a mRNA相对含量明显增加,肝SREBP-2、ABCA1 mRNA和蛋白表达均降低显著;以上指标中C+D组较C组比较无显著性差异;PG+D组及PG+XS组与PG组相比可显著降低大鼠血浆中TMAO含量,降低肝PERK和FOXO1、miR-33a mRNA表达,升高肝SREBP-2、ABCA1基因mRNA和蛋白表达;PG+D组与PG+XS组之间无显著性差异。结论 TMAO可能通过PERK/FOXO1轴调控SREBP-2/miR-33a/ABCA1信号通路引起大鼠肝脂代谢紊乱,香砂六君子汤可能通过抑制TMAO含量达到抑制肝脂代谢紊乱。

电针对脾虚湿蕴型溃疡性结肠炎大鼠水液代谢及肠黏膜通透性的调节机制

观察电针“足三里”“脾俞”对脾虚湿蕴型溃疡性结肠炎(SDDR-UC)大鼠水液代谢及肠黏膜通透性的影响,并探讨其作用机制。60只SD大鼠随机分为4组:正常组、模型组、电针组和非经非穴组。正常组正常饲养,其余3组采用病证结合法复制SDDR-UC模型。电针组选取“足三里”“脾俞”穴,非经非穴组选取非经非穴点,干预过程20 min,持续14 d。观察大鼠的一般情况,测量体重、抓力、结肠长度变化、结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分。苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)法观察结肠组织病理形态;免疫印迹(western blot,WB)法检测丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK MAPK)磷酸化情况及水通道蛋白4(aquaporin protein 4,AQP4)表达水平;免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)法检测紧密粘连蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)表达水平;实时荧光定量(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)法检测AQP4 mRNA表达量。结果表明:与正常组相比,模型组、非经非穴组大鼠体重、抓力、结肠长度下降、CMDI评分升高(P<0.01);结肠组织出现炎性细胞浸润、隐窝脓肿等病理形态表现,AQP4、ZO-1、Occludin表达降低(P<0.01),p38MAPK、ERK MAPK磷酸化程度升高(P<0.05);相较模型组,电针组大鼠体重、抓力、结肠长度提升、CMDI评分下降(P<0.01),结肠组织炎性浸润减少、隐窝边缘相对规则,AQP4、ZO-1、Occludin表达水平显著升高(P<0.01),p38MAPK、ERK MAPK蛋白磷酸化程度显著降低(P<0.05)。电针“足三里”“脾俞”可能通过抑制p38MAPK、ERK MAPK磷酸化程度,上调AQP4、ZO-1、Occludin的表达,对SDDR-UC大鼠的水液代谢及肠黏膜通透性发挥改善作用。