生物技术在柞蚕上的应用研究

生物技术在柞蚕上的应用研究收稿日期：１９９５－１２－０５李文利李亚洁（辽宁省农业科学院大连生物技术研究所）随着分子生物学理论和技术的迅速发展，蚕的生物技术研究也取得了令人瞩目的成就。其中，家蚕和天蚕的研究比较详尽，处于领先的地位，这为柞蚕的研究提供...

野生绢丝昆虫栗蚕的生物学特性及驯养技术与资源利用研究

栗蚕(Dictyoploca japonica)是珍贵的野生绢丝昆虫资源。总结概述近10余年对栗蚕生物学性状、驯养技术以及蚕丝与蛹蛋白资源的特性等方面的研究进展,包括:栗蚕的生活史、形态等基础生物学性状,幼虫的食性、眠性以及卵的耐寒性、发育起点温度与有效积温等生理与生态学特性;适宜栗蚕人工放养的最佳饲料树种,栗蚕保种、暖种、收蚁、放养、防病、制种等驯养技术;栗蚕茧丝的荧光反射特性,蛹蛋白和丝蛋白的氨基酸组成特点,蛹体液活性物质的抗菌活力。上述研究为及时有效地抢救、保护和利用野生栗蚕资源提供了关键技术,而且对于将我国的特种绢丝昆虫资源优势转变为蚕丝产业的可持续发展优势,具有十分重要的意义。

辽宁农业创新管理水平提升策略

本文在充分肯定近年来辽宁农业科技创新工作取得的重大成就基础上,分析了目前辽宁农业创新管理中存在的问题,并针对问题提出了建立新型农业创新管理体制、完善农业创新管理机制、建立多元化的农业投资体系、打造高水平的农业科研团队和整合项目资源等具体措施,以期为完善辽宁农业创新管理体系的建设和促进辽宁地方农业经济的可持续发展提供参考或借鉴。

辽宁农业科技创新管理存在问题的成因分析

本文在肯定近年来辽宁农业科技创新工作取得成绩的同时,分析了目前辽宁农业创新管理中存在着诸如人力资源配置不合理、科研经费管理不到位、仪器设备重复购置、使用率较低等问题;并针对上述问题,从管理体制、机制、政策与制度的制定及农业科研单位自身因素等方面做了具体的成因分析,以期为加强地方农业科技创新能力和完善辽宁农业创新管理体系的建设提供参考或依据。

杏树低产改造关键栽培技术研究

老杏树产量低、质量差,面临着更新复壮问题。该试验对老杏树进行重度回缩,并加强营养管理,连续培养3~5年即能形成小型或大型固定结果枝组。衰老杏树的更新改造,树龄在15年生以下的,中心干落头不宜一次性落到底,落至一半为宜;中心干上着生的结果枝组数量可增多,但结果枝组不宜过大。供试园有机质和氮素营养严重或极严重缺乏,重度回缩的树应增施有机肥和氮肥。试验中施用尿素的效果是明显的。‘孤山杏梅’适宜的授粉树可选用597-14和‘张公园’。

草樱组织快繁技术的研究

以樱桃砧木草樱的嫩梢为外植体,进行离体培养,筛选出的启动培养基配方为MS+NAA0.3mg/L+6-BA2.0mg/L;诱导丛生苗的培养基配方MS+6-BA1.5mg/L+NAA1.0mg/L;诱导生根的培养基配方1/2MS+IAA1.5mg/L。

独角莲抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和诱导凋亡的作用研究

为探讨独角莲对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的作用,将不同浓度的独角莲根茎水提物(The aqueous extract from dried powdered rhizomes of Typhonium giganteum Engl.,AEoTGE)处理MCF-7细胞24,48,72h后,应用四甲基偶唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色试验、倒置光学显微镜观察、流式细胞术(Flow cytometry,FCM)及琼脂糖凝胶电泳法检测细胞增殖和凋亡情况。结果表明:AEoTGE能够显著抑制MCF-7细胞增殖,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度依赖性,并可诱导其细胞凋亡。30g·L-1AEoTGE处理24,48,72h后,MCF-7细胞凋亡率分别为8.34%、12.1%和12.6%,其凋亡程度与时间呈正相关,S期(DNA合成期)的细胞在处理72h后分布显著增加。可见,独角莲对MCF-7细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用,其抗肿瘤机制与诱导凋亡有关。

柞蚕丝肽的制备及对小鼠抗疲劳作用的研究

利用磷酸水解的方法将柞蚕丝分别水解4 h和6 h后,得到不同分子质量的1号柞蚕丝肽和2号柞蚕丝肽。将2种柞蚕丝肽分别按照低、中、高3个剂量[1.0、2.5、5.0 g/(kg·d)]给小鼠连续灌胃给药30 d,测试各试验组小鼠负重游泳时间及小鼠血清中尿素氮与肝糖原的含量,评价柞蚕丝肽抗疲劳的功效。与给予等体积蒸馏水的对照组(CK)相比,除2号柞蚕丝肽中剂量[2.5 g/(kg·d)]试验组外,其他试验组小鼠的体质量均显著下降(P<0.05);1号柞蚕丝肽3个剂量试验组小鼠的负重游泳时间均极显著延长(P<0.01),2号柞蚕丝肽3个剂量试验组小鼠的负重游泳时间也呈现延长趋势,但差异不显著(P>0.05);1号柞蚕丝肽和2号柞蚕丝肽都能降低小鼠运动后血清尿素氮水平,其中低剂量组的效果要好于高剂量组,且1号柞蚕丝肽低剂量试验组的效果极显著(P<0.01);1号柞蚕丝肽、2号柞蚕丝肽各剂量试验组小鼠的肝糖原含量均有所提高,但差异不显著(P>0.05)。制备的2种柞蚕丝肽均有增强小鼠抗疲劳能力的趋势,且分子质量较大的1号柞蚕丝肽优于分子质量较小的2号柞蚕丝肽。

柞蚕免疫蛹粉在刺参健康养殖中的应用研究

体外诱导方法制备含有抗菌活性物质的柞蚕蛹粉,并将其以不同比例(0%、1.0%、2.0%)添加到刺参饲料中,并对照商品抗菌肽产品(0.5%添加),制成C、M1、M2和K几种等能、等氮饲料,探讨其在海参养殖中的应用可行性。结果发现,抗菌肽添加组(K)刺参的体增重率(82.06%)显著高于对照组(C)(64.77%)(P<0.05),M1组比对照组提高13.4%,但差异不显著。免疫学指标测定中发现,刺参体腔细胞吞噬活性在各组间无显著差异,但各添加组体腔液超氧化物歧化酶(SOD),M2、K组溶菌酶(LSZ)和M1、M2组酸性磷酸酶(ACP)活性与对照组相比均表现出显著提高(P<0.05),其中SOD活性M1、M2组和K组分别比对照组提高了40.24%、49.91%和61.49%;LSZ活性M2组和K组分别比对照组提高6.41%和5.48%;ACP活性,M1组和M2组分别比对照组提高了29.65%和37.34%。经体腔注射用灿烂弧菌(Vibrio splendidus)侵染各组健康刺参,三处理组刺参均表现出一定的对病原菌的抵抗力,但其中K组刺参的免疫保护率最高。电镜切片显示,柞蚕抗菌肽和免疫蛹粉可以提高小肠绒毛的长度,但2.0%免疫蛹粉则对小肠形态产生一定程度的破坏。综上,饲料添加1.0%柞蚕免疫蛹粉可有效促进刺参生长,并提高抗病力。

柞蚕免疫蛹粉在凡纳滨对虾健康养殖中的应用研究

本文采用体外诱导法制备含有抗菌活性物质的柞蚕蛹粉(IPP),将其以不同比例(0、0.5%、1.0%)添加到凡纳滨对虾(体重约8.3 g/尾)基础饲料中,喂养5周后测定其增重率、肌肉组成成分、成活率和免疫力,喂养试验结束后进行10 d的水浴攻毒(哈维氏弧菌108/m L),研究饲喂IPP对凡纳滨对虾免疫保护率的影响。结果表明:饲喂IPP组对虾体增重率均高于对照组,其中1.0%剂量组比对照组提高35.15%,达到显著水平(P<0.05);0.5%和1.0%组成活率分别比对照组提高7.73%和10.60%(P<0.05);肌肉成分检测表明,1.0%试验组粗脂肪含量显著高于对照组(P<0.05);饲喂IPP组对虾血清超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)和多酚氧化酶(PPO)都显著高于对照组(P<0.05),最多分别比对照组提高11.65%、50.07%、66.55%和7.30%。饲喂IPP组致病菌的免疫保护率也显著高于对照组(P<0.05)。综上,柞蚕免疫蛹粉可显著提高凡纳滨对虾增重率和抗病力,并且其适宜添加量为1.0%。

柞蚕免疫活性物质对海珍品生长发育的研究

将柞蚕免疫活性物质添加于鲍鱼和海胆配合饵料中配制成免疫饵料 ,研究其对海珍品生长发育的影响。结果表明 :喂养 36d后 ,使用免疫饵料的试验组鲍鱼在壳径增长和体重增长方面分别比常规饵料组提高了 35 82 %和 2 9 63% ;喂养 57d后 ,使用免疫饵料的试验组海胆在壳径增长、体重增长及生殖腺指数增长方面比常规饵料组分别提高了 2 6 4 7%、37 93%和 186 36% ,而平均日摄食率和饵料系数则分别比常规饵料组降低了 4 3 5%和 66 0 %。

转基因鱼的研究进展

转基因鱼的外源基因构建需要有启动子、目的基因和终止子等， 常用外源基因的导入方法有显微注射、电穿孔等， 并介绍了外源基因表达模式及常用的标记基因。转基因鱼的研究比较落后， 当务之急是从分子水平上分析鱼类的生理现象及表达基因的结构。

麦饭石载体枯草芽孢杆菌饲料添加剂应用于刺参养殖的研究

本试验以麦饭石载体枯草芽孢杆菌(载菌麦饭石)作为刺参幼苗饲料添加剂,考查其对刺参增重率、抗病力的影响。试验分为4组,分别为对照组、枯草芽孢杆菌组、麦饭石组和载菌麦饭石组。经过60 d养殖,试验结果表明,饲料中添加载菌麦饭石对刺参的促生长效果最好,与对照组相比增重率提高22.80%,并能显著提高刺参对灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)的抗病力(P<0.05)。无充气情况下对比3种添加剂对刺参养殖废水中氨氮和亚硝酸盐去除效果证实,枯草芽孢杆菌对养殖废水中氨氮和亚硝酸盐的去除无效果,麦饭石可短期快速去除水体氨氮和亚硝酸盐,而中长期(7 d),载菌麦饭石去除效果最好。

柞蚕核型多角体病毒对柞蚕蛹卵巢细胞感染性研究

研究柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)与宿主细胞相互作用及形态发生机制,以便更好地开发利用杆状病毒表达系统。体外培养柞蚕蛹卵巢原代细胞,ApNPV病毒悬液感染细胞,测定细胞感染率及半数组织培养感染剂量,应用倒置相差显微镜和电子显微镜观察ApNPV感染后细胞的形态学变化。结果显示,ApNPV感染柞蚕蛹卵巢细胞5 d,倒置相差显微镜下观察即可发现细胞胀大,细胞内有多角体病毒出现;感染7 d,细胞内多角体病毒数量增多,细胞感染率为40.2%,细胞上清液中无包涵体病毒(NOV)效价滴度为6.95×105TCID50/mL。电子显微镜下观察到受病毒感染的细胞早期表现为细胞核膨大,而后核内出现病毒发生基质和核衣壳,核衣壳获得套膜形成病毒束,发育为成熟的病毒粒子,众多病毒粒子同时封存在一个折光性强,具有蛋白质性质、直径在0.7-10μm的多角体中。得出结论,ApNPV对柞蚕蛹卵巢细胞高度敏感,其在柞蚕蛹卵巢细胞内复制为典型的杆状病毒非同步复制。

柞蚕雄蛾类甾体激素的分析研究

采用放射免疫法对柞蚕雄蛾体内类甾体激素的种类和含量进行了测定,结果表明,其体内含有睾丸酮、雌二醇、促卵泡释放激素、垂体泌乳素和孕酮五种人体激素,其中,以雄性激素睾丸酮的含量最高,为14 0 .73pg/ g鲜蛾;不同羽化天数的蚕蛾体内主要雄性激素睾丸酮和雌性激素雌二醇的含量随着羽化天数的增加而增加,并在羽化后3～4d达到最高,分别为14 2 .32pg/ g鲜蛾和2 .86pg/ g鲜蛾。

北冬虫夏草基因组DNA提取方法的研究

采用氯化苄法、裂解法、CTAB法这三种方法,对北冬虫夏草的基因组DNA进行提取,将提取到的DNA经琼脂糖凝胶电泳分析、PCR扩增,结果表明:裂解提取法得到的DNA质量最好,纯度高,符合分子生物学的要求,是一种稳定、快速、简便的北冬虫夏草基因组DNA提取方法。

人工培育柞蚕虫草的研究

选用感染力强、生产性能优良的蛹虫草菌种对柞蚕五龄幼虫接种试验,同时对培养基配方进行了筛选,通过采用不同接种方法,进行柞蚕蚕虫草的人工培育研究,并培育出了优良的蚕虫草。

黄芪多糖对刺参肠道褐藻酸降解菌生物量及产酶活性的影响

本研究以体重为(49.3±5.65)g的刺参为试验对象,经过60d的养殖试验后采用平板计数法考察黄芪多糖(APS)和不同粉碎粒径的黄芪(粗粉、超微粉和化微粉)对刺参肠道褐藻酸降解菌生物量的影响。另外,采用体外发酵试验的方法,探讨了黄芪多糖(APS)对刺参肠道褐藻酸降解菌生长及产酶活性的影响。结果表明,刺参摄食含APS饲料后,肠道中褐藻酸降解菌在总异养菌中的比例最高。体外试验表明,APS对褐藻酸降解菌有增殖作用,其变化趋势是先上升后下降,同时褐藻酸酶活性变化与其相似,其中以0.1%的添加量效果最好。因此,APS可以通过促进刺参肠道褐藻酸降解菌生长,提高褐藻酸酶活力。

芦荟汁对植物生长调控作用的研究

用不同浓度的芦荟汁处理萝卜种子和烟草叶片 ,研究其对种子发芽率和烟草叶片再生频率的影响 ,结果表明 ,用 4 0 %浓度的芦荟汁处理的种子发芽率最高 ,为 5 9% ;与对照组相比 ,发芽率提高了 14 % ;芦荟汁浓度超过 6 0 %时 ,对种子的发芽具有一定的抑制作用 ;而用 2 0 %浓度芦荟汁处理的烟草叶片的再生频率最高 ,达到 33 8% ,而且芽生长的也较快 ,超过 2 0 %随浓度增大 ,叶片的再生频率反而下降 ,10 0 %浓度的叶片再生频率只有 1 7%。