不同种类细胞株对UVB紫外线的耐受性初探

目的:探索几种细胞株对UVB紫外线的耐受性。方法:0、20和50 mJ/cm紫外线照射后,利用MTT、荧光素酶报告基因检测和克隆形成率实验,检测人表皮细胞HaCaT、人黑色素细胞A875、人肺腺癌细胞A549和H322、人肝癌细胞HepG2的存活及2增殖能力。结果:MTT实验结果表明HaCaT、A875、A549、H322和HepG2细胞在受到20和50 mJ/cm紫外线照射后第1天,细胞活力均显著降低(P<0.05),到照射后第3天,细胞活力仍显著低于未照射组(<0.05)。克隆形成率实验结果表明,HaCaT、A875和2HepG2细胞在照射后,细胞增殖能力受到显著抑制。荧光素酶活性检测实验结果表明,A549细胞在受到20和50 mJ/cm紫外线照射后第5和第10天,细胞活力显著低于未照射组(P<0.05)。结论:UVB紫外线对表皮细胞、肺腺癌细胞和肝癌细胞的存活和增殖能力均产生影响,其中正常表皮细胞HaCaT细胞对UVB紫外线的耐受性大于肿瘤来源的A875、A549、H322和HepG2细胞。

大鼠PAX2基因RNA干扰慢病毒载体的构建及沉默效果

目的构建PAX2特异性shRNA干扰慢病毒载体并观察其对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)中PAX2基因的沉默效果。方法采用PAX2基因RNAi靶点序列合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与pGCSIL-GFP载体连接产生shRNA慢病毒载体,经PCR筛选阳性克隆进行DNA测序鉴定。用脂质体转染法将质粒共转染293T细胞,将包装产生的慢病毒颗粒感染NRK52E细胞,RT-PCR、Western印迹检测PAX2 mRNA和蛋白的表达。结果 PCR与DNA测序证实合成的含PAX2 shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。经RNA干扰后的靶细胞PAX2 mRNA及蛋白表达水平明显降低。结论成功构建人PAX2基因RNA干扰慢病毒载体,为以PAX2基因为靶点的梗阻性肾病基因治疗研究奠定了基础。