锦州地区腹泻住院儿童星状病毒检测及同源性分析

目的了解星状病毒在锦州地区儿童群体中的感染情况。方法 2011年10月-2012年3月期间采集锦州市三家医院(锦州市附属一院、锦州市妇婴医院、锦州市中心医院)5岁以下住院腹泻患儿粪便样本,采用RT-PCR法检测粪便中的星状病毒,分析星状病毒在腹泻儿童中的感染率,感染型别,并进行毒株的遗传进化分析。结果 253份粪便样本中,星状病毒感染29例,感染率12.3%,序列测序及遗传进化分析表明,均为星状病毒Ⅰ型1d亚型。结论星状病毒可能是锦州地区秋冬季婴幼儿腹泻的重要致病因素之一,并以HAstV-Ⅰ型1d亚型为主要流行毒株。

人星状病毒非结构蛋白C末端nsP1a/4蛋白6种删除突变体的构建与表达分析

星状病毒(Human astrovirus,HAstV)是通过引起小肠上皮细胞凋亡从而导致婴幼儿腹泻的重要病原体。课题组前期研究表明HAstV非结构蛋白nsP1aC末端蛋白nsP1a/4是诱导凋亡的主要功能性蛋白,可能含有与凋亡相关的重要结构域。为了探索nsP1a/4蛋白中的凋亡结构域,本研究采用绿色荧光蛋白真核表达载体,根据nsP1a/4蛋白功能性结构域的位置,选择不同的删除位点,构建nsP1a/4蛋白及不同结构域删除的nsP1a/4蛋白突变体,并将其转染BHK21细胞,在转染的24～72h检测重组蛋白在细胞内的表达并进行初步分析。结果显示,24h后荧光显微镜下可观察到融合nsP1a/4蛋白和其突变体的绿色荧光。Western blot分析结果显示7种融合蛋白均能在体外细胞中高效表达,72h表达量明显高于48h。这些结果表明我们构建的nsP1a/4蛋白及其删除突变体可在BHK21细胞中表达,可用于HAstV非结构蛋白nsP1a/4的凋亡结构域研究,从而为进一步研究HAstV分子致病机制提供研究平台。