JAK/STAT通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤(I/R)中的作用。方法将36只SD大鼠随机分为对照组I、/R组、Ag490(JAK2激酶抑制剂)组(n=12)。I/R组和Ag490组大鼠夹闭双侧肾动脉60min,恢复再灌注24h,对照组大鼠除不钳夹双侧肾蒂外,余步骤与I/R组、Ag490组相同。Ag490组大鼠术前1h以8mg/kg Ag490灌胃,对照组和I/R组给予等量生理盐水灌胃。HE染色观察肾组织的病理改变,免疫组化方法检测肾组织中STAT 3、Bcl-2蛋白表达,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果组织学检查发现对照组肾小管排列整齐,间质无充血水肿;I/R组可见部分肾小管上皮细胞肿胀,空泡变性,肾小管扩张,可见管型和坏死脱落细胞,间质充血水肿,大量炎细胞浸润;Ag490组组织损伤较I/R组加重。免疫组化结果显示,I/R组STAT 3、Bcl-2蛋白表达较对照组明显增多,细胞凋亡增加(P<0.05);Ag490组STAT 3、Bcl-2的蛋白水平较I/R组明显降低,细胞凋亡加重(P<0.05)。结论 I/R可通过JAK2途径诱导STAT 3激活,上调Bcl-2蛋白表达;阻断JAK2激活可抑制STAT 3表达,下调Bcl-2蛋白表达,加重细胞凋亡。

黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及周期的影响

目的：从细胞水平观察黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响，拟验证黄芪皂甙对系膜细胞增殖影响与其浓度的相关性。方法：实验于2006-12／2007-07在辽宁医学院生理实验室完成。取高糖培养的第4～7代大鼠肾小球系膜细胞，随机分为对照组，黄芪皂甙50，100，200mg／L组4组，分别给予等量的高糖培养液及50，100，200mg／L黄芪皂甙，在给药后培养48h，用MTT比色法检测细胞增殖程度，流式细胞仪检测细胞周期。结果：①MTT法显示培养48h后，黄芪皂甙50，100，200mg／L组的吸光度值A490nm低于对照组（P〈0．01），且随黄芪皂甙浓度增加而递减。②流式细胞仪检测显示培养48h后，黄芪皂甙50，100，200mg／L组的G0／G1值高于对照组（P〈0．01），且随黄芪皂甙浓度增加而递增。结论：在一定质量浓度范围（50～200mg／L）内，黄芪皂甙可抑制肾小球系膜细胞增殖，阻止细胞周期进程。

人骨形态发生蛋白2基因转染的骨髓基质细胞复合生物活性玻璃陶瓷修复颅骨缺损

背景:目前已有将体外培养的骨髓基质细胞与支架复合修复骨缺损的临床报道。但是由于该类复合材料中缺乏骨生长因子作用,在原位的成骨作用并不十分理想。目的:探讨携带人骨形态发生蛋白2基因的骨髓基质细胞复合生物活性玻璃陶瓷材料在修复兔颅骨缺损中的原位成骨作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-02/2008-11在辽宁医学院解剖学实验室完成。材料:生物活性玻璃陶瓷由中国科学院四川成都光电研究所提供,转人骨形态发生蛋白2和转pcDNA3载体的骨髓间充质干细胞由辽宁医学院解剖学教研室骨组织工程研究所保存。方法:制备兔双侧颅骨骨缺损模型,将基因转染的骨髓基质细胞与生物活性玻璃陶瓷复合培养物植入骨缺损区,术后第4,8,12周对植骨区进行大体观察、X射线摄片、组织切片、组织化学检测。主要观察指标:①复苏后的转染人骨形态发生蛋白2的骨髓基质细胞的生长特性。②从大体、X射线结果和组织学等方面观察复合材料在原位修复骨缺损的作用。结果:转染的骨髓基质细胞在细胞形态及增殖特性方面与未转染的细胞无明显差异。扫描电镜显示基因转染的骨髓基质细胞在生物活性玻璃陶瓷表面呈星形紧密排列,长入生物活性玻璃陶瓷孔隙中。复合材料植入免颅骨缺损后,X射线观察术后第4周骨缺损外周骨质与复合材料之间大部分被高密度阴影充填,术后第12周骨缺损外周骨质与复合材料之间完全被高密度阴影充填;光镜观察术后第8周骨小梁大部分相连成片,术后第12周骨小梁粗大,骨髓再生。结论:基因转染的骨髓基质细胞复合生物活性玻璃陶瓷材料基本符合骨组织工程学的要求,在骨缺损区原位具有良好的成骨作用。

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠Caspase-3活化程度的影响

目的研究山茱萸有效成分莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马caspase-3活化程度的影响。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血30min,再灌注72h。以维生素E(VE)为阳性对照药,采用分光光度法检测脑海马组织caspase-3活性变化。结果与假手术组相比,模型组caspase-3活性明显增加(P<0.001);与模型组相比,莫诺苷30mg/kg、90mg/kg、270mg/kg均能够降低caspase-3活性,并呈剂量依赖性(P<0.05);VE(35mg/kg)能显著降低caspase-3活性(P<0.001)。结论莫诺苷能够抑制大鼠脑组织caspase-3活性,通过抗凋亡发挥神经保护作用。

高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞Ang-2、Tie-2、VEGF的变化及氯沙坦对其的影响

目的:研究高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞血管生成素-2(Ang-2)和其受体Tie-2及血管内皮生长因子(VEGF)的变化以及血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦对其的影响。方法:细胞同步化后分为对照组(含糖5.5mmol/L)、甘露醇组(含糖5.5mmol/L+19.5mmol/L甘露醇)、高糖组(含糖30mmol/L)、氯沙坦组(含糖30mmol/L+10-5mol/L氯沙坦),培养48h。real-time PCR法检测Ang-2、Tie-2、VEGF mRNA表达,western blot法检测Ang-2、Tie-2、VEGF蛋白表达。结果:Ang-2、Tie-2、VEGF mRNA和蛋白在对照组及甘露醇组仅有少量表达,而在高糖组明显升高(P<0.05),氯沙坦组Ang-2、Tie-2、VEGF mRNA和蛋白的水平较高糖组出现下调(P<0.05)。结论:Ang-2及VEGF参与糖尿病肾损害的发生,氯沙坦可能通过下调这些血管生长因子的表达发挥肾保护作用。

卡那霉素所致小鼠耳蜗细胞凋亡途径的研究

目的探讨卡那霉素所致小鼠耳毒性的细胞凋亡机制。方法采用小鼠耳毒性模型,结合形态学和听力学研究方法,研究卡那霉素所致小鼠耳毒性的凋亡机制。结果小鼠的听觉功能呈时间依赖性的损害;耳蜗内细胞凋亡是小鼠听觉功能损害的机制之一,caspase-3、Bcl-2、Bax等细胞凋亡信号转导途径都不同程度地参与了这个过程。结论卡那霉素所致小鼠听觉损害的机制之一是耳蜗内细胞经多种途径最终发生凋亡的结果。

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌CAOV3细胞cyclin D1及GADD153表达的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人卵巢癌CAOV3细胞细胞周期调节蛋白cyclinD1及GADD153表达的影响,探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖、抑制凋亡的信号机制。方法:利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组。分别应用MTT、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察25、50、75μg/L bFGF对CAOV3细胞增殖率、细胞周期及细胞凋亡的影响。利用Western blotting检测bFGF对CA-OV3细胞cyclin D1、GADD153以及转录因子(c-Fos、c-Jun)表达的影响。结果:与对照组相比,bFGF呈剂量依赖性加速CAOV3细胞细胞周期进程,促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的凋亡(P<0.01);呈时间依赖性促进cyclinD1、c-Fos、c-Jun,抑制GADD153蛋白表达(P<0.01)。结论:bFGF可能通过上调cyclin D1、c-Fos、c-Jun,下调GADD153表达促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。

损毁或高频刺激丘脑底核对黑质神经元的保护作用

目的:探讨损毁或高频刺激丘脑底核(STN)对帕金森病(PD)大鼠黑质致密部神经元的保护作用及其可能的发生机制。方法:应用6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备偏侧PD大鼠模型,于丘脑底核(STN)区分别植入刺激电极给以高频电刺激,或注入鹅膏蕈氨酸(IA)进行损毁后,观察PD大鼠行为改变;运用尼氏(Nissl)染色、DNA原位末端标记技术(TUNEL)、免疫组化方法检测并分析黑质致密部(SNc)神经元存活及凋亡发生情况。结果:刺激组黑质致密部凋亡神经元的阳性率显著低于模型组与损毁组(P<0.05)。与正常大鼠相比,刺激组Bcl-2染色呈强阳性,Bcl-2/Bax比值较高,模型组、损毁组SNc区的Bcl-2表达有所下调,Bax表达增加,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05),虽然损毁组SNc的凋亡阳性神经元少于模型组(P<0.05),但二者的Bcl-2、Bax的表达及Bcl-2/Bax比值无显著性差异(P>0.05)。结论:损毁或高频刺激STN对PD大鼠黑质SNc神经元存在保护作用,高频刺激的长期保护作用更为明显。

脚桥核与帕金森病关系的研究

帕金森病是一种以中脑黑质多巴胺能神经元变性缺失为主要病理变化的渐进性神经系统退行性疾病。近年研究发现,帕金森病的难治性症状如运动不能、步态障碍和姿势异常与脚桥核有关,脚桥核作为基底节和脊髓的中介核团起着重要的运动调控作用。动物实验和临床研究显示低频电刺激脚桥核可明显改善帕金森运动不能症状。文章针对脚桥核的解剖、生理、神经纤维联系及其和帕金森病的关系简要综述。

Ang-1对高糖环境中猴脉络膜-视网膜内皮细胞单层通透性的影响

目的:利用猴脉络膜-视网膜内皮细胞建立内皮细胞(EC)单层模型,观察高浓度葡萄糖及血管生成素-1(Ang-1)对该模型通透性的影响.方法:待EC于孔径0.8μm的聚碳酸酯微孔滤膜上形成致密单层后分3组进行培养:对照组(DMEM培养基含25 mmol/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含30 mmol/L葡萄糖)、Ang-高糖组(DMEM培养基含30mmol/L葡萄糖+0.25 mg/L Ang-1).于1,3,5,7 d 4个时间点,以含白蛋白1 g/L的D-Hanks液灌注滤膜,检测蛋白质渗透压反射系数(δ)及滤过系数(Kf);并于5 d和7 d利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder.结果:3,5,7 d时,高糖组EC单层的通透性高于对照组(P<0.01);Ang-高糖组与对照组之间EC单层的通透性无差异(P>0.05).高糖组EC的琼脂糖凝胶电泳在5 d及7 d均出现DNA ladder,对照组及Ang-高糖组未见DNA ladder.结论:高糖能够促进细胞凋亡,增加EC单层通透性;Ang-1能抑制EC的凋亡,对抗高糖所致的EC单层通透性增高.

姜黄素对人子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨姜黄素对人子宫内膜癌细胞（HEC1B）增殖和凋亡的影响。方法：应用6．67～66．67μmol／L的姜黄素分别处理HEC-1B48h后，采用MTT法检测姜黄素对HEC-1B的增殖程度的影响；流式细胞仪进行细胞周期时相分析；荧光显微镜观察细胞核形态的变化。结果：①MTT法显示培养48h后，姜黄素组的吸光度值A490nm低于对照组（P〈0．01），且在一定浓度范围内呈剂量依赖性；②流式细胞仪检测显示培养48h后，姜黄素组的G2／M比例高于对照组（P〈0．05），且在一定浓度范围内呈剂量依赖性；③荧光显微镜下给药组部分细胞发生凋亡形态学改变，凋亡率为10．22％～34．72％。结论：姜黄素可抑制HEC1B的增殖，诱导细胞凋亡，其诱导凋亡的机制可能是通过将细胞阻滞在G2／M期来实现的。

γ-氨基丁酸及拮抗剂对大鼠黑质致密部神经元活动的影响

目的:研究γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric Acid,GABA)和GABAA受体阻断剂荷包牡丹碱(Bicuculine,Bic)对大鼠黑质致密部(pars compacta of substantia nigra,SNc)神经元自发放电活动的影响。方法:采用微电泳及细胞外记录方法观察GABA和Bic对SNc神经元自发放电活动的影响。结果:GABA使42个受试神经元自发放电活动几乎完全停止。在30个受试神经元中,Bic使22个神经元放电频率加快,6个神经元无作用,2个神经元受到抑制。在35个受试神经元中,微电泳GABA期间给予GABAA受体阻断剂Bic,其可使91.43%神经元放电频率加快。结论:GABA能投射对SNc神经元有抑制作用,GABAA受体阻断剂Bic能拮抗GABA的抑制作用。

小鼠后肾发育中的细胞凋亡及凋亡小体行踪的超微结构

目的观察小鼠后肾发育过程中所出现的细胞凋亡及凋亡小体的行踪。方法应用光镜和透射电子显微镜技术观察胚龄12,14,16,18 d胎鼠后肾发育过程中细胞凋亡及凋亡小体的超微结构。结果后肾发育中程序性细胞死亡是由经典的细胞凋亡和坏死样程序性死亡所组成,其中以经典的细胞凋亡为主要形式。细胞凋亡后形成凋亡小体,凋亡小体是由少量皱缩的细胞质和固缩的染色质碎块组成,一旦出现即被邻近细胞所吞噬。后肾内间质细胞、输尿管芽细胞以及发育中肾单位内各种细胞都具有很强的吞噬凋亡小体的能力。被吞噬的凋亡小体体积大小不一、数量不等,细胞器首先被消化,染色质碎块随后被消化。结论后肾发育时期凋亡细胞主要由后肾自体细胞吞噬处理,后肾内各种细胞都具有较强的吞噬凋亡小体的能力。

Prestin蛋白的稳定高表达卵巢细胞株的建立

目的：建立体外稳定高表达耳蜗外毛细胞马达蛋白（prestin）的多克隆中国仓鼠卵巢细胞株（CHO）。方法：采用prestin质粒转染CHO细胞进行表达,高浓度博来霉素400800mg/L筛选出多克隆细胞株,传代培养,同时长时间维持低浓度抗生素（200400mg/L）。收集所筛选的多克隆细胞株,提取总RNA,采用针对prestin蛋白不同片段设计的3对引物,进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）,对扩增产物进行凝胶电泳分析。采用免疫荧光染色方法鉴定所筛选多克隆细胞株的prestin蛋白表达。结果：采用3对不同的prestin引物的RT-PCR结果均为阳性,而对照组则为阴性;利用prestin蛋白的特异性抗体,对所筛选的多克隆细胞株进行免疫荧光染色鉴定结果显示阳性率〉90%。结论：成功获得稳定高表达prestin蛋白的多克隆CHO细胞株,转染表达率高。

左卡尼汀对心肌肥厚大鼠TGF-β/Smads信号通路和心肌能量代谢的影响

目的观察左卡尼汀(L-carnitine)对心肌肥厚大鼠TGF-β/Smads信号通路以及心肌能量代谢的影响,并探讨相关机制。方法 SD大鼠40只,随机分为4组:空白对照组、模型组、左卡尼汀低剂量组(50 mg/kg)、左卡尼汀高剂量组(100mg/kg)。模型组和左卡尼汀组采用异丙肾上腺素[5 mg/(kg·d)]连续注射10 d,制成心肌肥厚模型。左卡尼汀组于造模后第2天开始连续给药8周。测定全心质量指数(heart mass index,HMI)和左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI);HE染色,光镜下观察心肌细胞形态;测定大鼠心肌组织中游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)、乳酸(lactate acids,LAC)、ATP含量;Western blot技术检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型组和左卡尼汀低、高剂量组HMI和LVMI均有明显升高(P<0.05);心肌细胞肥大,结构紊乱;心肌组织中FFA、LAC含量均明显升高,ATP含量明显降低(P<0.05);TGF-β1、Smad3蛋白表达水平均有明显升高(P<0.05)。与模型组相比,左卡尼汀低、高剂量组上述指标(除ATP含量)均明显降低,ATP含量明显升高(P<0.05),高剂量组更为显著。结论左卡尼汀对心肌肥厚的能量代谢有改善作用,亦可降低TGF-β1、Smad3蛋白表达水平,从而抑制TGF-β/Smads信号通路,保护心肌。

姜黄素对人子宫内膜癌细胞增殖抑制的初步研究

目的观察姜黄素对体外培养的人子宫内膜癌(HEC-1-B)细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法将体外培养的HEC-1-B细胞随机分为5组:对照组、姜黄素Ⅰ组、姜黄素Ⅱ组、姜黄素Ⅲ组和姜黄素Ⅳ组。分别给予不同浓度的姜黄素(0,10,20,40,80)μmol/L培养48 h。采用MTT法和Western blot法检测HEC-1-B细胞的增殖程度;流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果①MTT法显示培养48 h后,姜黄素组的吸光度值A490 nm低于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。②Western blot法结果显示,与对照组比较,姜黄素作用48 h后,姜黄素各组的PCNA表达减少(P<0.01),且在10～80μmol/L范围内呈剂量依赖性。提示姜黄素可抑制HEC-1-B细胞内PCNA的表达。③流式细胞仪检测显示培养48 h后,姜黄素组的G2/M比例高于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。结论在一定浓度(10～80μmol/L)范围内,姜黄素可抑制体外培养的HEC-1-B细胞增殖,阻止细胞周期进展。这可能是姜黄素抗HEC-1-B细胞作用的机制之一。

小牛血清去蛋白注射液对糖尿病性周围神经病的症状和神经传导功能的影响

周围神经病是糖尿病最常见的并发症之一，临床上表现为对称性多发性周围神经病和非对称性单一性或多发性神经病，目前尚无有效的防治措施及特效治疗药。小牛血清去蛋白注射液（商品名：奥德金），含有小分子肽、磷酸肌醇寡糖、氨基酸等多种生物活性物质，是一种神经营养剂，日前该药临床上主要用于脑血管疾病的治疗。2005年1月～2006年6月，我们使用奥德金治疗2型糖尿病并发周围神经病患者31例，观察了临床症状的改善并测定了治疗前后的神经传导速度的变化，现将结果报道如下。

实验性糖尿病大鼠心肌钙敏感受体表达和心功能的改变

目的观察实验性糖尿病大鼠心肌钙敏感受体(CaSR)蛋白表达及心功能变化,探讨CaSR在DCM发生发展中的作用。方法 SD大鼠随机分为:正常对照组(n=10)和高糖高脂饲喂组,4 w后分为糖尿病4 w组(n=10)、8 w组(n=10)。采用高糖高脂饮食加30 g/kg链尿佐菌素尾静脉注射造成Ⅱ型糖尿病大鼠模型,再继续高糖高脂喂养8 w,建立大鼠糖尿病心肌病模型。取血测定乳酸脱氢酶、超氧化物岐化酶的活性和丙二醛的含量,在透射电镜下观察心脏超微结构和导管法测量左室内压大上升和下降速率评价心功能,Western blot法和免疫组织化学法检测心肌CaSR蛋白表达水平。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠出现了多饮和多食,血糖和血清胰岛素、甘油三酯、胆固醇均明显升高。随糖尿病时间延长出现心肌结构变化和左心室泵功能障碍(±dp/dt max降低)加重;糖尿病4周组心肌组织CaSR蛋白表达轻度增加(P>0.05),8 w组明显降低(P<0.05)。结论在糖尿病诱导的大鼠心肌损伤时,CaSR蛋白表达降低,参与了糖尿病大鼠心脏泵血功能障碍发生。

高频电刺激丘脑底核治疗帕金森病作用机制的研究进展

帕金森病(Parkinson Disease,PD)是一种发生于中老年时期,以震颤、肌强直、运动减少、姿势异常为主要特征的进行性神经系统变性疾病。目前的外科治疗手段主要有立体定向损毁术和丘脑底核高频电刺激术。立体定向损毁术是应用最为广泛的传统手术方式,它虽然可以改善PD运动症状但却是以核团毁损为代价的。随着人们对PD病因和发病机制的研究的深入,丘脑底核的重要性已经被越来越多的学者所重视,它与基底节的许多核团都有广泛的神经纤维联系,被称为基底节活动的动力"源泉"。在PD动物试验和PD患者临床治疗中,丘脑底核高频电刺激均取得了令人满意的疗效,但是其作用机制至今仍然是医学界的一个难题,本文就最近几年的研究进展做简要综述。

冠心病患者血浆脂蛋白水平与冠脉病变相关性研究

目的通过实验室检测血浆脂蛋白水平,初步探讨这些因素与冠状动脉狭窄程度的关系,从而为冠心病的临床诊断和治疗及预后的评估提供一种便捷有效的检验指标。方法所有研究对象均于入院次日清晨取空腹12小时静脉血,通过实验室全自动生化仪分别以氧化酶法测定LP(a)生化指标。结果经T检验显示,CHD组Lp(a)水平明显高于非CHD组(P<0.05),Lp(a)危险因素的Logistic分析可见Lp(a)为冠心病的独立危险因素。结论血浆Lp(a)浓度与冠状动脉粥样硬化疾病存在相关性,水平升高是其独立危险因子,也是心肌梗死的预测因子。