小檗碱对2型糖尿病大鼠局部脑缺血组织中AQP4表达的影响

目的研究2型糖尿病大鼠局部性脑缺血再灌注损伤时,小檗碱(BE)对AQP4表达及脑组织的保护作用。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、2型糖尿病大鼠脑中动脉阻塞再灌注组、假性治疗组,BE治疗组。制备脑组织切片作Nissl染色,观察各组大鼠神经行为学缺陷,采用干湿重法测定缺血侧脑半球的水肿度;蛋白印迹检测BE对缺血周边区脑组织中AQP4表达的影响。结果 BE治疗组神经功能较模型组有明显改善,神经学评分明显降低(P<0.05),皮质Nissl染色淡染区域减小(P<0.05),缺血侧脑半球干湿重比值明显减小(P<0.05),蛋白印迹检测结果显示,BE治疗组较模型组AQP4表达减少(P<0.05)。结论 BE可能通过降低AQP4表达水平降低脑水肿,从而对2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用。

蛋白激酶A抑制剂H-89通过Wee1B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育

目的：探讨蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89通过调控小鼠蛋白激酶WeelB蛋白S15位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育。方法：超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵，经H-89预处理后显微注射WeelB-mRNAs，相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率；放射自显影测定M期促进因子（MPF）活性；免疫印迹检测WeelB蛋白表达、CDC2-pTyr15和WeelB-pSer15磷酸化及WeelB-pSerl5非磷酸化状态。结果：H-89持续存在时，在受精卵G1和S期检测到WeelB-Ser15的磷酸化条带，在G2期和M期检测到WeelB-Serl5的非磷酸化条带；小鼠受精卵有丝分裂进程加快，但过表达WeelB-WT和过表达突变体weelBSl5A／D均能延缓受精卵有丝分裂进程，逆转由H-89引起的促进分裂作用。结论：H-89抑制PKA活性，从而抑制WeelB蛋白S15位点的磷酸化状态，但过表达WeelB-S15A／D有效逆转H-89加速的G2／M期转换，使受精卵的分裂延迟。提示weelB蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点。