颈椎前路减压植骨钛板内固定治疗脊髓型颈椎病78例疗效观察

目的探讨前路减压植骨钛板内固定术治疗脊髓型颈椎病(CSM)的疗效。方法78例CSM患者均行颈椎前路减压植骨融合自锁钛板内固定术治疗。结果所有患者随访6～18个月,神经功能明显改善,JOA评分术前平均(7.1±1.3)分,术后平均(12.9±1.6)分,差别有统计学意义(P<0.05);椎间植骨全部融合,无断钉、断板及内固定松动。结论经颈前路椎管减压植骨融合自锁钛板内固定术是治疗CSM的有效方法,疗效满意。

P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法将培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机分为4组:对照组、P53抑制剂组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L,P53抑制剂浓度为50μmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为25mmol/L)和高糖+P53抑制剂组(P53抑制剂浓度为50μmol/L)。噻唑盐比色法(MTT法)检测心肌细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot对各组细胞P53、BAX和Caspase-3进行半定量分析。结果与对照组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多。与P53抑制剂组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多;高糖+P53抑制剂组心肌细胞活力也有所降低,凋亡率升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多。与高糖组相比,高糖+P53抑制剂组的心肌细胞活力增高,凋亡率明显降低,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达减少。结论高糖可能通过介导P53转位到线粒体激活凋亡通路,引起心肌细胞凋亡。

大鼠肌源性干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞

目的探讨体外自体肌源性干细胞（MDSCs）定向诱导分化为胰岛素分泌细胞团的可行性。方法用差速贴壁的方法对SD大鼠MDSCs进行分离和培养,加入联合诱导剂培养7-12 d。通过形态学观察、双硫腙（DTZ）染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定。结果联合诱导后12 d有典型的胰岛样结构出现;诱导后第12天细胞团表达胰岛素,而未诱导组细胞不表达;诱导后第7天检测到胰岛素（INS）、胰高血糖素（GLU）和生长抑素（SS）基因的表达。结论体外诱导大鼠肌源性干细胞可定向分化为胰岛素分泌细胞存在可行性,本实验将可能为临床糖尿病干细胞治疗提供新的途径。

氧化应激和内质网应激在高糖诱导大鼠心肌细胞凋亡中的关系

目的探讨活性氧(ROS)介导的氧化应激(OS)与内质网应激(ERS)在高糖诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用关系。方法采用混合酶一步消化法分离SD大鼠乳鼠心肌细胞,将培养的心肌细胞分为3组,对照组、高糖组和抗氧化剂组,流式细胞术检测细胞凋亡,分别检测各组心肌细胞中ROS的含量和上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的含量,以反映心肌细胞的OS水平,再利用免疫组化法和RT-PCR检测心肌细胞中内质网应激标志因子Caspase-12的表达情况。结果与对照组相比,高糖组心肌细胞中ROS含量明显增多(P<0.01);SOD含量显著下降(P<0.01);与高糖组相比,抗氧化剂组ROS含量明显降低(P<0.01),抗氧化剂组较高糖组ROS含量明显降低(P<0.01),SOD含量升高(P<0.05);免疫组化法检和RT-PCR测心肌细胞中内质网应激标志因子Caspase-12检测结果显示,高糖组明显大于对照组,抗氧化剂组与高糖组比较表达显著下调(P<0.01)。结论高糖诱导的心肌细胞凋亡中,ROS启动的OS和ERS可能共同参与了心肌细胞凋亡过程。

改良法体外培养大鼠成肌细胞的实验研究

目的：探索一种新型体外分离培养新生大鼠骨骼肌成肌细胞的途径。方法：取新生Wistar大鼠的四肢骨骼肌适量。采用混合酶一步消化分离获取成肌细胞，将差速贴壁法和胰酶消化法相结合进行纯化，观察分离纯化成肌细胞的形态学特点、生长状况，绘制细胞生长曲线，利用扫描电镜观察成肌细胞表面结构并进行结蛋白免疫细胞化学特异性鉴定。结果：采用改良方法分离成肌细胞产量高、耗时短；在培养过程中双重纯化获取的细胞生长状态良好，接种后3～5d增殖达高峰；在扫描电镜下可观察到成肌细胞膜表面有微绒毛突起；体外培养的成肌细胞中94％的细胞胞质呈结蛋白抗体染色强阳性。结论：改良方法分离纯化大鼠骨骼肌成肌细胞效果理想，是成肌细胞体外培养的有效途径之一。

地塞米松预培养兔BMSCs促进腺病毒介导BMP2转基因的高效表达

目前，骨形态发生蛋白2（BMP2）的基因治疗在骨组织工程中正成为广泛研究的热点。国外最新研究表明，以腺病毒为载体转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）表达BMP2的效率取决于细胞的分化状态，1μmol／L地塞米松诱导培养人BMSCs后再进行腺病毒转染，其BMP2的表达量是单纯转染组的20倍。在此基础上，笔者首次利用同时表达绿色荧光蛋白（GFP）和BMP2的AdCMV—hBMP2-IRES—GFP-1转染兔BMSCs，通过流式细胞仪等方法，

Wnt3a在肌源性干细胞分化为神经元样细胞中的作用

肌源性干细胞（MDSCs）是从骨骼肌分离出的多能干细胞，在特定诱导条伺下可分化为多种细胞，本实验旨在观癫MDSCs在被诱导分化为神经元样细胞雕过程中Wnt3a和Wnt5a的表达差异，拐讨两者在这一过程中所发挥的作用。

与肌源性干细胞共培养改善大鼠胰岛活性

目的研究体外共培养模型中肌源性干细胞(MDSCs)改善大鼠胰岛活性的作用。方法提取新生大鼠MDSCs原代细胞,差速贴壁培养后行结蛋白免疫细胞化学鉴定,取第4代MDSCs接种在transwell底板。提取大鼠胰岛后,双硫腙染色鉴定,胰岛在高糖环境中处理24 h后放入tran-swell板上层与MDSCs共培养。在培养的第1、3、6天分别用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色胰岛,RT-PCR检测胰岛的Bcl-2/Bax基因表达来评价胰岛凋亡,其结果与单独胰岛培养组比较。结果与单独胰岛培养相比,共培养组第3、6天AO/EB染色见胰岛细胞明显增多,Bcl-2明显升高,而Bax明显降低(P<0.05、P<0.01)。结论大鼠胰岛与MDSCs共培养延长大鼠胰岛存活时间,改善胰岛活性。