补中益气汤含药血清对人肺腺癌A549/DDP细胞耐药作用的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对人肺腺癌细胞株A549/DDP耐药作用的影响并探讨其机制。方法:采用血清药理学方法制备含药血清;用MTT比色法筛选出最佳含药血清;以最佳含药血清和不同浓度梯度的顺铂干预A549和A549/DDP细胞,MTT比色法计算2种细胞的IC50,同时计算A549/DDP耐药指数和逆转指数;将A549/DDP细胞分为对照血清组、最佳含药血清组、LY294002组、LY294002+最佳含药血清组(联合组)和阴性对照组,给予相应的处置因素后,培养48 h,采用免疫细胞化学方法、Western blotting和real-time PCR等方法检测各组中PI3K、Akt蛋白与mRNA的表达情况。结果:10%中剂量含药血清作用48 h为最佳含药血清及最佳作用时间。最佳含药血清与顺铂联合作用时,A549/DDP细胞对顺铂的敏感性明显增强,最佳含药血清的逆转指数约为2.46。最佳含药血清组和联合组的PI3K、Akt蛋白和mRNA的表达水平均下降,与对照血清组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002组的PI3K、Akt蛋白和mRNA的表达水平与对照血清组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补中益气汤通过减少PI3K的表达而降低A549/DDP细胞的耐药指数,增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,干预或调整A549/DDP细胞对顺铂的耐药作用。

补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞PI3K/AKT信号转导通路影响的实验研究

目的观察补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的抑制作用,并探讨其对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白和mRNA表达的影响。方法以SD大鼠制备高、中、低剂量的补中益气汤含药血清和空白对照血清。MTT法筛选最佳含药血清组。培养细胞分为空白血清组、最佳含药血清组、LY294002组(阻滞剂组)、最佳含药血清+LY294002组(联合组)和阴性对照组。免疫细胞化学方法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测PI3K、p-AKT蛋白和mRNA的表达情况。结果随着含药血清浓度的升高,对顺铂的逆转倍数不断增加;中剂量含药血清作用48 h为最佳含药血清及最佳作用时间;最佳含药血清可使A549/DDP细胞中PI3K、p-AKT蛋白表达减少,与空白血清组比较差异有统计学意义(P<0.05);补中益气汤诱导A549/DDP细胞PI3K、p-AKT mRNA表达显著减少,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.05),与阻滞剂联合作用p-AKT mRNA下降更为明显。结论补中益气汤可通过降低A549/DDP细胞中PI3K、p-AKT mRNA的表达而影响PI3K/AKT信号转导通路,进而发挥对顺铂耐药的增敏作用。