辽宁省水产种质基因库信息平台的构建与应用

针对辽宁省水产原良种场、海洋和淡水种质资源保护区、自然沿海海域及主要河流的重要水产经济物种,开发构建了生物种质信息库、DNA条形码数据库和分子标记信息库,并整合形成辽宁省水产种质基因库信息平台。平台涵盖重要水产经济物种150种,分子标记上万个,在水产物种种质鉴定、水产生物遗传多样性评价和水产种质资源保护区与原、良种场管理等方面具有较高的应用价值。本平台将推进水产种质保护和合理利用工作的深入开展,为水产科学工作者和生产者全面了解水产种质的特性,拓宽优势资源和遗传基因的使用范围提供数据保障。

海洋动物Toll样受体的研究进展

Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是先天性免疫系统中古老的模式识别受体家族,一直都是免疫学家研究的焦点。从最古老的后生动物——海绵到高等的海洋脊椎动物——硬骨鱼中都有TLR存在。阐述处于不同进化地位海洋动物的TLR及其信号通路分子,TLR基因结构域混编和多态性机制,有助于揭示脊椎动物TLR的起源和预防海洋经济动物病害。

辽宁鲆鲽类产业现状、存在问题及发展对策

辽宁是海洋大省，也是海水养殖大省。近年来，以大菱鲆（ Scophthalmus maximus ）、牙鲆（Paralichthys olivaceus）、星鲽（Verasper）为代表的鲆鲽类养殖产业已成为辽宁省海水养殖的重要组成部分［1］。21世纪以来，辽宁省鲆鲽类养殖产业经历了从无到有，由小至大的快速发展过程，取得了可喜的成绩，已成为一些地区的支柱性产业，推动了全省海水养殖生产方式和经济增长方式的转变。据初步统计，截至2012年底，全省鲆鲽类工厂化养殖总面积2．73×106 m2，池塘养殖面积4．67×102 hm2，网箱养殖面积1．07×104 m2，其年产量3．05×104 t ，占全国产量7．32×104 t的41．7％。但是，随着鲆鲽类产业的发展和养殖规模逐步扩大，一系列问题也逐渐暴露，如深井海水资源消耗不断增加，可利用的地下海水逐步枯竭，近海水域水质环境污染日益严重，养殖模式老化、技术装备落后、优良苗种普及率低和优质配合饲料短缺，病害防控水平和质量安全管理等方面，都存在亟待解决的问题。为了促进鲆鲽类养殖增长方式的转变，笔者从苗种生产、良种养殖、养殖模式、疾病防控、饲料、产品质量控制、科研投入等几个方面，分析了辽宁省鲆鲽类产业发展现状和存在的问题，并提出了发展对策。

黄海北部口虾蛄体长及体质量关系研究

对大连近海渔获口虾蛄头胸甲长、体长、全长、体质量及关系进行了研究。头胸甲长1.29-3.51 cm,体长5.87-16.91 cm,体质量2.8-68.0 g,体长、体质量和肥满度年变化总体趋势均为先减小再增加。体质量—体长、体长—头胸甲长的关系分别为m=0.0156L2b.9864和Lb=4.218Lc＋1.0783。口虾蛄肥满度最小值出现在7月,雌性为1.38,雄性为1.40,肥满度性别差异显著。

我国北方地区海蜇池塘养殖技术研究进展

海蜇(Rhopilema esculentum)属刺胞动物门、钵水母纲、根口水母目、根口水母科、海蜇属,在中国沿海、日本西部、朝鲜半岛西部和俄罗斯远东地区均有分布[1-4]。海蜇是近岸营浮游生活的暖水性大型水母,是我国重要的食用水母之一,食之具有降低血压,消痰散气,预防肿瘤、动脉硬化等功效[5-10],具有很高的食用和药用价值。

影响仿刺参生长的主要因子研究进展

仿刺参（Apostichopus japonicus）主要分布于山东半岛和辽东半岛,在中国20多种食用海参中质量最好[1-3],被列为我国海产“八珍”之一,有“海中人参”之美誉[4]。随着人民生活水平的提高和对营养健康食品的关注,仿刺参的消费市场不断扩大。

基于AFLP技术对中国虾夷扇贝群体种质资源的研究

利用AFLP技术对国内较具代表性的5个群体与日本群体虾夷扇贝相比照进行遗传多样性的分析。采用6对引物组合对6个群体178个个体进行扩增,共得到308个位点,6个群体的多态位点比例为62.66%～69.81%,其中日本群体最高,小长山群体最低,且呈显著性差异;香农氏指数为0.337～0.374,其中日本群体最高,小长山群体最低。凌水桥群体与旅顺群体间遗传相似性最高(0.9810),小长山群体与凌水桥群体间遗传相似性最低(0.9641);相对的遗传距离的计算结果与遗传相似性结果一致。数据分析表明养殖方式对虾夷扇贝遗传多样性影响不大。本试验结果为我国虾夷扇贝种质遗传多样性维持、保护和可持续利用提供参考。

鼠尾藻人工苗种保苗及海上养殖技术研究

为了完善鼠尾藻（Sargassum thunbergii）人工苗种培育及海上养殖技术,在大连旅顺海区及刺参池塘进行了鼠尾藻人工苗种保苗及养殖试验。试验结果表明,鼠尾藻人工苗种在室内培养20 d左右,株高2 mm以上,假根15根以上时,下海保苗为宜。鼠尾藻幼苗保苗、人工养殖方式为表层平养。保苗海区选择风浪不大的海湾。在刺参池塘保苗要求选择水深2 m以上的池塘,养殖位置在进水口附近。保苗3个月后海上鼠尾藻平均株高4.26 cm,刺参池塘鼠尾藻平均株高1.98 cm。将6 cm以上的幼苗夹直径1.5 cm的聚乙烯绳上进行海上养殖试验。养殖8~9个月后,鼠尾藻长至平均株高61 cm。

光棘球海胆性腺氨基酸组成的研究

于2006年5、6、8月测定了光棘球海胆Strongylocentrotus nudus雌、雄个体性腺中氨基酸含量及组成。结果表明：光棘球海胆氨基酸含量为30．75％～48．52％（质量分数，下同），其中鲜味氨基酸含量为15．33％～21．84％，必需氨基酸含量占氨基酸总量的42．67％-52．50％，鲜味氨基酸含量占总氨基酸含量的43％以上。光棘球海胆中甘氨酸含量最高（3．76％～5．02％），谷氨酸含量（2．99％～4．79％）次之；雌、雄个体以及排放精、卵时其氨基酸组成变化较大；过熟及迟熟的海胆无论是氨基酸总量，还是必需氨基酸、鲜味氨基酸含量都低于早期成熟海胆；雄性海胆性腺鲜味氨基酸含量高于雌性，因此雄性更美味。研究表明，生产中采集海胆最好在海胆早期成熟阶段，在海胆成熟后期自然排放之前采收完毕。

文蛤C1q基因的克隆与表达及其重组蛋白活性的研究

利用构建的文蛤cDNA文库,克隆得到了文蛤C1q基因全长cDNA序列,该序列全长1213bp,5′UTR为316bp,3′UTR为372bp,开放阅读框长度为525bp,编码174个氨基酸。在文蛤C1q(MmC1q)蛋白中,C1q结构域与软体动物、两栖类动物和脊椎动物中的C1q结构域均具有较高的同源性。通过荧光实时定量PCR,MmC1q mRNA在所检测的各个组织中均有表达,在肝胰脏中表达量最高。在细菌感染试验中,文蛤受鳗弧菌感染后,C1q相对表达水平有明显的上升调节,注射2h,MmC1qmRNA表达量最高,为对照组的2.19倍。包含成熟肽的MmC1q cDNA片段被重组,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,采用牛津杯法对MmC1q重组蛋白进行体外抑菌试验,但并未检测到明显的抑菌活性。

鱼类基因内含子研究进展

内含子是指断裂基因中的非编码区序列,在编码蛋白质前被去除。在高等生物中,内含子的长度远大于外显子,大部分随机突变会发生在内含子中。因此,内含子的存在使高等生物对突变的耐受能力大大增强了。研究表明,内含子可以提高基因表达效率;影响RNA的转录、剪接加工、出核孔以及翻译等过程;启动某些基因的表达;并通过选择性剪接调控基因的表达。内含子功能的研究成果给当前鱼类免疫基因研究开拓了全新的视野。对内含子的分类、剪接、功能以及鱼类内含子研究的新进展进行了综述,并展望了内含子在鱼类免疫基因研究中的应用。

斑海豹线粒体基因组序列分析及比较研究

本研究采用LA-PCR扩增和引物步移相结合的方法对我国辽东湾斑海豹的线粒体基因组全序列进行了测定,并完成了基因组成和系统发生学分析。辽东湾斑海豹线粒体基因组长为16 754bp,其基因构成与其他海洋哺乳动物基本一致,包括37个基因(2个rRNA基因、22个tRNA基因和13个蛋白质编码基因)和1个控制区。在其37个基因中,ND6、tRNAAla、tRNAAsn、tRNACys、tRNATyr、tRNASer(UCN)、tRNAGlu、tRNAPro位于L链上,其余均位于H链上。对我国辽东湾、韩国和美国阿拉斯加斑海豹线粒体基因组进行了比较分析,结果显示,三者线粒体基因组长度略有不同,差异主要体现在以重复片段形式存在的控制区序列中。值得注意的是,在编码区中,3个目标群体的线粒体ND5基因核苷酸差异最为显著,共检测到了18个突变位点,造成4处氨基酸序列变异。斑海豹线粒体基因组蛋白编码基因的变异分析及海豹科系统进化分析结果显示,我国辽东湾和韩国斑海豹的序列同源性显著高于美国阿拉斯加斑海豹,说明辽东湾和韩国斑海豹很可能来自同一个种群。

中间球海胆性腺氨基酸组成研究

试验结果表明,中间球海胆鲜味氨基酸含量占总氨基酸含量的43%以上,尤其是含有较高的甘氨酸、谷氨酸。雄性性腺鲜味氨基酸含量高于雌性,因此,雄性味更美。在生产中采集中间球海胆时期最好选在早期成熟阶段,在海胆成熟后期自然排放之前采收完毕。

辽东湾斑海豹(Phoca largha)线粒体D-loop区异质型研究初探

采用PCR技术和DNA克隆测序技术,随机测定了3头斑海豹mtDNA控制区(D-loop区)CSB-3上、下游1000 bp左右的序列,每头斑海豹任选14个克隆菌斑进行测序,结果所得序列均无重复,得到42个单倍型。结合GenBank已发表的斑海豹mtDNA控制区序列(Phoca largha,AM181031),通过ClustalX1.83、MEGA3.1和FastPCRv3.6等生物信息学软件进行序列比对,发现我国珍稀保护动物斑海豹个体内线粒体DNA(mtDNA)的控制区CSB-3之后存在异质型现象,且存在数目不等的串联重复序列。从分子水平进行了不同类型重复序列变化规律的研究,初探了mtDNA控制区异质型在斑海豹中的存在情况。

海胆主要卵黄蛋白研究进展

海胆的主要卵黄蛋白(major yolk protein,MYP)大量存在于海胆卵中,同时存在于海胆精巢和卵巢中,为配子发生及胚胎发育提供营养。经比对发现,海胆MYP cDNA序列与其他物种卵黄蛋白原并无明显相似性,而与铁传递蛋白具有更高的相似性,有研究认为MYP为铁传递蛋白。据其存在场所和合成时期的差异,MYP可分为为CFMYP(存在于体腔内,受精后合成)和EGMYP(存在于卵中,母源性),二者均由同一基因编码。就CFMYP和EGMYP合成时期、场所和功能作用等加以比较;并对海胆MYP与其他物种卵黄蛋白(原)发生、结构与分子量和功能等方面进行了综述。

仿刺参纤维胶凝蛋白基因的分子特征及表达分析

纤维胶凝蛋白是非特异性免疫系统中的重要分子。通过转录组测序及cDNA末端快速克隆技术得到一条仿刺参纤维胶凝蛋白基因的全长cDNA序列,并将其编码的蛋白命名为仿刺参纤维胶凝蛋白-1。获得的基因cDNA全长为1951bp,其中5′-末端非翻译区为397bp,3′-末端非翻译区为666bp,开放阅读框为888bp,编码295个氨基酸,N端16个氨基酸为信号肽,信号肽后面有两个G-X-Y重复序列,C端为纤维蛋白素原结构域。采用实时荧光定量PCR方法分析了仿刺参纤维胶凝蛋白-1基因在仿刺参幼参不同组织及细菌脂多糖刺激后的时序表达规律,结果显示仿刺参纤维胶凝蛋白-1基因在仿刺参的肠道、呼吸树、体腔细胞和体壁均有表达,且肠道的表达量最高;脂多糖刺激后,4种组织的仿刺参纤维胶凝蛋白-1基因表达量均有变化,且以肠道和体壁表达量的变化最为显著;此外,仿刺参纤维胶凝蛋白-1基因在仿刺参4种组织中的表达量变化具有不同的时序性,表明仿刺参纤维胶凝蛋白-1可能在仿刺参免疫应答中起重要作用。

虾夷扇贝热休克蛋白60基因克隆及表达特性研究

旨在探讨虾夷扇贝高温应激的分子机理并为解决该种夏季死亡问题打下基础。基于HSP60的转录组序列设计特异引物,采用RACE技术成功克隆获得虾夷扇贝热休克蛋白60(My HSP60)c DNA全序列。其c DNA序列全长3 368 bp,包括68 bp的5'UTR,1 569 bp的3'UTR和1 731 bp的开放阅读框,共编码576个氨基酸。利用基因步移技术扩增My HSP60基因启动子区域序列并测序,获得My HSP60基因启动子区域序列1 236 bp,该区域包含2个TATA盒,4个CCAAT盒,3个热激元件。基于氨基酸序列构建的系统进化树与传统物种进化规律基本吻合。通过实时PCR检测发现HSP60在虾夷扇贝各组织中均有表达,升温后肾脏中该基因的转录量升高极显著,而肝胰腺、外套膜、血淋巴和闭壳肌中的转录量升高显著(P<0.05),说明该基因在热应激过程中发挥一定作用。

虾夷扇贝热休克转录因子基因的克隆与转录表达研究

热休克转录因子能够调控真核细胞热休克蛋白的表达,在热休克反应中起重要作用。采用同源克隆和RACE方法得到了虾夷扇贝热休克转录因子1基因的cDNA全长序列。该序列长1944bp,其中5’和3’非编码区分别为54bp、318bp,编码区序列1572bp,包含一个编码523个氨基酸的开放阅读框。经序列比对及生物信息学分析发现,虾夷扇贝热休克转录因子1具有保守的DNA结合区域、HR-A/B和HR-C区域,与已知其他物种的热休克转录因子结构相似。该基因在虾夷扇贝6种组织中的实时荧光定量检测结果显示闭壳肌中mRNA相对表达量最高,血淋巴中表达量最低。