软骨脱细胞基质支架材料的软骨组织工程实验研究

目的应用软骨脱细胞基质作为支架材料,按照组织工程的原理再生软骨,为修复软骨缺损探索新的途径。方法取新西兰大耳白兔1只,体重2.4kg,按改良Courtman法对兔耳软骨行脱细胞处理后用于实验。选用纯种6月龄新西兰大耳白兔18只,雌雄不限,体重2.4～2.6kg。每只耳形成2处1cm×1cm软骨缺损,按修复方式不同随机分为3组,每组24处缺损。A组,软骨脱细胞基质加软骨膜;B组,软骨脱细胞基质;C组软骨膜,作为对照。术后每日观察兔耳修复区的大体变化,并分别于4、12周每组处死3只动物,于修复区切取标本,行HE染色、藏红花红-奥尔新蓝染色、Ⅱ型胶原基因探针原位杂交实验。结果术后4周内A、B组大体形态无明显改变;术后12周可见修复区轻度增厚,触摸时质地较正常软骨稍硬。C组术后2周,2只2处修复区形成痂皮,术后5周痂皮脱落形成穿孔。术后4周,A、B组HE染色可见软骨脱细胞基质周边有轻度的炎性细胞浸润,以淋巴细胞为主,未形成包囊,藏红花红-奥尔新蓝染色均阴性;C组软骨缺损处的软骨膜塌陷,无细胞增殖现象;各组修复区均未见Ⅱ型胶原基因探针原位杂交显色。术后12周,A组HE染色示部分软骨脱细胞基质内有新生细胞,细胞排列不规律,ECM嗜碱性增强,藏红花红-奥尔新蓝染色呈阳性,Ⅱ型胶原基因原位杂交显色示新生细胞内均有大片棕黄色阳性染色区域;B组HE染色示软骨脱细胞基质无吸收现象,周边无包囊,炎性细胞消失,藏红花红-奥尔新蓝染色呈阴性,未见Ⅱ型胶原基因原位杂交显色;C组HE染色示近软骨断端处可见部分形成新生组织,藏红花红-奥尔新蓝染色呈阳性,Ⅱ型胶原基因原位杂交显色可见棕黄色阳性染色细胞。结论脱细胞软骨可诱导软骨膜细胞向其中生长而重建软骨,软骨膜和脱细胞软骨复合移植是软骨组织工程的另一种选择。

CIK细胞不同培养时间的生物学活性

目的探讨CIK细胞培养时间与细胞毒活性的关系。方法抽取恶性肿瘤患者的外周血分离单个核细胞(PBMC),用细胞因子诱导培养CIK细胞,于培养第0、7、14、21、28、35、42天分别收取培养的CIK细胞。用流式细胞仪分析检测CIK细胞中CD3+、CD56+双阳性细胞的百分率及增值率,用MTT法测定其对肺癌细胞株A549杀伤活性。结果培养第21天细胞扩增倍数为(372±1.87)倍,培养第28天细胞扩增倍数为(410±6.52)倍,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);培养第35天CIK细胞扩增倍数为(414±5.16)倍,与培养第28天细胞扩增倍数比较差异无统计学意义(P﹥0.05)。培养至第28天CIK细胞中CD3+、CD56+双阳性细胞的百分率为(35.6±2.30)%,达最高峰,其后逐渐降低。用MTT法检验不同培养时间的CIK细胞对肺癌细胞株A549的杀伤活性,当效靶比为10∶1时,培养21 d的CIK细胞杀瘤率是95%,达最高峰;当效靶比20∶1时培养21 d的CIK细胞杀瘤率已达100%;当效靶比40∶1时培养14 d的CIK细胞杀瘤率即可达到100%。结论培养时间的延长有利于增强CIK细胞的细胞毒活性,CIK细胞的最佳培养时间应为28 d左右。增加效应细胞的数量,会大大提升对肿瘤细胞的杀伤力。

紫杉醇对人树突状细胞的生物活性的影响

目的探讨常用化疗药物紫杉醇(TAX)对人树突状细胞(DC)生物活性的影响及作用机制,为化疗联合生物免疫治疗抗肿瘤提供理论基础。方法体外实验:分别在紫杉醇5 ng/mL(b组)、10 ng/mL(c组)、20 ng/mL(d组)、40 ng/mL(e组)的浓度下及不加紫杉醇的条件下(a组)培养DC细胞,检测各组DC细胞的存活率、细胞成熟标志物及细胞因子分泌量,探究紫杉醇对人树突状细胞生物活性的影响,同时通过乳酸脱氢酶释放法(LDH)测定与紫杉醇处理的树突细胞共培养的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对肺癌A549细胞株的杀伤作用,测定紫杉醇对树突细胞抗原呈递作用的影响。体内实验:采用人肺癌细胞株A549的肿瘤组织块,皮下接种于裸鼠腋下,建立裸鼠肺癌模型。2 d后将30只裸鼠随机分成5组,分别为A组(对照组):细胞株A549+盐水(NS);B组:细胞株A549+DC+CIK;C组:细胞株A549+CIK+TAX;D组:细胞株A549+TAX;E组:细胞株A549+TAX+DC+CIK。每3天检测1次肿瘤大小、裸鼠存活时间。结果体外实验:在共培养6 d的前提下,b、c组第6天存活率与第0天存活率比较,差异无统计学意义(P>0.05),d、e组第6天存活率与第0天存活率比较,差异有高度统计学意义(P<0.01),e组存活率仅为17.5%。c组和e组CD86、CD40、MHCⅡ的表达以及IL-12的分泌与正常组相比有显著增加(P<0.05),d组除了CD86,其他检测指标较正常组差异均有统计学意义,b组中只有MHCⅡ较正常组差异有统计学意义,经10 ng/mL紫杉醇处理的细胞在效靶比5:1和10:1的情况下,杀伤效果明显高于未经紫杉醇处理的细胞。其中紫杉醇处理组的细胞在效靶比为10:1的情况下,杀伤活性已经到达(91.37±5.24)%。体内实验:B、C、D、E组的平均存活时间分别为33.0、34.0、31.8、41.8 d,明显高于对照A组(23.8 d)(P<0.05)。E组平均存活时间大于41.8 d,明显高于B、C、D组(P<0.01),其中E组中,45 d仍有3只存活,D组在前25 d体现出较好的治疗效果,但是25 d后瘤体增长速度增加,与B组差异无统计学意义。结论低中浓度的紫杉醇可促进树突状细胞的成熟并提高其抗原呈递能力。高浓度紫杉醇可杀死树突状细胞,抑制其免疫活性。中浓度紫杉醇能促进树突状细胞分泌白介素12。紫杉醇、DC、CIK联合应用可提高荷瘤裸鼠生存时间。

视黄酸通过降低心转录因子Tbx20的表达抑制早期心的形成

目的：研究过量视黄酸抑制爪蟾早期心形成的机制。方法：用过量视黄酸培养发育到第14期的胚胎。4h后，胚胎日MEMPHA固定进行转录因子Tbx20的胚胎整体原位杂交。取发育第14期胚胎形成心的组织，并分别加入视黄酸和骨彦成蛋白进行培养。4h时后，用MEMPHA固定并进行Tbx20的胚胎整体原位杂交。结果：视黄酸降低Tbx20在早期心且织中的表达；在早期心组织中骨形成蛋白阻止了视黄酸对Tbx20表达的抑制作用。结论：过量视黄酸通过降低Tbx20的表达，抑制了爪蟾心的形成。

猪耳软骨脱细胞基质氨基酸成分的分析

为比较软骨脱细胞基质与新鲜软骨之间组成成分的差别,使用氨基酸分析仪对新鲜猪耳及其脱细胞 基质的成分进行分析。结果脱细胞软骨基质的氨基酸含量高于新鲜软骨,但换算成为氨基酸的个数时,二者相同。 表明脱细胞软骨的主要组成成分为Ⅱ型胶原。

发育晚期胎鼠肝脏抗氧化酶活性的变化

目的:探讨发育晚期胎鼠肝脏中超氧化物岐化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的变化。方法:成年雌性Wistar大鼠交配后并在妊娠母鼠第17、19、20和22天取出10只胎鼠肝脏。采用pyrogallol氧化法,Aebi法和间接法分别检查超氧化物岐化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的变化。结果:发育晚期过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性明显升高,CAT活性从第17天的1.8单位/mg蛋白升高到第22天的12单位/mg蛋白(P<0.05)。同时,GPx活性也从第17天的0.035单位/mg蛋白升高到第22天的0.13单位/mg蛋白(P<0.05)。此时总SOD活性则从52单位/mg蛋白下降到32单位/mg蛋白(P<0.05),CuZnSOD活性从35单位/mg蛋白下降到16单位/mg蛋白,MnSOD活性未见变化。结论:胎儿过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的增加可能有助于胎儿适应出生后体外的高氧环境,但是,没有超氧化物岐化酶活性的增加,过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶是很难完成抗氧化功能。

C-反应蛋白在儿科感染性疾病中的应用与检验学研究

目的研究分析采用贝克曼360型特种蛋白分析仪速率散射比浊法检测C-反应蛋白(CRP),验证C-反应蛋白在儿科感染性疾病鉴别诊断的临床应用。方法采用速率散射比浊法对本院感染性疾病患儿血清样本进行C-反应蛋白定量测量,>8 mg/L为阳性。结果化脓性扁桃体炎阳性率达97.36%,川崎病80.35%,肺炎76.11%,风湿热65.78%,上呼吸道炎62.5%,支气管炎60.78%,急性肠炎54.23%,缺血缺氧性脑病43.4%,支原体肺炎42.86%,急性传染性非典型肺炎(SARS)25%。结论血清CRP在儿科临床中应用广泛,特别有助于急性感染性疾病的诊断,是一种敏感而可靠的疾病急性期的指标,有助于细菌感染或病毒感染的鉴别诊断。

L-精氨酸对全血血小板膜GP2b/3a表达影响与临床检验学研究

目的研究分析L-精氨酸对正常人血小板膜GP2b/3a表达的影响与临床意义。方法建立全血血小板膜GP2b/3a表达的流式细胞术(FCM)测定方法,观察L-精氨酸在静息和活化状态下对正常人血小板膜GP2b/3a表达的影响。结果 L-精氨酸对静息血小板膜GP2b/3a表达无明显影响;而显著抑制凝血酶、胶原活化的血小板膜GP2b/3a的上调表达,且该效应呈剂量和时间依赖性。结论 L-精氨酸可抑制血小板膜GP2b/3a的表达。

树突状细胞疫苗联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗鼻腔及鼻窦恶性黑色素瘤的近期疗效观察

目的探讨负载自体肿瘤抗原的树突状细胞(DC)疫苗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(C IK)治疗鼻腔、鼻窦恶性黑色素瘤的疗效。方法对15例鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤患者在常规手术后2周,通过体外培养扩增DC及C IK细胞,并静脉回输,进行免疫治疗,观察患者临床症状改善及生活质量改善状况及近期疗效,利用流式细胞仪检测回输前后患者T细胞亚群及NK细胞变化。结果15例接受自体DC及C IK细胞治疗患者中,治疗前后患者临床症状有明显改善,提高率达86%,自体回输免疫治疗后,CD3+、CD4+T细胞和NK细胞(CD16+、CD56+)及CD4+/CD8+比例均显著提高(P<0.01)。结论负载自体肿瘤抗原的DC疫苗联合C IK治疗鼻腔、鼻窦恶性黑色素瘤可以提高患者免疫功能,改善临床症状,提高生存质量。