海产品中蜂房哈夫尼菌的鉴定及相关特性研究

从蜢虾酱和鱼露中分离出3株和1株细菌,命名为G1、G4、G5和Y1。经16S rRNA序列分析和相关生理、生化鉴定,4株菌均为蜂房哈夫尼菌。为探究海产品中蜂房哈夫尼菌的腐败相关特性,测定这4株以及另分离自腐败即食海参和大菱鲆的2株蜂房哈夫尼菌生物被膜的形成、泳动性、耐盐性、耐药性、TVB-N值和生物胺产生能力等相关特性。结果表明,6株蜂房哈夫尼菌具有较强的耐盐度,均在0.05 g/mL以上,培养一定时间后形成中等强度以上的生物被膜,并可在泳动性培养基表面扩散,表明其具有泳动性。该菌具有广泛的抗药性,对氨苄青霉素、壮观霉素、磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶等抗菌药物有不同程度的抗性,然而对庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素、氧氟沙星、环丙沙星和呋喃唑酮较为敏感。将6株菌分别接种到其相应来源的海产品后,其TVB-N值随着贮藏时间的延长而明显增加。此外,6株蜂房哈夫尼菌均能产生3种生物胺,分别为腐胺、尸胺和组胺,并且产生腐胺和尸胺的能力明显高于组胺,说明蜂房哈夫尼菌具有腐败特性,在海产品腐败过程中起重要作用。本研究在探索蜂房哈夫尼菌导致的海产品腐败方面具有重要意义。

蜂房哈夫尼菌群体感应对其生物膜及泳动性的调控作用

在腐败即食海参中分离腐败菌蜂房哈夫尼菌H4(Hafnia alvei H4),研究其群体感应对生物被膜的形成以及泳动性的调控作用。采用基因敲除方法构建群体感应基因luxR和luxI缺失型菌株?luxRI,并采用结晶紫染色的方法测定其生物膜形成的变化,进一步采用扫描电镜对其生物膜进行观察,同时运用平板扩散的方法测定其泳动性的变化,实时聚合酶链式反应法检测生物膜相关基因flgA、flgE、fliA、flhD和flhC相对表达量的变化。研究表明:lux RI基因缺失后,不影响H. alvei H4的生长,但不能分泌高丝氨酸内酯类信号分子。除此之外,?lux RI菌株生物膜的形成显著降低(P<0.05),扫描电镜结果显示黏附到介质上的菌落数明显减少,且其在介质表面分泌的胞外多糖形成的网状结构物明显少于野生型菌株。?lux RI菌株泳动能力明显减小(P<0.05),flgA、flgE、fliA、flhD和flhC基因的相对表达量亦出现显著下调(P<0.05)。结果表明H. alvei H4的生物膜的形成和泳动性受到群体感应系统的调控。

二烯丙基二硫醚对单增李斯特菌毒力基因表达的影响

二烯丙基二硫醚(DADS)是一种典型的硫醚类香料。该类香料在抗菌消炎,提高机体免疫力,预防和治疗心血管疾病等保健及药理作用方面具有显著效果。而对其在食源性致病菌中的抑制作用及相关机理研究较少。四大食源性致病菌之一单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)容易感染食物而引发脑膜炎、败血症及孕妇流产等一系列恶性疾病。本研究以如何高效抑制单增李斯特的生长为出发点,以DADS为研究对象,采用微量肉汤稀释法初步筛选出其对单增能李斯特菌的最小抑菌浓度(MIC),利用RT-qPCR技术考察其对单增李斯特菌毒力基因inlA、hlyA、prfA表达的影响。结果表明:亚抑菌浓度下DADS均可显著抑制毒力基因inlA、hlyA、prfA的表达,且抑制作用呈现一定的浓度依赖性,hlyA及prfA对其作用更敏感。

白藜芦醇对蜂房哈夫尼菌生物膜形成的影响

为研究白藜芦醇对水产品优势腐败菌蜂房哈夫尼菌生物膜形成的影响,检测了白藜芦醇对紫色杆菌CV026中紫色杆菌素产量的影响以及对蜂房哈夫尼菌生物膜形成能力的抑制作用。结果表明,与未处理的对照组相比,白藜芦醇能够显著抑制由群体感应控制的紫色杆菌CV026中紫色杆菌素的产量而不抑制其生长,抑制率达74.9%。白藜芦醇以浓度依赖的方式抑制蜂房哈夫尼菌游动能力(74.1%)和生物膜的形成(79.1%),表明白藜芦醇可能作为一种群体感应抑制剂或抗生物膜制剂来控制食品腐败,从而提高食品安全性。

硫醚类香料对沙门氏菌和副溶血性弧菌的抑制作用

研究硫醚类香料对沙门氏菌和副溶血性弧菌两种常见食源性致病菌的抑制作用,探讨该香料抑菌活性与其结构间的关系。采用滤纸片法测定抑菌圈直径,倍比肉汤稀释法确定不同香料的最小抑菌浓度(MIC),并用波长600 nm下菌液的吸光值绘制生长曲线。采用qRT-PCR法研究硫醚类香料对副溶血性弧菌特异性毒力基因tdh基因的调控作用。结果表明,这些硫醚类香料对两种菌的作用效果不同,其中甲基丙基二硫醚、甲基糠基二硫醚、糠基异丙基硫醚、二烯丙基硫醚、二烯丙基二硫醚对两种菌都有抑制效果。二烯丙基二硫醚抑制作用最显著,对沙门氏菌的MIC为19.5 mmol/L,对副溶血性弧菌为4.88 mmol/L。二烯丙基二硫醚对副溶血性弧菌毒力基因tdh的表达存在明显的抑制作用并与浓度呈正相关。硫醚类香料中硫原子个数和烯丙基可促进其抑菌效果,其中二烯丙基二硫醚抑菌效果最好。本研究结果为硫醚类香料在食品中的应用提供参考。

二烯丙基二硫醚对蜂房哈夫尼菌群体感应的抑制作用

以从海参中分离的优势腐败菌蜂房哈夫尼菌为对象,研究了二烯丙基二硫醚(DADS)对受其群体感应调控的生物膜及泳动性的抑制作用。采用CV026报告菌定性检测DADS的抗群体感应活性,利用96微孔板法、扫描电镜(SEM)和琼脂扩散法分析DADS对蜂房哈夫尼菌生物膜及泳动性的抑制作用。结果表明,DADS作用于蜂房哈夫尼菌和CV026的最低抑菌浓度是48 mmol/L。在亚抑菌浓度下,与未处理对照组相比,DADS能够抑制由群体感应调控的CV026中紫色素的分泌而不抑制其生长。在0~12 mmol/L,随着浓度增加,DADS对生物膜的抑制率可达49.6%,对泳动性的抑制率达到73.5%。在12 mmol/L时,DADS能够抑制生物膜的形成。DADS能够抑制蜂房哈夫尼菌的群体感应活性、生物膜及泳动性,从而发挥防腐功效。

三文鱼基质上单核细胞性李斯特菌毒力因子的表达

为了解单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)污染食品基质后毒力因子表达的变化,本研究以Lm标准株ATCC 19115为研究对象,将其接种于三文鱼基质及胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(tryptic soy agar-yeast extract,TSA-YE)(对照组)上,于0、4、7℃贮藏条件下分别培养24 h和48 h后,收集菌体提取总RNA,采用反转录实时定量聚合酶链式反应(reverse transcript-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)对其4个毒力因子hlyA、inlB、prfA、sigB的表达进行分析。结果表明,在0、4℃和7℃分别培养24 h和48 h后,4个主要毒力因子在三文鱼基质上的表达量均高于平板对照,其中hlyA在贮藏4℃的三文鱼基质上表达上调的最为显著。此外,prfA和sigB在4℃贮藏条件下,表达量极显著高于7℃和0℃(P<0.01);在不同的温度贮藏24 h,inlB和hlyA的表达量均表现为7℃>4℃>0℃(P<0.01);且4个主要毒力因子在三文鱼基质上的相对表达量均表现为48 h>24 h(P<0.01)。综上所述,本研究为该菌在食品基质上的风险评估和有效防控提供一定的理论依据。

环境因素对即食海参蜂房哈夫尼菌群体感应的影响

本文探究了即食海参腐败菌蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei H4)生长阶段N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)的分泌规律及环境因素对AHLs分泌的影响。以紫色杆菌CV026为报告菌,采用报告菌平板法检测H4分泌AHLs含量;以根癌农杆菌KYC55为报告菌,采用β-半乳糖苷酶法检测AHLs的活性。研究表明菌株H4分泌的AHLs含量及其活性具有密度依赖性,在细菌对数生长后期(OD600≈1.6)AHLs的分泌量达到最高,此时培养液的pH为5.71。环境因素对AHLs分泌影响的结果显示,在一定浓度范围内,添加Na Cl对H4分泌AHLs有促进作用;弱酸和弱碱都能使AHLs的分泌能力降低,pH为7.0时AHLs分泌量最大;H4分泌AHLs的最适温度为30℃,低温下AHLs分泌能力较弱。经不同碳源或氮源培养时,H4分泌AHLs的能力有明显差异,以果糖为碳源时,AHLs的活性最高,以硫酸铵为氮源时,AHLs的活性最高。综上所述,蜂房哈夫尼菌的群体感应系统具有密度依赖性,并且受环境因素影响,呈现规律性变化。