枯草芽孢杆菌HY4体外益生性能的研究

试验对枯草芽孢杆菌HY4进行菌种筛选和体外益生性能研究。结果表明:枯草芽孢杆菌HY4经菌种筛选后,在相同培养时间内(24 h)芽孢形成率由原来的12%提高到92%,活菌数(30 h)也由3.6亿个/mL提高到28.3亿个/mL。体外益生性能研究表明:枯草芽孢杆菌HY4具有较强的耐热性能,在85℃水浴中作用7.5 min后,存活率为95.45%;与益生性枯草芽孢杆菌X1和X2相比,在pH为2时枯草芽孢杆菌HY4表现最好,存活率显著高于益生性枯草芽孢杆菌X1和X2(P<0.05)。在0.3%禽胆盐中枯草芽孢杆菌HY4的存活率显著高于益生性枯草芽孢杆菌X1和X2(P<0.05),枯草芽孢杆菌HY4表现出良好的胃肠道耐受性能,具有作为发酵菌种和微生态制剂开发的潜力。

猪源芽孢杆菌的筛选、鉴定和产酶能力

大豆抗原蛋白是存在于豆粕中的一种主要抗营养因子,耐热稳定性好,加热无法去除,其过敏反应是引起仔猪腹泻的主要原因。目前微生物发酵法是去除这种抗营养因子的主要方法之一。荷包猪是我国宝贵的地方良种资源,具有抗逆性强,

庄河大骨鸡GHR基因的多态性及其与产肉性能的关联分析

本文旨在探究庄河大骨鸡GHR基因的多态性及其与产肉性能相关的遗传标记。以17周龄庄河大骨鸡的公母鸡为试验材料,利用PCR-RFLP分子标记技术分析了GHR基因的内含子2,结果发现:GHR基因在庄河大骨鸡中存在AA、AB和BB三种基因型,基因型的频率分别为:0.3575、0.3825和0.2600,A和B基因的频率分别为0.5488和0.4513;AA型公母鸡的活体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重和平均日增重分别显著高于AB型和BB型的公母鸡(P<0.05);腿肌重、半净膛率和全净膛率三个基因型间的公母鸡差异不显著(P>0.05);AB型公母鸡和BB型的公母鸡在所测性状方面无差异(P>0.05)。GHR基因的AA型对鸡的产肉性能有显著影响,但是否能作为研究该基因与庄河大骨鸡产肉性能相关的重要遗传标记还需做进一步研究。

庄河大骨鸡ghr、igf-1基因的PCR-RFLP分析及基因聚合与产肉性能的关联分析研究

为了探究庄河大骨鸡ghr、igf-1基因聚合与产肉性能相关联的分子标记。利用PCR-RFLP标记技术和最小二乘法分析了ghr、igf-1的多态性及其2基因的聚合基因型与17周龄庄河大骨鸡产肉性能的关联。结果表明:ghr、igf-1基因均存在3种基因型且处在哈代温伯格平衡状态;聚合基因型GGTT、GHTT和GGKT的活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重、平均日增重显著的高于其他各基因型(P<0.05)。聚合基因型GGTT、GGKT、GHTT对庄河大骨鸡的产肉性能有显著影响,但是否能作为庄河大骨鸡选育的重要理论依据还有待进一步研究。

猪细小病毒的分型、遗传进化及流行病学研究进展

猪细小病毒(PPV)是影响母猪繁殖性能,尤其是初产母猪的重要因素。目前,已经比较明确细小病毒具有复杂的生活史;其分型为PPV-4型、博卡病毒和PPV5-6型。不仅家猪和野猪感染PPV,而且多种动物体内存在PPV的特异性抗体,因此PPV的宿主范围在扩大,感染谱逐渐加宽。本综述将为PPV的预防、诊断和治疗提供借鉴。

庄河大骨鸡GHR基因的多态性及其遗传效应分析

为了探究庄河大骨鸡GHR基因的多态性与屠宰性状相关的遗传标记。以17周龄庄河大骨鸡为试验材料,利用PCR-RFLP标记技术、最小二乘法分析了GHR基因群体遗传结构与屠宰性状的关联。结果表明:GHR基因的多态性信息含量为0.285,属于中度多态,存在3种基因型,其基因型的频率分别为:0.3575、0.3825、0.26,等位基因M和N的频率为0.54875和0.45125;MM型基因型公母鸡的活体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重和平均日增重分别显著的高于MN型和NN型的公母鸡(P<0.05)。GHR基因的MM型对鸡的屠宰性状有显著影响。

萝藦提取物饲料添加剂对肉仔鸡免疫器官发育影响的研究

旨在研究含有萝藦提取物饲料添加剂对肉仔鸡免疫器官的影响。以AA肉仔鸡为研究对象,定量饲喂,试验期为4周。对照组饲喂基础饲粮,试验1组、试验2组、试验3组、试验4组和试验5组分别饲喂在基础饲粮中添加萝藦提取物20、50、75、100和150mg/kg的试验饲粮。结果发现:试验1组和试验2组的胸腺指数、脾指数和法氏囊指数比对照组分别降低1.98%、2.26%和0.64%及2.30%、1.88%和3.08%,差异极显著(P<0.01);试验3组、试验4组和试验5组的胸腺指数、脾指数和法氏囊指数比对照组分别提高3.58%、3.59%和4.03%及1.98%、0.88%和3.74%及2.50%、4.64%和3.18%,差异极显著(P<0.01)。低剂量萝藦提取物饲料添加剂能极显著的抑制免疫器官的发育(P<0.01),高剂量则能极显的促进肉仔鸡免疫器官的发育(P<0.01)。

萝藦提取物对肉仔鸡屠宰性能影响的研究

研究萝蘑提取物对15日龄AA＋肉仔鸡屠宰性能的影响，试验期4周，对照组饲喂基础饲粮，试验1～5组分别饲喂在基础饲粮中添加萝摩提取物20、50、75、100和1SOmg／kg的试验饲粮。结果表明：添加萝蘑提取物20mg／kg-对AA＋肉仔鸡的屠宰前体重、屠体重、全净膛重、去骨腿肌重影响显著，对腹脂重、皮下脂肪重、肌间脂肪宽度影响不显著；萝蘑提取物分别为50、75、100和150mg／kg组AA＋肉仔鸡的上述性状及胸肌重、腿肌重影响极显著。萝蘑提取物在饲料中的适宜添加量为75～150mg／kg。

兰州地区奶牛临床型乳房炎主要病原菌分离鉴定及耐药性分析

为了解春夏季临床型乳房炎主要病原菌感染情况及耐药情况,对兰州地区某规模化奶牛场奶牛临床型乳房炎进行病原菌分离鉴定及耐药性分析。试验通过常规的细菌分离培养方法对110份乳样进行细菌分离纯化,并用16S rDNA手段进行鉴定,对鉴定出的主要病原菌通过K-B纸片药敏试验进行耐药分析。结果表明,主要病原菌包括大肠杆菌(35.5%)、金黄色葡萄球菌(16.1%)、无乳链球菌(14.0%)、停乳链球菌(7.5%)、乳房链球菌(3.2%)。耐药检测结果表明,5种主要病原菌对青霉素G、阿莫西林表现出高度耐药,对链霉素、红霉素表现为中度耐药,对庆大霉素、四环素表现为轻度耐药,而对环丙沙星、头孢噻肟、卡那霉素和氟苯尼考表现为敏感。本试验旨在为该牛场控制和治疗乳房炎提供科学依据。

大骨鸡HSP70蛋白的表达、纯化及质量检测

旨在构建鸡热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达质粒p ColdⅡ-HSP70,诱导表达、纯化后检测HSP70蛋白的质量。将目的基因扩增后克隆至表达载体p Cold II,构建重组载体p ColdⅡ-HSP70,在2种大肠杆菌菌株(BL21(DE3)和Rosetta(DE3)p Lys S中经IPTG在不同温度与不同浓度条件下诱导表达并纯化。经SEC-FPLC和HPLC进行纯度鉴定,采用鲎试剂检测蛋白内毒素含量(将HSP70蛋白按1 200、600、120倍稀释);Western blot及质谱方法检测蛋白分子量。结果显示:酶切和测序结果均证实HSP70表达载体构建正确,可诱导表达。经IPTG诱导表达后确定BL21(DE3)在37℃条件下表达蛋白效果最佳,经检测HSP70蛋白的相对分子质量为71 988.04,蛋白纯度大于90%,内毒素小于500 Eu/mg。结果表明:成功构建了大骨鸡HSP70基因的表达载体,获得了纯化的HSP70蛋白,为进一步研究HSP70在热应激中的作用机制提供了基础。

萝藦提取物对肉仔鸡生长性能的影响

本文旨在研究含有萝藦提取物对肉仔鸡生长性能的影响。以AA肉仔鸡为研究对象,15日龄开始正式试验,试验期为4周,对照组饲喂基础饲粮,试验1—5组分别饲喂在基础饲粮中添加萝藦提取物20、50、75、100、150 mg/kg的试验饲粮。结果发现:试验1—5组鸡的日增重分别比对照组分别提高了6.34%、13.21%、12.45%、14.51%和20.15%;料重比分别降低了9.00%、18.00%、25.00%、26.00%和38.00%。萝藦提取物能极显著促进肉仔鸡的生长发育,饲料中的最佳添加量为150 mg/kg。

稳定表达猪skMLCK基因的小鼠成肌细胞株构建及鉴定

为了获得稳定表达猪skMLCK基因的小鼠成肌细胞C2C12细胞株,将猪skMLCK基因cDNA序列T-A克隆至pMD-18T载体;重组质粒经双酶切后,定向克隆至真核表达载体,获得表达重组质粒pEGFP-N1-skMLCK;经脂质体介导,重组质粒稳定转染入C2C12细胞中;通过实时定量PCR方法检测skMLCK基因的表达水平,以及其他相关基因的表达情况。结果:获得了稳定表达猪skMLCK基因的C2C12细胞株;连续培养30d后,用实时定量PCR方法检测到skMLCK基因高表达,同时发现CFL2b和MEF2C基因表达下调。试验表明稳定表达猪skMLCK基因的小鼠成肌细胞系构建成功,为猪skMLCK基因功能的进一步研究提供了前期工作基础。

庄河大骨鸡GHR、IGF-Ⅰ基因的多态性及基因聚合对产肉性能的影响

本文旨在探究庄河大骨鸡GHR和IGF-Ⅰ基因产肉性能的遗传标记及聚合基因型的效应,为庄河大骨鸡的选育奠定理论基础。利用PCR-RFLP标记技术和最小二乘法分析了GHR、IGF-Ⅰ单基因型和聚合基因型与17周龄产肉性能的关联。结果发现:GHR基因和IGF-Ⅰ基因都存在3种基因型且处在哈代温伯格平衡状态;GHR基因AA型的活体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重和平均日增重分别显著高于AB型和BB型(P<0.05);IGF-Ⅰ基因DD型的活体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、腿肌重和平均日增重分别显著高于CC型和CD型(P<0.05);聚合基因型AADD、AACD和ABDD的活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重、平均日增重显著高于其他各基因型(P<0.05)。GHR基因的AA型,IGF-Ⅰ基因的DD型和聚合基因型AADD、AACD、ABDD对鸡的产肉性能有显著影响,但是能否作为庄河大骨鸡选育的理论依据还需进一步研究。

猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶单克隆抗体制备及鉴定

为制备猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(skMLCK)的特异性单克隆抗体,设计合成多肽并与载体蛋白偶联,经细胞融合、培养基筛选、阳性细胞的检测与单克隆化后,获得3株能稳定分泌抗skMLCK单克隆抗体的杂交瘤细胞株;种植BALB/c小鼠腹腔,收集腹水,纯化后得到skMLCK的单克隆抗体。分别应用高效液相色谱、质谱和Western blot对纯化单克隆抗体进行抗体纯度、效价和敏感性检测。结果显示:获得的猪skMLCK单克隆抗体,能特异性识别skMLCK纯化蛋白、猪肌肉组织的内源性蛋白。本试验成功制备了能特异性结合猪skMLCK的单克隆抗体,这为今后进一步研究探讨skMLCK对猪肌肉发育的影响提供物质基础。

猪CFL2基因启动子区CpG岛的甲基化研究

运用生物信息学方法对猪CFL2基因启动子区CpG岛进行预测,并采用甲基化特异性PCR （MSP）和重亚硫酸盐测序（BSP）分析猪CFL2基因启动子区CpG岛的甲基化状态.生物信息学研究发现,猪CFL2基因启动子区存在CpG岛,并且在启动子区的995 ～2 045 bp区域的GC分布密集.通过BSP法证明了长白猪CFL2基因启动子区CpG岛出现甲基化,MSP法出现部分甲基化,提示只有1条链被甲基化,为猪CFL2基因在肌肉组织中的表达可能受甲基化调节提供了理论基础。

MEF2C基因调节猪骨骼肌肌纤维的发育表达

目的研究肌细胞增强因子2C(MEF2C)基因对骨骼肌肌纤维发育表达的调节情况,并探明二者的相关关系。方法实验采集猪骨骼肌,提取组织总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测基因在猪生后七个不同时间点的表达情况;提取猪骨骼肌总蛋白,利用免疫共沉淀,用特异抗体沉淀MEF2C及其相互作用蛋白复合物,经SDS-PAGE分离,洗脱蛋白复合物并酶解,电喷雾质谱技术分析及数据库比对,并通过Western blotting验证蛋白的相互作用。结果猪MEF2C基因在刚出生及生后90d时的表达量高于其他时间点,其发育表达规律与肌纤维相关基因(My HCslow、My HC2a、My HC2x、My HC2b)的表达趋势类似,成功筛选并鉴定出与转录因子MEF2C相互作用的蛋白为MDHM。结论 MEF2C基因可能参与骨骼肌肌纤维形成与表达,且促进慢肌纤维的表达。

γ-氨基丁酸对大骨鸡生产性能和下丘脑采食调控相关基因调控研究

为了研究γ-氨基丁酸(GABA)对大骨鸡生产性能和下丘脑采食相关基因表达的影响,将120只21日龄大骨鸡分成4组,分别在基础日粮中添加GABA 0、5、50和500 mg/kg,每组3个重复,每重复10只,试验为期2周。分析各组鸡生产性能并检测下丘脑NPY、AgRp、GABAA-α1、MC4R和POMC基因的mRNA表达量。结果:与对照组相比,日粮中添加5 mg/kg GABA(低剂量)对增重无显著影响(P>0.05),50 mg/kg(中剂量)组极显著提高平均日增重(P<0.01),500 mg/kg(高剂量)组极显著降低平均日增重(P<0.01)。与对照相比,高剂量组大骨鸡公鸡下丘脑GABAA-α_1 mRNA和MC4R mRNA表达显著提高(P<0.05),而POMC mRNA和AgRP mRNA极显著降低(P<0.01),NPY mRNA无显著变化(P>0.05);高剂量组母鸡GABAA-α_1 mRNA极显著降低(P<0.01),NPY mRNA显著降低(P<0.05),而MC4R mRNA显著提高(P<0.05)。试验提示,日粮中添加GABA,对大骨鸡下丘脑采食调控基因表达均有影响,且存在性别差异。

CFL2基因低表达对骨骼肌肌纤维相关基因的表达影响

为了研究CFL2基因与骨骼肌纤维相关基因之间的关系,本试验运用已筛选的CFL2低表达细胞株,利用实时定量和Western blot技术检测CFL2基因低表达对肌纤维组成成分MLC、α-actin与肌纤维类型MyHCslow、MyHC2b、MyHC2a、MyHC2x表达的影响。结果表明,低表达CFL2后,肌纤维组成成分MLC和α-actin的表达均显著上调(P<0.05)。MyHC2x、MyHC2b、MyHC2a、MyHCslow的表达均显著下调(P<0.05)。说明CFL2可能起到通过调节MyHC类型转换来达到调节红白肌肉比例的效果,进而直接影响猪肉品质。

鼠肌纤维丝切蛋白CFL2互作蛋白的筛选与鉴定

筛选并鉴定小鼠腿肌组织中与丝切蛋白CFL2相互作用的蛋白质。通过免疫共沉淀技术分离小鼠腿肌组织中CFL2蛋白复合物,对获得的免疫共沉淀复合物进行SDS-PAGE分离,将分离出的差异条带用胰蛋白酶进行酶切,酶切后的肽段进行液相色谱分离,最后通过电喷雾质谱技术分析肽段组成并鉴定蛋白质,获得与CFL2互作的组织蛋白谱。通过Western blot检测,确定在天然状态下小鼠腿肌组织中CFL2与Ndufb7之间存在相互作用。首次利用免疫共沉淀联合质谱技术成功从小鼠腿肌组织中筛选并鉴定出与CFL2相互作用的蛋白Ndufb7,为进一步研究CFL2在骨骼肌肌纤维形成中的作用提供理论基础。

丝切蛋白CFL2基因低表达对小鼠成肌细胞C2C12肌纤维信号通路关键成分的影响

探讨低表达丝切蛋白CFL2基因对小鼠成肌细胞C2C12信号通路关键成分的影响。采用RNAi技术,将猪CFL2基因真核表达shRNA重组体稳定转染至小鼠成肌细胞C2C12后提取其总RNA和总蛋白质,采用Real-time PCR和Western blot检测CFL2基因低表达后成肌细胞C2C12信号通路关键成分(MEF2C、sk MLCK、Rho A、AMPKα2、p38和Ca M)的表达情况。结果表明:在3个稳转细胞株中MEF2C、Ca M、p38和AMPKα2的mRNA表达均为极显著下调(P<0.01),sk MLCK的mRNA表达为极显著上调(P<0.01),其它成分不显著;MEF2C和Ca M的蛋白表达在3个稳转细胞株中均为显著或极显著下调(P<0.05或P<0.01),其他4种成分(p38、Rho A、AMPKα2和sk MLCK)均差异不显著(P>0.05),说明CFL2低表达显著下调信号通路关键成分MEF2C和Ca M的表达,CFL2与Ca M和sk MLCK分别呈显著正相关和负相关。