Emb和EmbC功能结构域对分枝杆菌聚阿拉伯糖合成的影响

本研究通过构建精确保留EmbB的N端跨膜区和EmbC的C端结构域相拼接的杂化质粒,将该质粒导入到embB和embC基因敲除的耻垢分枝杆菌中,观察杂合蛋白表达对这2种菌株细胞壁中阿拉伯糖合成的影响.结果表明,Embs蛋白家族成员N端完整的跨膜区能使其正确地定位于细胞膜,此为其发挥作用的必要前提;尽管Emb家族成员间同源性高,但相互间的定位作用不能替代;Embs蛋白家族成员的C末端是其催化性的结构域,但在发挥作用时,需要其N末端的结构域能使其正确定位.本文通过研究Emb蛋白的功能性结构域,深入探讨Emb蛋白结构与功能间的关系,从而为研发有效的抗结核化合物,克服耐药性结核分枝杆菌提供理论依据.

用PCR方法定向突变结核分枝杆菌glmU基因

目的:结核分枝杆菌glmU基因是分枝杆菌生长必需基因,其编码产物具有乙酰基转移酶活性和尿嘧啶转移酶活性,参与细胞壁前体物UDP-乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc)的生物合成,研究其空间结构可以定向设计酶抑制剂。方法:利用PCR方法定向突变结核分枝杆菌glmU基因,并用大肠杆菌BL21(DE3)高表达m-GlmU蛋白。结果:获得了定向突变的结核分枝杆菌glmU基因,m-glmU。纯化的m-GlmU蛋白仍具有乙酰基转移酶活性和尿嘧啶核苷转移酶活性。结论:纯化的m-GlmU蛋白为进一步研究其稳定性、测定其空间结构提供了物质基础。