ALKBH5去除SCT2的m6A甲基化修饰促进胃癌侵袭的机制研究

目的 评估AlkB同系物5(AlkB homolog 5,ALKBH5)介导的m6A甲基化修饰对胃癌侵袭的影响,并对其机制进行探讨。方法 RT-PCR检测胃癌细胞中ALKBH5和STC2表达。TCGA分析ALKBH5和STC2表达及相关性。在胃癌细胞中敲降ALKBH5,免疫沉淀检测STC2的m6A甲基化表达变化。在胃癌细胞中抑制ALKBH5表达后,检测STC2的表达;在胃癌细胞中抑制ALKBH5后,再过表达STC2,Transwell和划痕实验评估胃癌细胞侵袭能力变化;Western blotting检测EMT相关分子标志物表达变化。结果 与胃黏膜细胞GES-1相比,胃癌细胞中ALKBH5和STC2均高表达(P<0.05);抑制ALKBH5表达后胃癌细胞中STC2表达随之下降;胃癌细胞中抑制ALKBH5表达后,细胞侵袭能力明显减弱(P<0.05),而在此基础上过表达STC2后侵袭能力部分恢复(P<0.05);ALKBH5和STC2协同影响EMT。结论 ALKBH5可通过调控STC2的表达促进胃癌细胞侵袭。

胆囊癌患者胆囊癌组织泛素结合酶E2T蛋白表达及其临床意义探讨

目的探讨胆囊癌患者胆囊组织泛素结合酶E2T(UBE2T)蛋白表达及其临床意义。方法2015年1月~2017年12月收治的胆囊癌患者50例,手术后同时取癌组织和癌旁胆囊组织,另取良性疾病胆囊组织50例,采用Western blot法检测胆囊组织UBE2T蛋白相对表达水平,采用多因素Logistic回归模型分析影响生存的危险因素。结果胆囊癌组织UBE2T蛋白表达量为(2.9±0.4),显著高于癌旁组织(1.5±0.3,P<0.05)或正常胆囊组织(1.7±0.3,P<0.05);不同TNM肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和病理学分级癌组织UBE2T表达差异存在统计学意义(P<0.05);术后中位随访21.0个月,Logrank分析显示,31例UBE2T高表达和19例低表达胆囊癌患者中位生存时间分别为12.0个月和25.0个月(P<0.05);多元Logistic回归分析显示,TNM分期高[OR(95%CI)为1.9(1.5~2.4)]、UBE2T高表达[OR(95%CI)为2.5(2.1~2.9)]、肿瘤浸润程度高[OR(95%CI)为2.3(1.8~3.0)]、淋巴结转移程度高[OR(95%CI)为1.2(1.0~1.8)]、远处转移[OR(95%CI)为2.1(1.7~2.8)]和病理学分级高[OR(95%CI)为1.6(1.3~2.2)]是胆囊癌患者术后生存的危险因素(P<0.05)。结论胆囊癌患者胆囊组织UBE2T蛋白表达显著升高,可能与不良预后相关,有必要进行深入研究。

长链非编码RNA FAL1对胃癌细胞增殖和凋亡能力的影响及机制研究

目的探讨长链非编码RNA FAL1对胃癌增殖和凋亡的影响及机制。方法正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞SGC-7901,BGC-823取自辽宁省肿瘤医院中心实验室,RT-PCR检测细胞中FAL1、STAT3的表达;Western-blot检测STAT3蛋白的表达;在胃癌细胞中抑制FAL1、过表达STAT3,应用CCK-8与Annexin V-FITC PI双染评估细胞增殖和凋亡能力。结果FAL1在人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823中的表达水平高于胃黏膜细胞GES-1中表达,差异有统计学意义(P<0.05)。STAT3在SGC-7901和BGC-823中的表达水平高于GES-1,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后胃癌细胞中FAL1表达水平降低(P<0.05)。胃癌细胞中STAT3的表达水平同样下降(P<0.05)。将si-FAL1#2序列转染SGC-7901和BGC-823细胞后,细胞增殖减缓,在此基础上过表达STAT3,被抑制的细胞的增殖能力部分恢复(P<0.05);细胞早期凋亡明显增加,过表达STAT3后,凋亡细胞降低(P<0.05)。结论FAL1通过上调STAT3的表达促进胃癌细胞增殖并抑制凋亡。

胃肠道间质瘤的基因检测与临床、病理、影像的相关性研究

目的探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)中c-Kit/PDGFRA基因突变、琥珀酸脱氢酶(SDHB)表达缺失与临床病理特征的关系以及MSCT影像学表现在GIST分子诊断过程中的临床应用价值。方法收集2009年1月至2017年10月中经手术病理证实的172例GIST患者的临床、病理和影像学资料,采用直接测序法检测标本中c-Kit/PDGFRA基因突变情况,随后在野生型GIST中应用免疫组织化学染色的方法检测SDHB表达情况。结果与野生型相比,c-Kit/PDGFRA基因突变型GIST更易发生在年龄大的患者、肿瘤坏死及核分裂象易见、危险度分级更高、CD34、CD117及DOG-1的阳性表达率更高(P<0.05)。SDHB缺陷型GIST与野生型相比,较少出现肿瘤坏死及Ki-67增殖指数较低,SDHB缺陷型和SDHB野生型GIST在增强△CT值间的差异显著(P<0.05),SDHB缺陷型的增强△CT值明显高于野生型。而c-Kit/PDGFRA基因是否突变在增强△CT值间的差异不显著,两组平扫期△CT值的对比均无统计学意义(P>0.05)。结论GIST中c-kit/PDGFRA基因的突变与SDHB的表达具有不同的临床及病理学特征,CD34、CD117及DOG1的表达情况可作为预测GIST患者cKit/PDGFRA基因突变的指标。增强△CT值的变化对于MSCT诊断SDHB野生型GIST具有重要的指导意义。

姜黄素对乳腺癌多柔比星耐药性的机制作用研究

目的探讨姜黄素是否通过Akt/Raptor通路调控乳腺癌多柔比星的耐药性。方法将MCF-7/ADR处理后的细胞分为对照组(Control)、姜黄素低剂量组(Curcumin-L)、姜黄素中剂量组(Curcumin-M)和姜黄素高剂量组(Curcumin-H)。MTT法检测耐药细胞对多柔比星的敏感性;CCK-8法检测耐药细胞增殖能力;克隆形成实验检测耐药细胞集落形成能力;Transwell法检测耐药细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测耐药细胞凋亡能力;Western blot实验检测mTOR、Akt、p-mTOR、p-Akt和Raptor蛋白的表达。结果低、中、高剂量的姜黄素均能够抑制MCF-7/ADR细胞存活率和IC50值,抑制MCF-7/ADR细胞集落形成能力,促进MCF-7/ADR细胞凋亡,其中高剂量的姜黄素对MCF-7/ADR作用最为明显。MCF-7/ADR细胞中mTOR、Akt和Raptor蛋白的表达明显高于MCF-7细胞,而且低、中、高剂量的姜黄素均能够抑制MCF-7/ADR细胞中mTOR、Akt和Raptor蛋白的表达,其中高剂量的姜黄素作用效果最为明显。结论姜黄素能够抑制MCF-7/ADR细胞的增殖、侵袭和迁移,促进凋亡,逆转MCF-7/ADR的耐药性,可能与下调Akt和Raptor的表达相关。