Ech1的表达下调对小鼠肝癌淋巴道转移的影响及其可能机制

目的:探讨Ech1表达下调对小鼠肝癌淋巴道转移率的影响,及其与肿瘤相关蛋白Anxa7的相互关系。方法:将Ech1基因表达下调的Hca-F细胞植入小鼠足垫,28天后观察小鼠成瘤及转移情况。在Ech1基因表达下调的Hca-F细胞和对照Hca-F细胞中,通过Western blot检测Anxa7表达变化,同时在Anxa7表达下调Hca-F细胞和对照Hca-F细胞中通过Western blot检测Ech1表达变化。结果:下调Ech1基因的表达,使肿瘤细胞体内淋巴结转移率明显降低。Ech1表达下调后,肿瘤转移相关蛋白Anxa7表达增加;Anxa7表达下调后,Ech1蛋白表达下降。结论:肿瘤细胞Ech1基因表达水平与小鼠肝癌淋巴道转移密切相关,Ech1和Anxa7在Hca-F肿瘤淋巴道转移中可能相互作用。

Sorcin在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中的表达及定位

目的:研究抗药蛋白sorcin(又称可溶性抗药相关蛋白)在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移潜能不同的细胞株Hca-F/Hca-cP中的定位及表达差异,进一步探讨其在肿瘤淋巴道转移中的作用。方法:以小鼠腹水肝癌高淋巴道转移株Hca-F和小鼠腹水肝癌低淋巴道转移株Hca-P为研究对象,采用实时定量PCR技术检测sorcin在Hca-F/Hca-P细胞中基因水平的表达差异;采用Western免疫印迹技术检测sorcin在Hca-F/Hca-P细胞中蛋白水平的表达差异;采用免疫荧光技术检测sorcin在细胞中的定位情况;采用细胞计数试剂盒-8检测肿瘤细胞的增殖能力;应用Transwell小室检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。结果:Hca-F细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力都明显高于Hca-P细胞;sorcin在Hca-F细胞中的基因水平和蛋白水平表达分别为Hca-P细胞的1.5和1.8倍;sorcin在两种小鼠腹水型肝癌细胞株中的定位主要位于细胞质。结论:sorcin在Hca-F中呈高表达,主要定位于细胞质,可能在其增殖、迁移和侵袭过程中发挥重要作用,为进一步探讨其作用机制和功能奠定了基础。

携Gelsolin单抗靶向超声造影剂的制备及体外靶向实验

目的制备一种以肿瘤淋巴转移相关特异性膜抗原蛋白——凝溶胶蛋白(Gelsolin)为靶点的纳米级高分子造影剂,并观察其体外寻靶及显影能力。方法通过改良的双乳化法制备高分子PLGA-COOH造影剂,以碳二亚胺法将造影剂与Gelsolin单抗连接,制备出GSN-PLGA靶向超声造影剂。检测该造影剂的一般性质,评估Gelsolin单抗与造影剂表面连接情况,评价其体外寻靶能力并进行体外显影实验。结果 GSN-PLGA靶向超声造影剂平均粒径为(575.67±4.71)nm,表面电位(-11.46±1.19)mV,造影剂表面GSN单抗结合率达96.93%。体外摄取实验显示细胞表面高表达Gelsolin抗体的小鼠腹水型肝癌高淋巴转移细胞株(Hca-F细胞)可较多摄取GSN-PLGA靶向造影剂。体外显像实验显示靶向超声造影剂体外显影效果较好。结论 GSN-PLGA靶向超声造影剂可与高表达Gelsolin的Hca-F细胞特异性结合,且体外显影效果较好。

肝癌中烯酯酰辅酶A水解酶1的表达及其亚细胞定位

目的探讨烯酯酰辅酶A水解酶1(enoyl coenzyme A hydratase 1,Ech1)表达变化在肝癌中的意义及Ech1的亚细胞定位与肿瘤恶性生物学行为的关系。方法应用免疫组化法检测20例正常肝组织和30例原发性肝癌组织中Ech1的表达;应用亚细胞分离法检测Ech1在Hca-F和FEch1下调细胞的四种不同亚细胞组分中的表达。结果 Ech1在原发性肝癌中的表达高于正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.05);Ech1表达与患者年龄、AFP值及是否伴有肝硬化或伴有病毒性肝炎差异无统计学意义(P>0.05)。Ech1在Hca-F和FEch1下调细胞的四种亚细胞组分中表达均定位于细胞质和细胞膜,并且细胞质表达强于细胞膜,细胞核和细胞骨架部分中不表达。结论 Ech1在肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织,提示其可能与肝癌的发生、发展有关;体外培养细胞中Ech1表达调控对其亚细胞定位的改变没有影响,Ech1对肿瘤恶性生物学行为的影响可能不是通过其亚细胞定位改变而实现的。