罕见B(A)血型的鉴定及临床安全输血的研究

目的鉴定2例B(A)血型及临床安全输血的研究。方法对2例血型进行血型血清学和分子生物学方法进行验证。结果结合ABO基因直接和克隆测序相互验证,排除碱基假突变,与B101等位基因序列相比,均为nt640A>G,其余碱基序列完全一致,但2者各有l条单倍型序列是正常的O01等位基因(nt261G缺失),符合B(A)04/O01的基因型。但是二者血型血清学结果略有区别。结论 B(A)血型是1种非常罕见的ABO亚型,鉴于B(A)亚型的特殊性,在临床定型和配血中,需要血站血型室工作者引起高度的重视,因此对B(A)血型进行家系调查,动员家属,同型互助输血,另外在国内建立罕见亚型档案库,对于有条件的罕见亚型者还可考虑自体冷藏及红细胞冰冻长期保存贮血,更有必要努力的方向是通过新一代高通量测序的方法更深入研究血型的基因多态性。从而建立适合我国人群特征的B(A)血型的安全输血策略,提高临床用血的安全。

ABO血型不合异基因造血干细胞移植后血型转换期的输血策略

背景:造血干细胞移植是目前临床治愈血液系统恶性肿瘤、先天性遗传性疾病以及自身免疫性疾病的重要手段,ABO血型不合的异基因造血干细胞移植并不影响造血干细胞的植活,但ABO血型不合在移植后血型转换期输血时应该制定何种输血策略值得研究。目的:研究ABO血型不合的异基因造血干细胞移植后血型转换期血型抗原抗体的变化及输血时血液的选择策略。方法:应用血型鉴定、抗体检测、抗体效价测定、交叉配血等方法,对24例ABO血型不合的异基因造血干细胞移植患者,在血型转换期进行血型抗原抗体的监测和输血前相容性检测,并与同期30例血型相合的异基因造血干细胞移植患者进行比较,选择适合的血液。结果与结论:24例ABO血型不合患者于移植后全部获得造血重建,但在红系恢复时间上,主要血型不合组和主次要均不合组的时间均有延长,差异均有显著性意义(P<0.05)。根据血型转换期监测的ABO抗原和相应抗体发生的变化,主要ABO血型不合移植者在血型转换期均输注了患者型红细胞;次要血型不合者根据抗原减弱的情况,从输患者型过渡到输供者型红细胞;主次要均不合的患者,从首先输注O型洗涤红细胞再过渡到输注供者型红细胞,24例患者均未发生任何溶血性输血反应。因此ABO血型不合的异基因造血干细胞移植后的输血策略,应根据患者血型转变情况及抗体效价动态变化,权衡所选血型对造血重建的影响,选择合适的血液成分输血,可避免溶血性输血反应且不影响干细胞植活及血型转换时间,保证患者移植安全。

肿瘤干细胞的研究进展

背景:肿瘤干细胞具有高度增殖和分化能力,但又不同于普通干细胞,此类干细胞还具有发展成为肿瘤的特性,因此备受学者们关注。目的:综述近几年来肿瘤干细胞的特性以及与干细胞和肿瘤的关系及其临床意义。方法:应用计算机检索2000-01/2010-11PubMed数据库、中国期刊全文数据库、万方数据库相关肿瘤干细胞的文章,中文检索词为"肿瘤干细胞",英文检索词为"tumorstemcell"。共检索到文献89篇,最终纳入符合标准的30篇文献。结果与结论:目前国内肿瘤干细胞还处于基础研究阶段,国外肿瘤干细胞在实验研究方面已经取得了一定的进展,而且也在临床应用研究方面有一定的突破。普遍认为肿瘤组织中存在肿瘤干细胞,肿瘤干细胞对肿瘤的发生发展和肿瘤治疗都有重要的作用,对肿瘤干细胞治疗肿瘤的临床应用前景也非常乐观,但肿瘤干细胞特征以及与成体干细胞关系仍处于初步研究阶段。

器官移植前保存的理论研究与临床应用

背景:器官移植前的活性是器官移植后功能恢复的关键,也是器官保存医学的难题之一。目的:综述了器官的保存方法、保存液以及各个器官国内外的保存现状,以便寻找不同器官的最佳保存方法和保存液,为器官保存提供理论依据。方法:应用计算机检索万方、维普数据库和PubMed数据库中1998-01/2011-09关于器官移植前保存的文章,在标题和摘要中以"器官;移植;保存"或"organ;transplant;preservation"为检索词进行检索。选择文章内容与器官移植前保存相关,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到186篇文献,根据纳入标准选择20篇文章进行综述。结果与结论:对器官保存方法的了解,有利于根据研究现状选择合适的保存方法。器官保存液是器官活性保持的关键,现存保存液较多,不同保存液对不同的器官保存效果具有一定的差异,通过选择合适的保存液使需要移植的器官保存效果达到最佳,从而使移植后的器官功能恢复的最好。通过对器官移植前保存方法和保存液的研究,了解不同器官的合适的保存方法和保存液将有利于器官保存医学的进一步发展。

辽宁地区血小板志愿捐献者HPA基因资料库的建立

目的对辽宁地区血小板志愿捐献者进行HPA基因分型,建立已知HPA基因型的血小板捐献者资料库。方法采用PCR-SSP方法对随机抽取的130名血小板捐献者进行HPA-1-6和HPA-15抗原系统共14个抗原的基因分型。结果辽宁地区血小板志愿捐献者HPA的基因频率分别是:HPA-1a0.9925、1b0.0075、2a0.9305、2b0.0695、3a0.5810、3b0.4190、4a1.0000、4b0.000、5a0.9810、5b0.0190、6a0.9885、6b0.0115、15a0.4615、15b0.5385。结论辽宁地区血小板志愿捐献者HPA-1—6和HPA-15抗原系统的基因频率符合Hardy-Wein-berg遗传定律,与其它地区和国家的同类资料相比显示出种族和地域性差异,由此建立起了辽宁地区已知HPA基因型的血小板捐献者资料库。

辽宁地区汉族献血人群Diego血型基因频率调查及稀有血型库的建立

目的对辽宁地区汉族献血人群Diego血型基因频率调查,建立辽宁地区稀有血型资料库。方法根据Diego血型的基因序列结构设计引物,优化PCR-SSP基因分型的实验方法,对1 298例辽宁地区汉族献血者血液标本进行Diego血型基因分型,并对其中55例标本进行血清学方法检测加以验证。结果应用已优化的PCR-SSP基因分型方法对1 298例辽宁地区汉族献血人群进行Diego血型的基因分型,其中Di^aDi^a检出1例,占0.08%,Di^aDi^b检出67例,占5.16%,Di^bDi^b检出1 230例,占94.76%。经计算,Di^a基因频率0.026 6,Di^b基因频率0.973 4,χ^2=0.009 8,P>0.05,符合Hardy-Weinberg平衡定律,其中55例标本经血清学方法检测结果完全一致,并由此建立了辽宁地区Diego稀有血型资料库。结论应用PCR-SSP基因分型方法,调查了辽宁地区汉族献血人群Diego血型基因频率,具有本地区本民族的分布特点。建立了辽宁地区Diego稀有血型资料库,进一步保障输血安全。

辽宁地区MN血型系统基因分型方法的建立及频率调查

目的建立MN血型系统基因分型的方法,并进行辽宁地区MN血型系统基因频率的调查。方法根据MN血型系统的基因序列结构,在第2、3外显子设计并合成基因分型上、下游引物,优化各实验条件后,建立聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)基因分型方法,对1 023例辽宁地区汉族无血缘关系的献血者进行MN血型的基因分型。采集的标本类型包括静脉血、血斑、口腔拭子(口腔黏膜脱落细胞),DNA提取分别采用血液基因组DNA提取试剂盒或Chelex-100方法。结果 1 023例辽宁地区汉族献血者MN血型的基因分型全部得出结果,并与血清学分型结果完全一致。其中MM纯合子242例,占23.66%,MN杂合子520例,占50.83%,NN纯合子261例,占25.51%。经计算,M基因频率0.490 7,N基因频率0.509 3,χ2=0.294 8,P>0.05,符合Hardy-Weinberg平衡。结论建立了MN血型系统的PCR-SSP基因分型方法,具有方法稳定、结果可靠,取材广泛等优点,适合于常规应用、法医亲子鉴定和个体识别。MN血型的基因频率存在明显的地域和人群差异,与其他地区和人群相比,辽宁地区汉族人群的MN血型系统基因频率具有本地区的分布特点,可应用于群体遗传学研究、疾病相关性研究等。

CD36基因缺失与同种免疫性血小板减少症关系的研究进展

CD36蛋白在人体中分布广泛,具有重要的生理功能。CD36基因表达缺失者如通过输血、移植或妊娠等途径接触CD36抗原,则可能产生CD36同种抗体,导致同种免疫性血小板减少症、血小板输注无效甚至发生输血反应。本文作者综述了国内外不同地区和人群CD36基因缺失频率和相关同种免疫性血小板减少症以及CD36基因突变、抗原及抗体检测方法。

肠道菌群与人类ABO血型

肠道菌群因与人类健康和疾病密切相关而成为当前生命科学和医学领域的研究热点。近年来,各国多个权威实验室先后报道了肠道菌群与人类ABO血型之间的相互作用。本文首先将对人类肠道菌群的概念、组成、结构及生理功能进行简要介绍,分析肠道菌群相关研究的趋势。其次,将基于现有的研究成果对肠道菌群与人类血型之间的关系进行简要论述,既包含肠道菌群对于人类血型的改变,也包括人类血型对于肠道菌群组成结构的影响。最后,分析当前关于肠道菌群与人类血型的研究成果如何更好地应用于输血科研和输血治疗领域。

序贯法诱导小鼠胚胎干细胞向神经元样细胞的分化

背景:目前小鼠胚胎干细胞体外向神经方向诱导分化的研究报道诸多,但其分化的过程很难控制,很多实验的操作方法复杂,分化比率也很低。目的:建立一种稳定、高效、简便的实验方法,将小鼠胚胎干细胞诱导分化为神经细胞。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-08/2008-01在中国医科大学发育生物学教研室完成。材料:小鼠胚胎干细胞系AB2.1,由美国南加州大学医学院惠赠。方法:在饲养层细胞上培养小鼠胚胎干细胞,采用"序贯诱导法",优化实验条件,将小鼠胚胎干细胞向神经方向诱导,对诱导后细胞进行成熟神经细胞标志物鉴定,并用流式细胞仪测定诱导分化比率。主要观察指标:①倒置荧光显微镜下观察小鼠胚胎干细胞形态特征。②优化序贯诱导法的3个实验条件。③实验条件优化后诱导至第10天分化细胞的形态特征。④诱导后第10天细胞免疫荧光法和蛋白免疫印迹检测神经细胞特异性标志物的表达。⑤蛋白免疫印迹检测诱导分化第4天和第10天细胞的神经细胞β-微管蛋白J1的表达。⑥流式细胞仪检测神经元特异性核蛋白阳性细胞百分比。结果:①生长于饲养层上的未分化鼠胚胎干细胞聚集呈圆形或椭圆形集落样生长,细胞排列紧密,集落边界清楚。②优化后的"序贯诱导法"在诱导时首次接种所用培养液的血清浓度为12.5%,小鼠胚胎干细胞首次接种最佳密度为1.0×108L-1,完全更换为无血清培养液的时间为第5天。③诱导至第10天分化细胞出现的突起可达胞体长度的10倍以上。也有小部分分化细胞胞体呈多边形,有多个短突起,仅有一个细长突起,出现突触样结构和生长端样结构,类似神经元。④诱导后第10天细胞免疫荧光法检测神经元特异性标志物巢蛋白、神经细胞β-微管蛋白J1、神经元特异性核蛋白、神经细胞黏附分子1表达阳性,神经胶质细胞标志物胶质细胞纤维酸性蛋白表达阴性。⑤与未分化鼠胚胎干细胞相比,诱导分化第4天和第10天的细胞蛋白免疫印迹检测神经细胞β-微管蛋白J1表达升高(P<0.05)。⑥流式细胞仪检测神经元特异性核蛋白阳性细胞百分比,计算出诱导第10天胚胎干细胞分化比率为(89.91±2.03)%。结论:应用优化后的"序贯诱导法",可稳定、简便的诱导小鼠胚胎干细胞高比率分化为神经元样细胞。

序列分析及确认HLA新等位基因B*55:46

背景:近几年来,随着中华骨髓库的建立和人类白细胞抗原分型技术的不断发展和提高,中国人类白细胞抗原新等位基因不断被发现。目的:探索中国人的人类白细胞抗原新等位基因。方法:应用PCR-序列特异性寡核苷酸探针基因分型技术,对1名27岁男性汉族造血干细胞志愿捐献者进行HLA基因分型,并应用基于测序的方法分析该基因序列及与最相近等位基因序列的差异。结果与结论:PCR-序列特异性寡核苷酸探针结果显示该样本HLA-B基因座反应格局出现异常提示;基因测序结果表明其B基因座第3外显子序列与所有已知HLA-B等位基因序列均不一致,在所检测的第2、3外显子中,与序列最相近的等位基因B*55:02:01的差异只是在第3外显子发生了nt 412 A→G一个核苷酸替代,导致第138位密码子由AAC→GAC,相应的编码的天冬酰胺改变为天冬氨酸。将其序列提交国际基因数据库及IMGT/HLA数据库,证实该HLA等位基因为国际上首次发现,被世界卫生组织织人类白细胞抗原因子命名委员会正式命名为HLA-B*55:46(HM989018)。

血小板CD36新等位基因1142T>G序列分析及确认

背景:作为血小板上的主要抗原之一,CD36抗原又被称为血小板糖蛋白Ⅳ,其基因变异会导致CD36抗原缺失。目的:序列分析并确认1例CD36抗原新等位基因。方法:提取外周血样本DNA,应用聚合酶链式反应扩增CD36基因的12个编码区序列片段,应用直接测序法对目的片段的序列进行检测。所得序列与基因库中编号为NG_008192的标准序列进行比对分析,以确定新的基因突变。结果与结论:被检样本在第12外显子的1142位发生T>G的碱基突变,其他外显子序列与标准序列一致。检索国际基因数据库Gen Bank和美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI),均未发现关于1142 T>G突变的数据和报道,因此为国际上首次确认,上报Gen Bank获得登录号:KM275213。1142 T>G突变导致第381位氨基酸由亮氨酸(Leu,L)改变为丝氨酸(Ser,S),两者在亲/疏水性和极性上差异较大,且381位氨基酸所在区域为高度保守区域,因此推测该突变会使蛋白活性降低甚至消失。

罕见的45,X/46,X,r(Y)1例

1临床资料．患者男，5岁，于2005年足月刨宫产，重约3900克，系第一胎，生后发现眼球发育异常。查体：小眼球，智力低下，语言障碍，性格暴躁易怒，行为怪异，其余体征均正常。外生殖器为男性，B超显示无隐睾，盆腔内无子宫发育，但是因其年纪尚幼，不能做精子方面的相关检查。患儿父母非近亲婚配，父母智力均正常，染色体核型也正常，

沈阳地区血小板输注无效患者的抗体检测与交叉配型结果分析

背景:随着血小板输注的广泛应用,血小板输注无效患者呈逐年增多的趋势。目的:通过对血小板输注无效患者的血小板抗体和交叉配型情况进行检测分析,为血小板输注无效患者提高输注效果提供参考依据。方法:选取2020年4-12月期间112例血小板输注无效患者,使用血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)进行血小板抗体检测及交叉配型实验。结果与结论:①血小板抗体检测结果:112例患者中有103例血小板抗体检测结果为阳性,阳性率高达92%;②血小板交叉配型结果:有25例患者在交叉配型实验中与供者的血小板均不相合,有18例患者与所有供者的血小板均相合;③血小板抗体检测结果与配型率的关系:血小板抗体检测结果为阴性的血小板配型率为84%、血小板抗体检测结果为1+,2+,3+,4+的血小板配型率分别为75.4%,71.6%,54.6%,27.6%,各组之间差异有显著性意义(P<0.05);④血小板抗体阳性率与患者多次送检的关系:血小板输注次数<2次和≥2次的血小板抗体阳性率分别为90.2%和94.2%,差异无显著性意义(P>0.05);⑤输注配型血小板对患者配型率的影响:在送检次数相同的各组中,初次送检配型率与重复送检配型率差异无显著性意义(P>0.05);在所有重复送检的患者中,初次送检与重复送检的平均配型率分别为41.2%和50.6%,差异无显著性意义(P>0.05);⑥结果表明,血小板抗体检测结果阳性程度越高其配型率越低,患者在输注配型相合血小板后血小板抗体阳性强度未体现有增强的趋势,得到了稳定的输注效果,血小板抗体的准确检测以及输注配型相合血小板对于提高血小板输注疗效具有重要的临床价值。

血小板捐献者HLA资料库的建立

目的建立血小板捐献者HLA基因分型资料库,探讨HLA-A、B基因频率及单体型频率,为临床患者提供HLA匹配的血小板。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物方法和Luminex-SSO方法对730名沈阳地区血小板捐献者进行中低分辨率HLA-A、B基因分型,根据HLA表型群体资料,使用最大数学预期值算法(Expectation-Maximization,EM)计算HLA-A、B座位单体型频率。结果 HLA-A位点共检出15种等位基因,HLA-B位点共检出36种等位基因,单体型数222种。结论为向临床提供HLA匹配的血小板,各地区有必要建立血小板捐献者HLA基因分型资料库。

IgM、IgG抗-Le^b致ABO定型困难1例

Lewis抗体一般为IgM类，在37℃时无活性。抗-Le^b是1种相对罕见的抗体，我们在献血者血清中发现IgM、IgG抗-Le^b不规则抗体1例：现报告如下。

白细胞回收及回收细胞免疫活性检测

目的探讨白细胞滤器中白细胞的回收以及对回收细胞进行免疫活性检测。方法利用一次性滤出白细胞输血器回收外周血白细胞,并对这类细胞进行细胞计数和多项免疫活性检测,并与新鲜外周血进行活性和免疫功能对比研究。结果滤白后的淋巴细胞和新鲜外周血淋巴细胞数量>2×107,活细胞率均达到90%。免疫活性:E花环形成试验:新鲜血Et形成率达60%,白细胞滤器Et形成率40%。Et的判定结果影响较小;新鲜血淋巴细胞Ea形成率达33%,白细胞滤器中淋巴细胞Ea形成率为21%,白细胞滤器和新鲜血Ea形成率差异不具有统计学意义,P>0.05。Ea的结果具有一定的参考价值。NBT还原试验:新鲜血中性粒细胞和白细胞滤器中回收的中性粒细胞的吞噬功能相比,P>0.05。T淋巴细胞转化:白细胞滤器转化率65%,新鲜血中淋巴细胞转化率61%。白细胞滤器回收的白细胞的数量以及免疫活性与新鲜外周血相比,P>0.05。结论白细胞滤器中回收的白细胞具有足够的数量和正常的免疫活性,对血站滤白后白细胞的回收和再利用具有重要的意义。

人脐血单个核细胞体外定向诱导向神经干细胞分化

背景:有文献报道应用不同的诱导剂如细胞生长因子和神经营养因子等,可将人脐血单个核细胞体外诱导为神经干细胞和/或成熟神经细胞,但诱导剂的使用方法以及剂量却各不相同。目的:联合应用不同的诱导剂将人脐血单个核细胞体外诱导分化为神经干细胞,并进行形态学观察和鉴定,以确定最佳诱导剂组合及最佳浓度。设计、时间及地点:观察对比实验,于2007-05/2008-09在辽宁省血液中心输血医学研究所细胞研究中心完成。材料:新鲜脐血来源于足月分娩的健康孕妇。方法:体外分离培养人脐血单个核细胞,在无血清DMEM/F12培养液中添加不同组合的诱导因子进行单个核细胞的诱导,以确定最佳诱导因子组合:①10μg/L神经生长因子(nerve growth factor,NGF)+体积分数为0.01神经营养因子N2+体积分数为0.02神经营养因子B27。②10μg/L NGF+10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)+体积分数为0.01神经营养因子N2+体积分数为0.02神经营养因子B27。③10μg/L bFGF+10μg/L表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)+体积分数为0.01神经营养因子N2+体积分数为0.02神经营养因子B27。④10μg/L bFGF+10μg/L EGF。同时在无血清DMEM/F12培养液中添加不同浓度的bFGF和EGF进行单个核细胞的诱导,以确定最佳诱导浓度:①5μg/L bFGF+5μg/L EGF组。②10μg/L bFGF和10μg/L EGF组。③20μg/L bFGF和20μg/L EGF组。主要观察指标:①倒置荧光显微镜下观察脐血单个核细胞及各诱导剂组诱导分化为神经干细胞的形态特征。②免疫荧光检测10μg/L bFGF和10μg/L EGF组神经干细胞巢蛋白nestin的表达情况。③流式细胞仪检测10μg/L bFGF和10μg/L EGF组诱导第7天和第15天的细胞nestin表达情况。结果:①分离培养的脐血单个核细胞呈散在的圆形生长。②至诱导第7天,分化细胞出现突触样结构和生长端样结构,并可见多个细胞之间形成网络,符合神经干细胞样形态特征。③不同的细胞因子组合诱导的神经干细胞增殖和分化情况不同,含NGF实验组细胞长势相对最差,含bFGF和EGF实验组的细胞长势最旺盛,胞体较大而圆,细胞突起也粗大,呈三角形或锥形,突触样结构和生长端样结构明显可见,为最佳诱导因子组合。④10μg/L bFGF+10μg/L EGF组的细胞密度适中,伸出突起明显,神经细胞形态最特异,培养周期最短,为最适实验浓度。⑤细胞免疫荧光检测10μg/L bFGF+10μg/L EGF组诱导第7天细胞nestin阳性。⑥流式细胞仪分别检测对照组和10μg/L bFGF+10μg/L EGF组诱导第7天、第15天nestin阳性细胞数,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:联合应用10μg/L bFGF和10μg/L EGF可较短时间内定向将人脐血单个核细胞体外诱导分化为神经干细胞。