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题名RNA干扰抑制肝癌细胞KDR基因表达的实验研究
被引量:1
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作者
刘颖
崔广凯
王晶岩
王杰
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机构
辽宁省辽阳石油化纤公司职工医院急诊科
沈阳医学院生化教研室
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出处
《中国厂矿医学》
2009年第6期644-646,共3页
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文摘
目的通过研究RNA干扰(RNAi)对肝癌细胞激酶功能区受体(kinase domain receptor,KDR)基因表达的抑制,为肝癌基因治疗提供理论依据。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测KDR在肝癌细胞系HHCC、HepG2、Hep-6及正常肝细胞L-02的表达情况,筛选KDR高表达细胞株。设计构建针对KDR的靶向小干扰RNA(siRNA)质粒载体,通过脂质体转染高表达细胞株HHCC,观察其干扰效果。细胞计数法观察KDR-siRNA对HHCC细胞生长的影响。结果酶切鉴定、DNA测序分析证实重组质粒构建成功,分别命名为KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3。荧光定量PCR结果显示:3个KDR-siRNA转染的HHCC细胞株KDR的表达明显受到抑制,抑制率分别为68.86%、82.63%和64.47%,其中KDR-siRNA2抑制作用最为明显;转染阳性和阴性对照组载体的HHCC细胞和未转染的HHCC细胞生长趋势较为一致,且生长速度明显高于转染3种KDR-siRNA表达载体的HHCC。从接种第2天开始,KDR-siRNA转染组与对照组比较,细胞增殖明显受到抑制(P<0.01)。结论KDR靶向RNAi重组质粒载体能有效抑制肝癌HHCC细胞KDR基因的表达和细胞增殖,为探索KDR介导的肿瘤基因治疗的新途径奠定了实验基础。
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关键词
激酶功能区受体
RNA干扰
小干扰RNA
逆转录聚合酶链反应
实时定量聚合酶链反应
肝癌细胞株
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Keywords
kinase domain receptor
RNA interference
Small interfering RNA
Reverse transcription-polymerase chain reaction
Realtime quantitative polymerase chain reaetion
HepatocelluIar carcinoma cell lines
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分类号
R735.7
[医药卫生—肿瘤]
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