犬细小病毒VP2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与检测

为表达犬细小病毒VP2蛋白(CPVVP2),用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2蛋白功能研究,根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增,把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体PGEX-6P-1,再将构建成功的原核表达质粒载体PGEX-6P-VP2转化至大肠杆菌BL21中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1755bp,与6个VP2基因序列的同源性为98.7%～99.7%。Western-blotting分析显示,表达产物约为90kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。

重组奶牛神经肽Y基因的原核表达及生物活性检测

为了深入了解神经肽Y在奶牛摄食过程中所起到的作用和体内其他生物分子之间的相互作用,本试验利用分子生物学技术,从荷斯坦公牛犊的下丘脑中克隆得到神经肽Y基因,通过测序表明,与GenBank上所列神经肽Y基因序列完全一致。然后利用原核表达系统,构建原核表达载体pGEX-3X-NPY。在DE3菌中进行了诱导表达,对表达产物进行检测、条件优化和初步纯化。并经生物学活性检测,重组蛋白对鸡胚血管生成的刺激作用明显,表明重组神经肽Y具有生物学活性。