LncRNA-HULC通过稳定SIRT1蛋白调控肝癌Hep G2细胞自噬和化疗耐药的机制

目的探讨长链非编码RNA肝癌高表达转录本(highly up-regulated in liver cancer,LncRNA-HULC)通过稳定沉默信号调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)蛋白调控肝癌Hep G2细胞自噬和化疗耐药的机制。方法将实验Hep G2细胞分为3组:对照组(NOR组)、基因过表达组(O-HULC组)和基因抑制组(S-HULC组)。NOR组正常培养传代,O-HULC组转染HULC基因,S-HULC组将HULC基因抑制。应用免疫印迹法测定蛋白表达量,应用RT-QPCR法检测基因表达量。结果各组的肝癌Hep G2细胞自噬情况随药物添加时间延长而增加,凋亡率逐渐升高,与S-HULC组相比,O-HULC组和NOR组肝癌Hep G2细胞自噬情况显著增加,凋亡率降低,其中O-HULC组自噬情况高于NOR组,凋亡率低于NOR组(P<0.05)。与S-HULC组相比,NOR组和O-HULC组肝癌Hep G2细胞迁移数量和侵袭数量显著增加,其中O-HULC组显著高于NOR组(P<0.05)。与S-HULC组相比,NOR组和O-HULC组的泛素水解酶22(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 22,USP22)、SIRT1、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(Microtubule-associated protein1 light chain3,LC3-Ⅱ)蛋白表达量升高,其中O-HULC组均高于NOR组(P<0.05)。结论LncRNA-HULC可以稳定SIRT1调控细胞自噬降低细胞对化疗药物的敏感性,可能与信号通路“HULC-USP22-SIRT1/COX-2-LCⅡ”有关,此通路可能是开发肝癌化疗新增敏策略的新靶点。

锌指E盒结合同源盒1通过抑制sirtuin3影响结肠癌细胞能量代谢和转移复发的机制

目的探讨锌指E盒结合同源盒1通过抑制sirtuin3影响结肠癌细胞能量代谢和转移复发的机制。方法使用慢病毒介导的方法沉默锌指E盒结合同源盒1(ZEB1),并使用海马细胞通量分析仪测量ZEB1和甲基CpG结合域蛋白1(MBD1)对有氧糖酵解的影响,反应性氧种类和线粒体膜电位。ZEB1和MBD1之间的相互作用通过免疫共沉淀和免疫荧光测定法进行评估。ZEB1和MBD1相互作用对sirtuin 3(SIRT3)表达的影响通过定量聚合酶链反应、Western印迹、双荧光素酶和染色质免疫沉淀法验证。结果ZEB1是胰腺癌中有氧糖酵解的正向调节剂。ZEB1通过与MBD1的相互作用使SIRT3转录沉默。结论SW620癌细胞中的ZEB1通过与MBD1相互作用沉默SIRT3表达,从而导致线粒体能量代谢功能障碍,最终影响细胞转移复发,可能是细胞对治疗更加敏感的治疗策略。