高良姜素减轻非酒精性脂肪肝大鼠肝脂肪变性和纤维化的机制研究

目的探究高良姜素(galangin)减轻非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脂肪变性和纤维化的机制。方法采用随机数字表法将60只大鼠分为对照组(NC组)、高脂组(H组)、高良姜素低剂量组(H+Gal L组)、高良姜素中剂量组(H+Gal M组)和高良姜素高剂量组(H+Gal H组),每组各12只。NC组大鼠喂以普通饲料,其余各组均喂以高脂饲料。连续喂养8周建立NAFLD模型。第9周开始灌胃给药,H+Gal L组、H+Gal M组、H+Gal H组分别给予含25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg 0.9%氯化钠溶液溶解的高良姜素;NC组、H组灌胃等量的0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续4周。给药结束后,观察大鼠一般情况及检测肝功能指标;HE染色观察大鼠肝脏组织病理学变化;油红O染色观察大鼠肝脏组织脂肪沉积情况;Masson染色观察大鼠肝脏组织纤维化情况;RT-qPCR检测肝脏组织脂质合成相关基因的表达;Western-blot检测肝脏组织纤维化相关蛋白、AMPK蛋白表达。将LX-2细胞分为NC组、H组、H+Gal L组、H+Gal M组和H+Gal H组。除NC组外,其余各组采用0.6 mmol/L油酸处理8 h诱导细胞脂质沉积,NC组加入等量0.9%氯化钠溶液;随后H+Gal L组、H+Gal M组和H+Gal H组培养基中分别加入25、50、100μM的高良姜素培养24 h。造模结束后,CCK-8法检测LX-2细胞毒性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;检测LX-2细胞甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;油红O染色观察LX-2细胞脂肪沉积;RT-qPCR检测LX-2细胞脂质合成相关基因的表达;Western-blot检测LX-2细胞纤维化相关蛋白、AMPK蛋白表达。结果NC组大鼠毛色顺滑有光泽,精神状态好,体重稳定增加,肝细胞内未见脂滴和胶原沉积;与NC组相比,H组大鼠毛色暗淡无光泽,精神萎靡,体重快速增加,肝细胞内存在大量脂滴和胶原沉积;肝湿质量、TG、TC、AST、ALT水平,胆固醇调节元件结合蛋白-1C(SREBP-1c)、脂肪酸合酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)mRNA水平,Collagen-I、α-SMA蛋白水平明显升高,p-AMPK/AMPK蛋白水平明显降低(P<0.05);与H组相比,H+Gal L组、H+Gal M组、H+Gal H组毛色逐渐润泽,精神较充沛,体重缓慢增加,肝细胞内存在少量脂滴和胶原沉积;肝湿质量、TG、TC、AST、ALT水平,SREBP-1c、FAS、ACC mRNA水平,Collagen-I、α-SMA蛋白水平明显降低,p-AMPK/AMPK蛋白水平明显升高(P<0.05),且呈高良姜素剂量依赖性。当高良姜素浓度小于100μM时不会造成细胞毒性。NC组细胞内内未见脂滴;与NC组相比,H组细胞存在大量脂滴;细胞凋亡水平,TG、TC水平,SREBP-1c、FAS、ACC mRNA水平,Collagen-I、α-SMA蛋白水平明显升高,p-AMPK/AMPK蛋白水平明显降低(P<0.05);与H组相比,H+Gal L组、H+Gal M组、H+Gal H组细胞存在少量脂滴;细胞凋亡水平,TG、TC水平,SREBP-1c、FAS、ACC mRNA水平,Collagen-I、α-SMA蛋白水平明显降低,p-AMPK/AMPK蛋白水平明显升高(P<0.05),且呈高良姜素剂量依赖性。结论高良姜素能够减轻NAFLD大鼠肝脂肪变性和纤维化,促进大鼠肝功能恢复,其几只可能通过激活AMPK信号通路而发挥作用。